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公開番号2025032006
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-03-07
出願番号2024231646,2022502941
出願日2024-12-27,2020-01-24
発明の名称組換え修飾アデノ随伴ウイルスのパッケージング効率を改善するための組換え修飾アデノ随伴ウイルスヘルパーベクターおよびそれらの使用
出願人チャールズ・リバー・ラボラトリーズ・インコーポレーテッド
代理人個人,個人
主分類C12N 15/864 20060101AFI20250228BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】組換え型アデノ随伴ウイルス(rAAV)のパッケージング効率を高めることができる組換え型アデノ随伴ウイルス(AAV)ヘルパーベクター、およびそのようなrAAVのパッケージング効率を改善するためにそれらを使用した方法の提供。
【解決手段】rAAVによってコードされるRepタンパク質と天然に会合するP5および/またはP40プロモーター配列を、異なる血清型のrAAVのRepタンパク質と会合するAAV P5および/またはP40プロモーターと置換(または増強)するようにさらに改変された組換え改変アデノ随伴ウイルス(AAV)ヘルパーベクター。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
ＡＡＶヘルパー機能提供ポリヌクレオチドを含む組換え改変アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ヘルパーベクターであって、前記ポリヌクレオチドが、ＡＡＶｒｅｐ遺伝子と、ＡＡＶＰ５および／またはＰ４０プロモーター配列とを含み、
前記ＡＡＶＰ５および／またはＰ４０プロモーター配列の由来元となるＡＡＶの血清型は、前記ＡＡＶｒｅｐ遺伝子の由来元となるＡＡＶの血清型と異なる、組換え改変アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ヘルパーベクター。
続きを表示（約 1,800 文字）【請求項２】
前記ＡＡＶヘルパー機能提供ポリヌクレオチドベクターが前記ＡＡＶＰ５プロモーター配列を含む、請求項１に記載の組換え改変アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ヘルパーベクター。
【請求項３】
前記ＡＡＶヘルパー機能提供ポリヌクレオチドベクターが前記ＡＡＶＰ４０プロモーター配列を含む、請求項１に記載の組換え改変アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ヘルパーベクター。
【請求項４】
前記ベクターがプラスミドベクターである請求項１に記載の組換え改変アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ヘルパーベクター。
【請求項５】
前記ＡＡＶＰ５および／またはＰ４０プロモーター配列が天然ＡＡＶ血清型プロモーター配列を置換する、請求項１に記載の組換え改変アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ヘルパーベクター。
【請求項６】
請求項１に記載の組換え改変アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ヘルパーベクターであって：
（Ａ）前記ＡＡＶｒｅｐ遺伝子は、ＡＡＶ血清型１であり、前記ＡＡＶＰ５および／またはＰ４０プロモーター配列は、ＡＡＶ血清型２、７、または８に由来するＡＡＶＰ５プロモーター配列である；
（Ｂ）前記ＡＡＶｒｅｐ遺伝子は、ＡＡＶ血清型２であり、前記ＡＡＶＰ５および／またはＰ４０プロモーター配列は、ＡＡＶ血清型１、３、５、７、または８に由来するＡＡＶＰ５プロモーター配列である；
（Ｃ）前記ＡＡＶｒｅｐ遺伝子は、ＡＡＶ血清型２であり、前記ＡＡＶＰ５および／またはＰ４０プロモーター配列は、ＡＡＶ血清型１または８に由来するＡＡＶＰ４０プロモーター配列である；
（Ｄ）前記ＡＡＶｒｅｐ遺伝子は、ＡＡＶ血清型２であり、前記ＡＡＶＰ５および／またはＰ４０プロモーター配列は、ＡＡＶ血清型３または５に由来するＡＡＶＰ５プロモーター配列およびＡＡＶ血清型１に由来するＡＡＶＰ４０プロモーター配列である；
（Ｅ）前記ＡＡＶｒｅｐ遺伝子は、ＡＡＶ血清型５であり、前記ＡＡＶＰ５および／またはＰ４０プロモーター配列は、ＡＡＶ血清型７に由来するＡＡＶＰ５プロモーター配列である；
（Ｆ）前記ＡＡＶｒｅｐ遺伝子は、ＡＡＶ血清型６であり、前記ＡＡＶＰ５および／またはＰ４０プロモーター配列は、ＡＡＶ血清型１、２、３、７、または８に由来するＡＡＶＰ５プロモーター配列である；または
（Ｇ）前記ＡＡＶｒｅｐ遺伝子は、ＡＡＶ血清型７であり、前記ＡＡＶＰ５および／またはＰ４０プロモーター配列は、ＡＡＶ血清型２、７、または８に由来するＡＡＶＰ５プロモーター配列である、
