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公開番号2024044204
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-04-02
出願番号2022149604
出願日2022-09-20
発明の名称抗SARS-CoV-2抗体
出願人国立大学法人富山大学,富山県,学校法人関西医科大学
代理人個人,個人,個人,個人,個人,個人,個人,個人,個人
主分類C12N 15/13 20060101AFI20240326BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】SARS-CoV-2のスパイクタンパク質に結合する新規で有効な抗体の提供。
【解決手段】以下の組み合わせの相補性決定領域(CDR)を有し,かつ,SARS-CoV-2スパイクタンパク質に結合する抗体又はその抗原結合性断片を提供する:特定のアミノ酸配列からなるCDRH1,2,3,CDRL1,2,及び3。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
以下のいずれかの組み合わせの相補性決定領域（ＣＤＲ）を有し，かつ，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質又はＲＢＤに結合する抗体又はその抗原結合性断片：
（１）ＧＦＲＦＳＩＳＡ（配列番号２）のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１，
ＩＶＶＧＳＧＤＴ（配列番号３）のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２，及び
ＡＡＰＹＣＧＧＤＣＳＤＧＦＤＩ（配列番号４）のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３，並びに，
ＱＳＶＳＳＳＹ（配列番号５）のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１，
ＧＡＳ（配列番号６）のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２，及び
ＱＱＹＧＮＳＰＷＴ（配列番号７）のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３；
（２）ＧＦＴＦＳＩＳＡ（配列番号３０）のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１，
ＩＶＶＧＳＧＤＴ（配列番号３１）のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２，及び
ＡＡＰＹＣＧＧＤＣＳＤＧＦＤＩ（配列番号３２）のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３，並びに，
ＱＳＶＳＳＳＹ（配列番号３３）のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１，
ＧＡＳ（配列番号３４）のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２，及び
ＱＱＹＧＮＳＰＷＴ（配列番号３５）のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３。
続きを表示（約 1,100 文字）【請求項２】
以下から選択されるいずれかの組み合わせの可変領域を有する抗体又はその抗原結合性断片：
（１）配列番号１６に記載されたアミノ酸配列を有するＶＨ，及び，配列番号１７に記載されたアミノ酸配列を有するＶＬ；
（２）配列番号３８に記載されたアミノ酸配列を有するＶＨ，及び，配列番号３９に記載されたアミノ酸配列を有するＶＬ。
【請求項３】
以下から選択されるいずれかの組み合わせの重鎖及び軽鎖を有する，請求項２に記載の抗体又はその抗原結合性断片：
（１）配列番号２２に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖，及び，配列番号２３に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖；
（２）配列番号４０に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖，及び，配列番号４１に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖。
【請求項４】
請求項１に記載の抗体の重鎖及び／若しくは軽鎖，又はそれらの抗原結合性断片のアミノ酸配列をコードする核酸分子。
【請求項５】
以下の群から選択されるいずれか１つのポリヌクレオチドを含有する，請求項４に記載の核酸分子：
（１）配列番号１４に記載のヌクレオチド配列を有するＶＨをコードするポリヌクレオチド，及び／又は，配列番号１５に記載のヌクレオチド配列を有するＶＬをコードするポリヌクレオチド；
（２）配列番号３６に記載のヌクレオチド配列を有するＶＨをコードするポリヌクレオチド，及び／又は，配列番号３７に記載のヌクレオチド配列を有するＶＬをコードするポリヌクレオチド。
【請求項６】
以下の群から選択されるいずれか１つのポリヌクレオチドを含有する，請求項４に記載の核酸分子：
（１）配列番号２６に記載のヌクレオチド配列を有する重鎖をコードするポリヌクレオチド，及び／又は，配列番号２７に記載のヌクレオチド配列を有する軽鎖をコードするポリヌクレオチド；
