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公開番号2025023347
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-02-14
出願番号2024215074,2021139172
出願日2024-12-10,2021-08-27
発明の名称RNAの保存方法
出願人花王株式会社
代理人弁理士法人アルガ特許事務所
主分類C12N 15/10 20060101AFI20250206BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】皮膚表上脂質由来RNAを安定に保存するための方法の提供。
【解決手段】皮膚表上脂質を含む採取媒体を、水又はアルコール水溶液を溶媒とするグアニジン塩酸塩及びグアニジンチオシアン酸塩からなる群より選択される少なくとも1種を含む水溶液で処理することを含む、皮膚表上脂質由来RNAの分解防止方法。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
皮膚表上脂質由来ＲＮＡの分解防止方法であって、
皮膚表上脂質を含むシート状皮膚表上脂質吸収性素材を、水又はアルコール水溶液を溶媒とするグアニジン塩酸塩及びグアニジンチオシアン酸塩からなる群より選択される少なくとも１種を含む水溶液で処理すること、
さらに、該水溶液で処理したシート状皮膚表上脂質吸収性素材を乾燥させること、
を含む、方法。
続きを表示（約 490 文字）【請求項２】
皮膚表上脂質由来ＲＮＡの保存方法であって、
皮膚表上脂質を含むシート状皮膚表上脂質吸収性素材を、水又はアルコール水溶液を溶媒とするグアニジン塩酸塩及びグアニジンチオシアン酸塩からなる群より選択される少なくとも１種を含む水溶液で処理すること、
さらに、該水溶液で処理したシート状皮膚表上脂質吸収性素材を乾燥させること、及び、
該乾燥させたシート状皮膚表上脂質吸収性素材を保存すること、
を含む、方法。
【請求項３】
前記溶媒が、アルコールの濃度が２０体積％以上７０体積％以下のアルコール水溶液である、請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
前記水溶液中における前記グアニジン塩酸塩及びグアニジンチオシアン酸塩からなる群より選択される少なくとも１種の濃度が０．５０ｇ／ｍＬ以上である、請求項１～３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
前記処理が、前記皮膚表上脂質を含むシート状皮膚表上脂質吸収性素材に前記水溶液を浸透させることを含む、請求項１～４のいずれか１項記載の方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＲＮＡの保存方法に関する。
続きを表示（約 2,800 文字）【背景技術】
【０００２】
ＤＮＡ、ＲＮＡなどの生体由来の核酸の解析により、生体の生理状態を含む様々な情報を獲得することができる。生体由来の核酸は、細胞、組織、体液、分泌物などの生体由来の試料から抽出することができる。特許文献１には、皮膚表上脂質（ｓｋｉｎｓｕｒｆａｃｅｌｉｐｉｄｓ；ＳＳＬ）にＲＮＡが含まれており、該ＳＳＬ由来ＲＮＡを生体の解析に用いることができることが記載されている。しかし、ＳＳＬに含まれるＲＮＡの量は微量であるため、生体から採取したＳＳＬからできるだけ高収量でＲＮＡを抽出することが求められる。
【０００３】
生体由来の核酸の中でも、ＲＮＡは、ＤＮＡと比較して不安定であり分解されやすい。さらに、ＲＮＡ分解酵素であるリボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）は、細胞及び組織中だけでなく、汗、唾液などの体液、及び環境中にも広く存在する。従来、生体試料中のＲＮＡの分解を防止するためには、採取した試料からＲＮＡを直ちに抽出する、試料中もしくは抽出したＲＮＡを－８０℃で保存する、又はＲＮａｓｅ阻害剤を使用する、などの手段がとられている。例えば、グアニジン塩などのカオトロピック塩を生体試料に添加することにより、試料中のＲＮａｓｅを含む蛋白質を変性させてＲＮａｓｅを不活性化させることができる。ただしカオトロピック塩を添加した場合でも、周囲温度下ではＲＮＡの分解は完全には防止できないことから、試料中もしくは抽出したＲＮＡは－８０℃で保存されるのが通常である。
【０００４】
特許文献２には、生体試料にチオシアン酸グアニジン、塩酸グアニジン、チオシアン酸カリウム、チオシアン酸ナトリウム、尿素などの蛋白質変性剤を添加して、細胞膜や細胞壁等を破壊し、蛋白質を変性させて核酸だけを遊離させる工程と、アルコール類を添加して遊離した核酸を凝集させる工程と、得られた核酸含有抽出物をフィルターに通過させて核酸をフィルターに捕集させる工程と、精製水あるいは低濃度の緩衝液により核酸を可溶化させフィルターから回収する工程とからなる、核酸の簡易抽出法が記載されている。