組換え改変アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ヘルパーベクター。
【請求項７】
前記ベクターが、非ＡＡＶヘルパー機能提供ポリヌクレオチドをさらに含む、請求項１に記載の組換え改変アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ヘルパーベクター。
【請求項８】
導入遺伝子カセットを含む組換え改変アデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）の産生力価を増加させる方法であって、該方法は、以下でトランスフェクトされた細胞を培養することを含み：
（１）前記ｒＡＡＶ；および
（２）請求項７に記載の組換え改変アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ヘルパーベクター、
前記培養は、前記ｒＡＡＶの産生を可能にするのに十分な条件下で、培地中で行われ、前記ＡＡＶＰ５および／またはＰ４０プロモーター配列の存在は、前記細胞が、前記ＡＡＶヘルパー機能提供ポリヌクレオチドが前記ＡＡＶｒｅｐ遺伝子の由来元となるＡＡＶの血清型と同じ血清型のＡＡＶに由来するＰ５およびＰ４０プロモーターを含有する場合に達成されるものと比較して、増加した産生力価で、前記ｒＡＡＶの産生を引き起こす、方法。
【請求項９】
前記導入遺伝子カセットが、遺伝子治療に使用することができるものである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記導入遺伝子カセットが、プロモーター、ポリアデニル化部位、またはそれらの組み合わせを含む、請求項８に記載の方法。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、組換え型アデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）のパッケージング効率を高めることができる組換え型アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ヘルパーベクター、およびそのようなｒＡＡＶのパッケージング効率を改善するためのそれらの使用に関する。本発明は、特に、そのようなｒＡＡＶによってコードされるＲｅｐタンパク質と天然に会合（ａｓｓｏｃｉａｔｅ）するＰ５および／またはＰ４０プロモーター配列を、異なる血清型のｒＡＡＶのＲｅｐタンパク質と会合するＡＡＶＰ５および／またはＰ４０プロモーターと置換（または増強）するようにさらに改変された組換え改変アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ヘルパーベクターに関する。このような代替または追加のプロモーター配列の使用は、組換え修飾アデノ随伴ウイルスの産生増加を引き起こす。
配列表の参照
続きを表示（約 8,300 文字）【０００２】
本出願は、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．１．８２１以下に従った一以上の配列一覧を含み、この配列表は、コンピュータ可読媒体（ファイル名：２６５０－０００４ＵＳ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ（２０１９年７月１５日作成、サイズ８４，１０１バイト））に開示されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【背景技術】
【０００３】
Ｉ．アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）
【０００４】
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）はＰａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅのＤｅｐｅｎｄｏｖｉｒｕｓ属に属する小型の自然発生非病原性ウイルスである（Ｂａｌａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｂ．他（２０１４）“ＢａｓｉｃＢｉｏｌｏｇｙｏｆＡｄｅｎｏ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓ（ＡＡＶ）ＶｅｃｔｏｒｓＵｓｅｄｉｎＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ，”Ｃｕｒｒ．ＧｅｎｅＴｈｅｒ．１４（２）：８６－１００；Ｚｉｎｎ，Ｅ．他（２０１４）“Ａｄｅｎｏ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓ：ＦｉｔＴｏＳｅｒｖｅ，”Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｖｉｒｏｌ．０：９０－９７）。疾患を引き起こさないにもかかわらず、ＡＡＶはヒトおよび他の霊長類に感染し、ヒト集団で流行することが知られる（Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｆ．Ｂ．他（１９７２）“ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＲｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＡｎｔｉｓｅｒａＰｒｅｐａｒｅｄＡｇａｉｎｓｔｔｈｅＳｏｄｉｕｍＤｏｄｅｃｙｌＳｕｌｆａｔｅ－ＴｒｅａｔｅｄＳｔｒｕｃｔｕｒａｌＰｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓｏｆＡｄｅｎｏｖｉｒｕｓ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓ，”Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．９（６）：１０１７－１０２６）。ＡＡＶは広範囲の異なる細胞型（例えば、中枢神経系、心臓、腎臓、肝臓、肺、膵臓、網膜色素上皮の細胞、または光受容細胞、または骨格筋細胞）に感染する。異なる組織感染能（「トロピズム」）を示すウイルスの１２の血清型（例：ＡＡＶ２、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６など）が同定されている（Ｃｏｌｅｌｌａ，Ｐ．他（２０１８）“ＥｍｅｒｇｉｎｇＩｓｓｕｅｓｉｎＡＡＶ－ＭｅｄｉａｔｅｄＩｎＶｉｖｏＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ，”Ｍｏｌｅｃ．Ｔｈｅｒ．Ｍｅｔｈ．Ｃｌｉｎ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．８：８７－１０４；Ｈｏｃｑｕｅｍｉｌｌｅｒ，Ｍ．他（２０１６）“Ａｄｅｎｏ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓ－ＢａｓｅｄＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙｆｏｒＣＮＳＤｉｓｅａｓｅｓ，”Ｈｕｍ．ＧｅｎｅＴｈｅｒ．２７（７）：４７８－４９６；Ｌｉｓｏｗｓｋｉ，Ｌ．他（２０１５）“Ａｄｅｎｏ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓＳｅｒｏｔｙｐｅｓＦｏｒＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，”２４：５９－６７）。
【０００５】
ＡＡＶは約４，８００ヌクレオチドからなる一本鎖ＤＮＡウイルスである。ウイルスゲノムは、ウイルスのタンパク質をコードする遺伝子を一緒に含む５’ハーフおよび３’ハーフを有するものとして記載することができる（図１）。ＡＡＶゲノムの５’ハーフはＡＡＶｒｅｐ遺伝子を含み、ＡＡＶｒｅｐ遺伝子は、複数のリーディングフレーム、スタガード開始プロモーター（Ｐ５、Ｐ１９、およびＰ４０）、および選択的スプライシングを用いて、ウイルスの転写制御および複製、ならびにウイルスゲノムのウイルスカプセルへのパッケージングに必要な４つの非構造Ｒｅｐタンパク質（Ｒｅｐ４０、Ｒｅｐ５２、Ｒｅｐ６８、およびＲｅｐ７８）をコードする（Ｌａｃｋｎｅｒ，Ｄ．Ｆ．他（２００２）“ＳｔｕｄｉｅｓｏｆｔｈｅＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＴｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＡｄｅｎｏ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓｐ１９ＰｒｏｍｏｔｅｒｂｙＲｅｐＰｒｏｔｅｉｎ，”Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７６（１６）：８２２５－８２３５）。ウイルスタンパク質（Ａｄタンパク質など）の存在下では、Ｐ５プロモーターが活性化され、Ｒｅｐ６８およびＲｅｐ７８タンパク質の転写を媒介する。Ｒｅｐ６８およびＲｅｐ７８タンパク質は、転写制御、潜伏、レスキュー、およびウイルスＤＮＡ複製に関与し、したがってＡＡＶライフサイクルの主要制御として機能する（Ｍｕｒｐｈｙ，Ｍ．他（２００７）“Ａｄｅｎｏ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓＴｙｐｅ２ｐ５Ｐｒｏｍｏｔｅｒ：ａＲｅｐ－ＲｅｇｕｌａｔｅｄＤＮＡＳｗｉｔｃｈＥｌｅｍｅｎｔＦｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇｉｎＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ，Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ，ａｎｄＳｉｔｅ－ＳｐｅｃｉｆｉｃＩｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ，”Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８１（８）：３７２１－３７３０）。