（２）配列番号４２に記載のヌクレオチド配列を有する重鎖をコードするポリヌクレオチド，及び／又は，配列番号４３に記載のヌクレオチド配列を有する軽鎖をコードするポリヌクレオチド。
【請求項７】
請求項４～６のいずれか１項に記載の核酸分子を有するベクター。
【請求項８】
請求項７に記載のベクターを有する宿主細胞。
【請求項９】
請求項８に記載の宿主細胞を培養することを含む，請求項１に記載の抗体又はその抗原結合性断片の製造方法。
【請求項１０】
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質又はＲＢＤとＡＣＥ２との結合を阻害するための，請求項１に記載の抗体又はその抗原結合性断片を含有する組成物。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は，新型コロナウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２，特にオミクロン株のスパイクタンパク質に結合する抗体及びその抗原結合性断片に関する。
続きを表示（約 3,400 文字）【背景技術】
【０００２】
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は，２０１９年末に中国の武漢で初めて報告され，その後中国全土，さらには世界中に広く拡大したコロナウイルスの一種である。ＣＯＶＩＤ－１９と呼ばれるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症は，患者のほとんどおいて軽度から中等度の症状である一方で，一部の患者においては重症化して死亡に至るという特徴を有する。現在までに，ワクチンが開発及び承認され，各国で接種が始まっているが，ワクチン接種後の感染事例も報告されており（非特許文献１），ワクチンが完全にウイルス感染を抑制するわけではないと考えられている。
【０００３】
ワクチンの開発と並行して，ＣＯＶＩＤ－１９治療薬の開発も進められており，治療用抗体についても報告されている（特許文献１）。本発明者らはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＢＤ（Ｒｅｃｅｐｔｏｒｂｉｎｄｉｎｇｄｏｍａｉｎ）とホスト側のＡＣＥ２（Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ－ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇｅｎｚｙｍｅ２）との結合を阻害することができ，高い中和活性を有するＩＧＨＶ１－５８パブリック抗体であるＵＴ２８Ｋ抗体（以下，単にＵＴ２８Ｋとも称する）を開発し，報告している（非特許文献２）。しかし，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２には複数の変異株が報告されており，中和抗体耐性の株も出現している。特にオミクロン株に対して強い効果を有する治療用抗体が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
国際公開ＷＯ２０２１／０４５８３６号
【非特許文献】
【０００５】
ＪｏｃｅｌｙｎＫｅｅｈｎｅｒ，Ｍ．Ｄ．ら，ＴｈｅＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ；Ｍａｒｃｈ２３，２０２１ＤＯＩ：１０．１０５６／ＮＥＪＭｃ２１０１９２７
Ｏｚａｗａ，Ｔａｔｓｕｈｉｋｏら，ＭＡｂｓ．２０２２Ｊａｎ－Ｄｅｃ；１４（１）：２０７２４５５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する抗体（以下，「抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体」という）であって，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質に結合し，特には，感染・伝播性の増加や抗原性の変化が懸念されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異株に結合することで，それらのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２とＡＣＥ２との結合を阻害する抗体，又はそれらのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の細胞内への侵入を阻害する抗体を提供することを課題とする。特にオミクロン株に対しても強い中和活性を有する抗体を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
高い中和活性を有するＵＴ２８ＫとＲＢＤの立体構造解析（非特許文献２）により，ＵＴ２８Ｋの重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）に位置するＳ５５とＮ５７が，ＲＢＤのＱ４９３と水素結合を形成していることが明らかになっている（図１）。オミクロン株では，Ｑ４９３がＲに変異することで，水素結合の喪失とＨＣＤＲ２のＳ５５，Ｎ５７と立体的な障害がおこり，Ｑ４９３Ｒと結合できなくなり，その結果，ＵＴ２８Ｋのオミクロン株に対する中和活性が弱くなることが示唆されている（非特許文献２）。そこで，本発明者らは，ＨＣＤＲ２のＳ５５及びＮ５７を改変させることで，オミクロン株に対する活性が回復できないかと考えた。
【０００８】
また，本発明者らは，ＨＣＤＲ２のＳ５５及びＮ５７以外の部位の改変についても解析を進めた結果，オミクロン変異株に対しても強い中和活性を有し，かつ感染抑制効果を有する抗体を見出すことに成功した。
