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公開番号2025013945
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-01-28
出願番号2024187057,2021565898
出願日2024-10-24,2020-05-06
発明の名称プロドラッグ組成物中の薬物濃度を定量化する方法
出願人ジェンザイム・コーポレーション
代理人個人,個人
主分類C12Q 1/34 20060101AFI20250121BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】架橋HAヒドロゲルへのプロドラッグ組成物の薬物負荷を定量化するために分析的定量化方法を提供する。
【解決手段】架橋ヒアルロン酸-リンカー-ペプチド(xHA-L-P)プロドラッグ製剤中に存在する薬物の量を決定する方法であって:該xHA-L-Pプロドラッグ製剤のサンプルを;ヒアルロノグルコシダーゼと接触させて、オリゴマーのヒアルロン酸-リンカー-ペプチド薬物(oHA-L-P)を生成する工程;該oHA-L-Pを第2の酵素と接触させて、該薬物のペプチド消化産物を生成する工程;および該ペプチド消化産物を検出して、該xHA-L-Pプロドラッグ製剤中に存在する薬物の量を決定する工程を含む、前記方法とする。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
架橋ヒアルロン酸－リンカー－ペプチド（ｘＨＡ－Ｌ－Ｐ）プロドラッグ製剤中に存在する薬物の量を決定する方法であって：
該ｘＨＡ－Ｌ－Ｐプロドラッグ製剤のサンプルを；
ヒアルロノグルコシダーゼと接触させて、オリゴマーのヒアルロン酸－リンカー－ペプチド薬物（ｏＨＡ－Ｌ－Ｐ）を生成する工程；
該ｏＨＡ－Ｌ－Ｐを第２の酵素と接触させて、該薬物のペプチド消化産物を生成する工程；および
該ペプチド消化産物を検出して、該ｘＨＡ－Ｌ－Ｐプロドラッグ製剤中に存在する薬物の量を決定する工程
を含む、前記方法。
続きを表示（約 730 文字）【請求項２】
ペプチド消化産物は、約２アミノ酸長～約１００アミノ酸長の間である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ペプチド消化産物は、約３アミノ酸長～約７５アミノ酸長の間である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ペプチド消化産物は、約４アミノ酸長～約５０アミノ酸長の間である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ペプチド消化産物は、約６アミノ酸長～約３０アミノ酸長の間である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
ペプチド消化産物は、約１５アミノ酸長～約２０アミノ酸長の間である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ペプチド消化産物は、約１アミノ酸長、約２アミノ酸長、約３アミノ酸長、約１９アミノ酸長またはこれらの任意の組合せである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ペプチド消化産物を検出する工程は、液体クロマトグラフィー－質量分析法（ＬＣ－ＭＳ）、液体クロマトグラフィータンデム質量分析法（ＬＣ－ＭＳ－ＭＳ）、液体クロマトグラフィー－高分解能質量分析法（ＬＣ－ＨＲＭＳ）、紫外（ＵＶ）吸光度および蛍光検出法のうち１つまたはこれらの組合せからなる群から選択される方法により実行される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
ヒアルロノグルコシダーゼはヒアルロニダーゼ（ＨＡアーゼ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
ＨＡアーゼは、ＨＡアーゼ１、ＨＡアーゼ２、ＨＡアーゼ３、ＨＡアーゼ４、ＨＡアーゼ５およびＨＡアーゼ６からなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、２０１９年５月７日に出願された米国仮特許出願第６２／８４４，５７９号に基づく優先権を主張し、その開示全体を参照によって本明細書に組み入れる。
続きを表示（約 2,100 文字）【０００２】
本発明は、プロドラッグ組成物中に存在する薬物の量を定量化する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
この１０年間で、平均すると毎年１７種の新規なペプチドが臨床試験に入り、承認率（第１相から上市まで）は小分子の２倍になっており（非特許文献１；非特許文献２）、１５０種を超えるペプチド薬物候補が、現在開発中である（非特許文献３）。