Ｒｅｐ６８およびＲｅｐ７８タンパク質の発現は、Ｒｅｐ４０およびＲｅｐ５２タンパク質の転写に関与するＰ１９プロモーターを活性化する（Ｌａｃｋｎｅｒ，Ｄ．Ｆ．他（２００２）“ＳｔｕｄｉｅｓｏｆｔｈｅＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＴｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＡｄｅｎｏ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓｐ１９ＰｒｏｍｏｔｅｒｂｙＲｅｐＰｒｏｔｅｉｎ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７６（１６）：８２２５－８２３５；Ｏｇａｓａｗａｒａ，Ｙ．他（１９９８）“ＴｈｅＵｓｅｏｆＨｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓＰｒｏｍｏｔｅｒｓｆｏｒＡｄｅｎｏ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓ（ＡＡＶ）ＰｒｏｔｅｉｎＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＡＡＶＶｅｃｔｏｒＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４２（３）：１７７－１８５）。
ＡＡＶゲノムの３’ハーフは、ＶＰ１，ＶＰ２，ＶＰ３の３つのキャプシドタンパク質（ＶＰ）をコードするＡＡＶキャプシド遺伝子（ｃａｐ）を含む。３つのキャプシドタンパク質は、単一のプロモーター（ＡＡＶ２の場合はＰ４０）によって制御される単一のｍＲＮＡ転写産物から翻訳される。ＡＡＶゲノムの３’ハーフは、また、ＡＡＶアセンブリ活性化タンパク質（ＡＡＰ）をコードするＡＡＰ遺伝子を含む。６０個のＶＰモノマー（約５コピーのＶＰ１、５コピーのＶＰ２、および５０コピーのＶＰ３を含む）がＡＡＶゲノムの周囲で自己集合し、成熟ウイルス粒子の正二十面体のタンパク質の殻（キャプシド）を形成する（Ｂｕｎｉｎｇ，Ｈ．他（２０１９）“ＣａｐｓｉｄＭｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒＴａｒｇｅｔｉｎｇａｎｄＩｍｐｒｏｖｉｎｇｔｈｅＥｆｆｉｃａｃｙｏｆＡＡＶＶｅｃｔｏｒｓ，”Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．Ｍｅｔｈ．Ｃｌｉｎ．Ｄｅｖｅｌ．１２：Ｐ２４８－Ｐ２６５；ＶａｎＶｌｉｅｔＫ．Ｍ．他（２００８）ＴｈｅＲｏｌｅｏｆｔｈｅＡｄｅｎｏ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓＣａｐｓｉｄｉｎＧｅｎｅＴｒａｎｓｆｅｒ．Ｉｎ：ＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＳｙｓｔｅｍｓ，Ｊａｉｎ，Ｋ．Ｋ．（編集），Ｍｅｔｈ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．４３７：５１－９１）．ＡＡＶＡＡＰタンパク質は、新たに産生されたＶＰタンパク質を安定化し、細胞質から細胞核へ輸送するために必要であると考えられている。ＡＡＶゲノムの３’ハーフは、また、ゲノム複製をサポートするタンパク質をコードすると考えられているＡＡＶＸ遺伝子を含む（Ｃｏｌｅｌｌａ，Ｐ．他（２０１８）“ＥｍｅｒｇｉｎｇＩｓｓｕｅｓｉｎＡＡＶ－ＭｅｄｉａｔｅｄＩｎＶｉｖｏＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ，”Ｍｏｌｅｃ．Ｔｈｅｒ．Ｍｅｔｈ．Ｃｌｉｎ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．８：８７－１０４；Ｂｕｎｉｎｇ，Ｈ．他（２０１９）“ＣａｐｓｉｄＭｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒＴａｒｇｅｔｉｎｇａｎｄＩｍｐｒｏｖｉｎｇｔｈｅＥｆｆｉｃａｃｙｏｆＡＡＶＶｅｃｔｏｒｓ，”Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．Ｍｅｔｈ．Ｃｌｉｎ．Ｄｅｖｅｌ．１２：Ｐ２４８－Ｐ２６５；Ｃａｏ，Ｍ．他（２０１４）“ＴｈｅＸＧｅｎｅＯｆＡｄｅｎｏ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓ２（ＡＡＶ２）ＩｓＩｎｖｏｌｖｅｄＩｎＶｉｒａｌＤＮＡＲｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ，”ＰＬｏＳＯＮＥ９，ｅ１０４５９６：１－１０）。
【０００６】