特許文献３には、フェノール及びチオシアン酸グアニジンを含有するＲＮＡ抽出用薬剤を用いて乳からＲＮＡを抽出した後、速やかに－８０℃に冷凍することにより、乳からのＲＮＡサンプルの３日以上の長期保存が可能となることが記載されている。
特許文献４には、グアニジニウム塩酸塩、チオシアン酸グアニジニウム、アルギニン、ＳＤＳ、尿素などのタンパク質変性剤、還元剤、及び緩衝剤を含む組成物が乾燥状態で存在する固体マトリクスを適用して、試料から核酸を収集し、該固体マトリクスを乾燥し、周囲条件下において核酸を乾燥状態で該固体マトリクス上に貯蔵する、核酸を試料から抽出し貯蔵する方法が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
国際公開公報第２０１８／００８３１９号
特開２００９－１５３４６７号公報
特開２０００－２６４８９８号公報
特開２０１８－６８３０３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、被験体から採取した皮膚表上脂質（ＳＳＬ）に含まれるＲＮＡの分解を防止し、該ＲＮＡを安定に保存するための方法に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、採取媒体により被験体からＳＳＬを採取した後、該ＳＳＬを含む採取媒体を、水又はアルコール水溶液を溶媒とするグアニジン塩酸塩及びグアニジンチオシアン酸塩からなる群より選択される少なくとも１種を含む水溶液で処理することにより、該ＳＳＬに含まれるＲＮＡの分解を防止し、該ＲＮＡを安定に保存することが可能であることを見出した。
【０００８】
したがって、本発明は、皮膚表上脂質由来ＲＮＡの分解防止方法であって、皮膚表上脂質を含む採取媒体を、水又はアルコール水溶液を溶媒とするグアニジン塩酸塩及びグアニジンチオシアン酸塩からなる群より選択される少なくとも１種を含む水溶液で処理することを含む、方法を提供する。
また本発明は、皮膚表上脂質由来ＲＮＡの保存方法であって、
皮膚表上脂質を含む採取媒体を、水又はアルコール水溶液を溶媒とするグアニジン塩酸塩及びグアニジンチオシアン酸塩からなる群より選択される少なくとも１種を含む水溶液で処理すること、及び、
該処理した採取媒体を保存すること、
を含む、方法を提供する。
また本発明は、皮膚表上脂質を採取するための採取媒体、ならびに、
該採取媒体を処理するための、水又はアルコール水溶液を溶媒とするグアニジン塩酸塩及びグアニジンチオシアン酸塩からなる群より選択される少なくとも１種を含む水溶液、を備える、皮膚表上脂質由来ＲＮＡの採取用キットを提供する。
また、本発明は、被験体の皮膚表上脂質由来ＲＮＡの回収方法であって、
皮膚表上脂質由来ＲＮＡの採取を必要とする又は希望する被験体に、皮膚表上脂質を採取するための採取媒体、ならびに、該採取媒体を処理するための、水又はアルコール水溶液を溶媒とするグアニジン塩酸塩及びグアニジンチオシアン酸塩からなる群より選択される少なくとも１種を含む水溶液を備える、前記皮膚表上脂質由来ＲＮＡの採取用キットを提供すること、及び、
該被験体から採取した皮膚表上脂質を含む該採取媒体を、該被験体から回収すること、を含み、
ここで、回収した皮膚表上脂質を含む該採取媒体は、前記皮膚表上脂質由来ＲＮＡの分解防止方法又は保存方法に従って、該水溶液により処理されており、かつ該被験体の皮膚表上脂質を採取後、周囲温度にて保存されている、
方法を提供する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の方法によれば、被験体から採取したＳＳＬに含まれるＲＮＡの分解を防止し、該ＲＮＡを安定に保存することができる。本発明によれば、分解しやすく取り扱いが困難なＲＮＡを周囲温度下で保存することを可能にする。また本発明によれば、ＳＳＬからのＲＮＡの収量、及び該ＲＮＡを用いた各種解析の精度を向上させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
本発明のＳＳＬ由来ＲＮＡの採取用キットに用いられる、採取媒体を保存するための容器の一例を示す図である。Ａ：側面図（左）とその断面図（右）、Ｂ：上方斜視図（左）とその断面図（右）。
ＳＳＬ由来ＲＮＡを含む採取媒体及び乾燥剤を収納した状態の図１の容器の一例を示す図である。
【発明を実施するための形態】
（【００１１】以降は省略されています）

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