【０００９】
よって，本発明は，オミクロン変異株に対しても強い中和活性を有し，かつ感染抑制効果を有する抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体又はその抗原結合性断片及び当該抗体を有効成分として含有する治療薬，診断薬，及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２検出用組成物等に関する。
即ち，本発明は，以下を提供する。
［１］以下のいずれかの組み合わせの相補性決定領域（ＣＤＲ）を有し，かつ，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質又はＲＢＤに結合する抗体又はその抗原結合性断片：
（１）ＧＦＲＦＳＩＳＡ（配列番号２）のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１，
ＩＶＶＧＳＧＤＴ（配列番号３）のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２，及び
ＡＡＰＹＣＧＧＤＣＳＤＧＦＤＩ（配列番号４）のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３，並びに，
ＱＳＶＳＳＳＹ（配列番号５）のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１，
ＧＡＳ（配列番号６）のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２，及び
ＱＱＹＧＮＳＰＷＴ（配列番号７）のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３；
（２）ＧＦＴＦＳＩＳＡ（配列番号３０）のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１，
ＩＶＶＧＳＧＤＴ（配列番号３１）のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２，及び
ＡＡＰＹＣＧＧＤＣＳＤＧＦＤＩ（配列番号３２）のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３，並びに，
ＱＳＶＳＳＳＹ（配列番号３３）のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１，
ＧＡＳ（配列番号３４）のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２，及び
ＱＱＹＧＮＳＰＷＴ（配列番号３５）のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３。
［２］以下から選択されるいずれかの組み合わせの可変領域を有する抗体又はその抗原結合性断片：
（１）配列番号１６に記載されたアミノ酸配列を有するＶＨ，及び，配列番号１７に記載されたアミノ酸配列を有するＶＬ；
（２）配列番号３８に記載されたアミノ酸配列を有するＶＨ，及び，配列番号３９に記載されたアミノ酸配列を有するＶＬ。
［３］以下から選択されるいずれかの組み合わせの重鎖及び軽鎖を有する，上記［２］に記載の抗体又はその抗原結合性断片：
（１）配列番号２２に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖，及び，配列番号２３に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖；
（２）配列番号４０に記載されたアミノ酸配列を有する重鎖，及び，配列番号４１に記載されたアミノ酸配列を有する軽鎖。
［４］上記［１］に記載の抗体の重鎖及び／若しくは軽鎖，又はそれらの抗原結合性断片のアミノ酸配列をコードする核酸分子。
［５］以下の群から選択されるいずれか１つのポリヌクレオチドを含有する，上記［４］に記載の核酸分子：
（１）配列番号１４に記載のヌクレオチド配列を有するＶＨをコードするポリヌクレオチド，及び／又は，配列番号１５に記載のヌクレオチド配列を有するＶＬをコードするポリヌクレオチド；
（２）配列番号３６に記載のヌクレオチド配列を有するＶＨをコードするポリヌクレオチド，及び／又は，配列番号３７に記載のヌクレオチド配列を有するＶＬをコードするポリヌクレオチド。
【００１０】
［６］以下の群から選択されるいずれか１つのポリヌクレオチドを含有する，上記［４］に記載の核酸分子：
（１）配列番号２６に記載のヌクレオチド配列を有する重鎖をコードするポリヌクレオチド，及び／又は，配列番号２７に記載のヌクレオチド配列を有する軽鎖をコードするポリヌクレオチド；
（２）配列番号４２に記載のヌクレオチド配列を有する重鎖をコードするポリヌクレオチド，及び／又は，配列番号４３に記載のヌクレオチド配列を有する軽鎖をコードするポリヌクレオチド。
［７］上記［４］～［６］のいずれかに記載の核酸分子を有するベクター。
［８］上記［７］に記載のベクターを有する宿主細胞。
［９］上記［８］に記載の宿主細胞を培養することを含む，上記［１］に記載の抗体又はその抗原結合性断片の製造方法。
［１０］ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質又はＲＢＤとＡＣＥ２との結合を阻害するための，上記［１］に記載の抗体又はその抗原結合性断片を含有する組成物。
（【００１１】以降は省略されています）

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