上述のＡＡＶ遺伝子コード配列は、１４５ヌクレオチドの二つのＡＡＶ特異的回文逆末端反復配列（ＩＴＲ）に隣接している（Ｂａｌａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｂ．他（２０１４）“ＢａｓｉｃＢｉｏｌｏｇｙｏｆＡｄｅｎｏ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓ（ＡＡＶ）ＶｅｃｔｏｒｓＵｓｅｄｉｎＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ，”Ｃｕｒｒ．ＧｅｎｅＴｈｅｒ．１４（２）：８６－１００；Ｃｏｌｅｌｌａ，Ｐ．他（２０１８）“ＥｍｅｒｇｉｎｇＩｓｓｕｅｓｉｎＡＡＶ－ＭｅｄｉａｔｅｄＩｎＶｉｖｏＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ，”Ｍｏｌｅｃ．Ｔｈｅｒ．Ｍｅｔｈ．Ｃｌｉｎ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．８：８７－１０４）。
【０００７】
ＡＡＶは本質的に欠陥のあるウイルスであり、少なくとも２つの重要な機能を果たす能力を欠いている：すなわち、ウイルス特異的産物の合成を開始する能力と、そのような産物を集めて成熟した感染性ウイルス粒子の正二十面体のタンパク質の殻（キャプシド）を形成する能力である。したがって、ＡＡＶゲノムの遺伝子によってコードされていないウイルス随伴（ＶＡ）ＲＮＡを提供するために、アデノウイルス（Ａｄ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ワクシニアウイルスまたはヒトパピローマウイルスのような、同時感染する「ヘルパー」ウイルスを必要とする。このようなＶＡＲＮＡは翻訳されないが、他のウイルス遺伝子の翻訳を調節する役割を果たす。同様に、ＡＡＶゲノムはウイルスタンパク質Ｅ１ａ、Ｅ１ｂ、Ｅ２ａ、およびＥ４をコードする遺伝子を含まない；したがって、これらのタンパク質は、また、同時に感染する「ヘルパー」ウイルスによって供給されなければならない。Ｅ１ａタンパク質は増殖性感染中のウイルス遺伝子転写を大きく刺激する。Ｅ１ｂタンパク質はアデノウイルス感染細胞のアポトーシスを阻止し、増殖性感染を進行させる。Ｅ２ａタンパク質は、鋳型をほどいて転写開始を促進することにより、ウイルス鎖置換複製の伸長の段階において役割を果たす。Ｅ４タンパク質は、導入遺伝子の持続性、ベクター毒性、および免疫原性に影響を及ぼすことが示されている（Ｇｒｉｅｇｅｒ，Ｊ．Ｃ．他（２０１２）“Ａｄｅｎｏ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓＶｅｃｔｏｒｏｌｏｇｙ，Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，ａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，”Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．５０７：２２９－２５４；Ｄｙｓｏｎ，Ｎ．他（１９９２）“ＡｄｅｎｏｖｉｒｕｓＥ１ＡＴａｒｇｅｔｓＫｅｙＲｅｇｕｌａｔｏｒｓＯｆＣｅｌｌＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，”Ｃａｎｃ．Ｓｕｒｖ．１２：１６１－１９５；ＪｏｎｅｓＮ．Ｃ．（１９９０）“ＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎＢｙＴｈｅＨｕｍａｎＡｄｅｎｏｖｉｒｕｓｅｓ，”Ｓｅｍｉｎ．ＣａｎｃｅｒＢｉｏｌ．１（６）：４２５－４３５；Ｂｅｎ－Ｉｓｒａｅｌ，Ｈ．他（２００２）“ＡｄｅｎｏｖｉｒｕｓａｎｄＣｅｌｌＣｙｃｌｅＣｏｎｔｒｏｌ，”Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．７：ｄ１３６９－ｄ１３９５；Ｈｏｅｂｅｎ，Ｒ．Ｃ．他（２０１３）“ＡｄｅｎｏｖｉｒｕｓＤＮＡＲｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ，”ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂ．Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．Ｂｉｏｌ．５：ａ０１３００３（１－１１ページ）；Ｂｅｒｋ，Ａ．Ｊ．（２０１３）“Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ：ＴｈｅＶｉｒｕｓｅｓＡｎｄＴｈｅｉｒＲｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｉｎ：ＦＩＥＬＤＳＶＩＲＯＬＯＧＹ，６ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ（Ｋｎｉｐｅ，Ｄ．Ｍ．他編集．），Ｖｏｌ．２．，ＬｉｐｐｉｎｃｏｔｔＷｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１７０４－１７３１ページ；Ｗｅｉｔｚｍａｎ，Ｍ．Ｄ．（２００５）“ＦｕｎｃｔｉｏｎｓＯｆＴｈｅＡｄｅｎｏｖｉｒｕｓＥ４ＰｒｏｔｅｉｎｓＡｎｄＴｈｅｉｒＩｍｐａｃｔＯｎＶｉｒａｌＶｅｃｔｏｒｓ，”Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１０：１１０６－１１１７参照のこと）。
【０００８】
ＡＡＶウイルスは分裂細胞と非分裂細胞の両方に感染し、環状エピソーム分子として存続するか、または特定の染色体座（アデノ随伴ウイルス組込み部位またはＡＡＶＳ）において宿主細胞のＤＮＡに組み込まれる。（Ｄｕａｎ，Ｄ．（２０１６）“ＳｙｓｔｅｍｉｃＤｅｌｉｖｅｒｙＯｆＡｄｅｎｏ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒａｌＶｅｃｔｏｒｓ，”Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｖｉｒｏｌ．２１：１６－２５；Ｇｒｉｅｇｅｒ，Ｊ．Ｃ．他（２０１２）“Ａｄｅｎｏ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓＶｅｃｔｏｒｏｌｏｇｙ，Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，ａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，”Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．５０７：２２９－２５４）。ＡＡＶの複製と成熟に必要な機能を果たすヘルパーウイルスが存在しない限り、ＡＡＶは感染細胞内に潜伏したままである。
ＩＩ．遺伝子治療におけるｒＡＡＶとその利用
【０００９】
ＡＡＶの特性に照らして、組換え改変されたバージョンのＡＡＶ（ｒＡＡＶ）は、遺伝子治療用ベクターとして実質的な有用性を見出している（Ｎａｓｏ，Ｍ．Ｆ．他（２０１７）“Ａｄｅｎｏ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓ（ＡＡＶ）ａｓａＶｅｃｔｏｒｆｏｒＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ，”ＢｉｏＤｒｕｇｓ３１：３１７－３３４；Ｂｅｒｎｓ，Ｋ．Ｉ．他（２０１７）“ＡＡＶ：ＡｎＯｖｅｒｖｉｅｗｏｆＵｎａｎｓｗｅｒｅｄＱｕｅｓｔｉｏｎｓ，”ＨｕｍａｎＧｅｎｅＴｈｅｒ．２８（４）：３０８－３１３；Ｂｅｒｒｙ，Ｇ．Ｅ．他（２０１６）“ＣｅｌｌｕｌａｒＴｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎＭｅｃｈａｎｉｓｍｓＯｆＡｄｅｎｏ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒａｌＶｅｃｔｏｒｓ，”Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｖｉｒｏｌ．２１：５４－６０；Ｂｌｅｓｓｉｎｇ，Ｄ．他（２０１６）“Ａｄｅｎｏ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓＡｎｄＬｅｎｔｉｖｉｒｕｓＶｅｃｔｏｒｓ：ＡＲｅｆｉｎｅｄＴｏｏｌｋｉｔＦｏｒＴｈｅＣｅｎｔｒａｌＮｅｒｖｏｕｓＳｙｓｔｅｍ，”２１：６１－６６；Ｓａｎｔｉａｇｏ－Ｏｒｔｉｚ，Ｊ．Ｌ．（２０１６）“Ａｄｅｎｏ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓ（ＡＡＶ）ＶｅｃｔｏｒｓｉｎＣａｎｃｅｒＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ，”Ｊ．ＣｏｎｔｒｏｌＲｅｌｅａｓｅ２４０：２８７－３０１；Ｓａｌｇａｎｉｋ，Ｍ．他（２０１５）“Ａｄｅｎｏ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓＡｓＡＭａｍｍａｌｉａｎＤＮＡＶｅｃｔｏｒ，”Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｓｐｅｃｔｒ．３（４）：１－３２；Ｈｏｃｑｕｅｍｉｌｌｅｒ，Ｍ．他（２０１６）“Ａｄｅｎｏ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓ－ＢａｓｅｄＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙｆｏｒＣＮＳＤｉｓｅａｓｅｓ，”Ｈｕｍ．ＧｅｎｅＴｈｅｒ．２７（７）：４７８－４９６；Ｌｙｋｋｅｎ，Ｅ．Ａ．他（２０１８）“ＲｅｃｅｎｔＰｒｏｇｒｅｓｓＡｎｄＣｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓＦｏｒＡＡＶＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｉｅｓＴａｒｇｅｔｉｎｇＴｈｅＣｅｎｔｒａｌＮｅｒｖｏｕｓＳｙｓｔｅｍ，”Ｊ．Ｎｅｕｒｏｄｅｖｅｌｏｐ．Ｄｉｓ．１０：１６：１－１０；Ｂｕｎｉｎｇ，Ｈ．他（２０１９）“ＣａｐｓｉｄＭｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒＴａｒｇｅｔｉｎｇａｎｄＩｍｐｒｏｖｉｎｇｔｈｅＥｆｆｉｃａｃｙｏｆＡＡＶＶｅｃｔｏｒｓ，”Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．Ｍｅｔｈ．Ｃｌｉｎ．Ｄｅｖｅｌ．１２：Ｐ２４８－Ｐ２６５；Ｄｕｒｉｎｇ，Ｍ．Ｊ．他（１９９８）“ＩｎＶｉｖｏＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＯｆＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＨｕｍａｎＧｅｎｅｓＦｏｒＤｏｐａｍｉｎｅＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎＩｎＴｈｅＣａｕｄａｔｅｓＯｆＭＰＴＰ－ＴｒｅａｔｅｄＭｏｎｋｅｙｓＵｓｉｎｇＡｎＡＡＶＶｅｃｔｏｒ，”ＧｅｎｅＴｈｅｒ．５：８２０－８２７；Ｇｒｉｅｇｅｒ，Ｊ．Ｃ．他（２０１２）“Ａｄｅｎｏ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓＶｅｃｔｏｒｏｌｏｇｙ，Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，ａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，”Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．５０７：２２９－２５４；Ｋｏｔｔｅｒｍａｎ，Ｍ．Ａ．他（２０１４）“ＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＡｄｅｎｏ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓｅｓＦｏｒＣｌｉｎｉｃａｌＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ，”Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．１５（７）：４４５－４５１；Ｋｗｏｎ，Ｉ．他（２００７）“ＤｅｓｉｇｎｅｒＧｅｎｅＤｅｌｉｖｅｒｙＶｅｃｔｏｒｓ：ＭｏｌｅｃｕｌａｒＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｎｄＥｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆＡｄｅｎｏ－ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒａｌＶｅｃｔｏｒｓｆｏｒＥｎｈａｎｃｅｄＧｅｎｅＴｒａｎｓｆｅｒ，”Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．２５（３）：４８９－４９９；米国特許第１０，２６６，８４５号；１０，０８１，６５９号；米国特許第９，８９０，３９６号；米国特許第９，８４０，７１９号；米国特許第９，８３９，６９６号；米国特許第９，８３４，７８９号；米国特許第９，８０３，２１８号；米国特許第９，７８３，８２５号；米国特許第９，７７７，２９１号；米国特許第９，５４０，６５９号；米国特許第９，５２７，９０４号；米国特許第８，２３６，５５７号；米国特許第７，９７２，５９３号および米国特許第７，９４３，３７４号参照のこと）。
【００１０】
ｒＡＡＶは、典型的には環状プラスミド（「ｒＡＡＶプラスミドベクター」）を用いて産生される。ＡＡＶｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子は、典型的には、そのような構築物から欠失され、プロモーター、βグロビンイントロン、選択された治療用遺伝子（導入遺伝子）が挿入されたクローニング部位、およびポリアデニル化（「ｐｏｌｙＡ」）部位で置換される。しかし、ｒＡＡＶの逆方向末端反復配列（ＩＴＲ）は保持されるので、ｒＡＡＶプラスミドベクターの導入遺伝子発現カセットはＡＡＶＩＴＲ配列によって挟まれる（Ｃｏｌｅｌｌａ，Ｐ．他（２０１８）“ＥｍｅｒｇｉｎｇＩｓｓｕｅｓｉｎＡＡＶ－ＭｅｄｉａｔｅｄＩｎＶｉｖｏＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ，”Ｍｏｌｅｃ．Ｔｈｅｒ．Ｍｅｔｈ．Ｃｌｉｎ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．８：８７－１０４；Ｂｕｎｉｎｇ，Ｈ．他（２０１９）“ＣａｐｓｉｄＭｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒＴａｒｇｅｔｉｎｇａｎｄＩｍｐｒｏｖｉｎｇｔｈｅＥｆｆｉｃａｃｙｏｆＡＡＶＶｅｃｔｏｒｓ，”Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．Ｍｅｔｈ．Ｃｌｉｎ．Ｄｅｖｅｌ．１２：Ｐ２４８－Ｐ２６５）。したがって、５’から３’方向に、ｒＡＡＶは、５’ＩＴＲ、ｒＡＡＶの導入遺伝子発現カセット、および３’ＩＴＲを含む。
（【００１１】以降は省略されています）

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