【０００４】
しかし、ペプチド薬物の開発には特有の課題がある。例えば、ペプチド薬物は、ｉｎｖｉｖｏでタンパク質切断を受け、急速に排除される。一つには生体膜の透過性が低いため、経口送達は依然として困難である。これらの欠点に対処する試みが、環状ペプチド形成（例えば、ラクタム化およびクリック環化による）、炭化水素ステープル化、脂質付加、およびポリマー薬物コンジュゲートの開発のような構造の制約を組み入れることによってなされてきた。
【０００５】
ペプチド薬物の一例は、グルカゴン受容体およびＧＬＰ１受容体を標的とする二重受容体アゴニストであるＳＡＲ４２５８９で、これは２型糖尿病患者における血糖管理および体重減少、ならびに健常な志願者における体重減少を促進することができる（非特許文献４）。しかしながら、ＳＡＲ４２５８９９はｉｎｖｉｖｏクリアランスが急速であるため、１日１回の投与が必要である。
【０００６】
ヒアルロン酸（ＨＡ）は、ヒアルロナンとも呼ばれ、β－１－３およびβ－１－４のグリコシド結合により連結されたｄ－グルクロン酸とＮ－アセチル－ｄ－グルコサミンとの繰り返し二糖単位から構成される天然の非スルフェート直鎖状多糖である（非特許文献５）。ＨＡは皮膚における重要な構造要素であり、複数の細胞表面受容体の相互作用に関与している。ＨＡは免疫抑制および抗血管新生の活性を有し、脳組織、硝子軟骨および滑膜関節液の中に存在する。ＨＡは、その実体積の１０００倍までの大量の水を吸収することができる、強親水性の特徴、および生物組織中で高分子量であることが理由で、身体の中で重要な構造的および機能的役割を果たす。
【０００７】
ＨＡは、その生体適合性および生分解性が理由で、生物医学的なおよび薬学的な用途において多くの用途が見出されてきた。しかしながら、ＨＡは溶解性が高く、ｉｎｖｉｖｏで急速な分解挙動をする極めて劣った機械的性質を見せることが多い。このため、ＨＡは、化学修飾され、および／または架橋されて、機械的性質、粘度、溶解性、分解、および生物学的性質を含むその性質が改善されてきた。ＨＡ誘導体が作り出され、組織工学用の足場において、声帯体積増大（ｖｏｃａｌｆｏｌｄａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ）のような軟部組織手術において、薬物送達、ｓｉＲＮＡの細胞内送達、創傷治癒において、および外科的処置におけるデバイスとして、利用されてきた。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
Ｄｈａｒａｎｉｐｒａｇａｄａ（２０１３）ＦｕｔｕｒｅＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ５（７）：８３１頁
ＫａｓｐａｒおよびＲｅｉｃｈｅｒｔ（２０１３）ＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙＴｏｄａｙ１８：８０７～８１７頁
ＬａｕおよびＤｕｎｎ（２０１８）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆ＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ２６：２７００～２７０７頁
Ｔｉｌｌｎｅｒら（２０１９）ＤｉａｂｅｔｅｓＯｂｅｓ．Ｍｅｔａｂ．２１：１２０，ｄｏｉ：１０．１１１１／ｄｏｍ．１３４９４、Ｅｐｕｂ２０１８年９月１６日
Ｋｈｕｎｍａｎｅｅら（２０１７）Ｊ．ＴｉｓｓｕｅＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ第８巻（ｄｏｉ：ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１７７／２０４１７３１４１７７２６４６４）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
架橋ヒアルロン酸（ｘＨＡ）は、水性環境中で数百万ダルトンのヒドロゲルを形成し、薬物（例えば、ペプチド薬物）に連結されて、ｉｎｖｉｖｏで薬物を安定化することができる。しかしながら、ヒドロゲル中に負荷された薬物の量を定量化すること、およびヒドロゲルからの薬物の放出速度を定量化することは両方とも困難である。溶解しているペプチドの基本的な定量化に通常適用されるＵＶ簡易測定は、ヒドロゲルに適用することができない。なぜなら、そのような分析には、ヒドロゲル複合体に連結される薬物が十分に溶解している必要があるからである。
【００１０】
高温または高ｐＨを使用する、リンカーの加速された加水分解およびペプチド薬物の放出のための代替の方法は、ペプチド薬物の部分分解をもたらし、このため、定量するのが困難な不均質な混合物が産生される。したがって、架橋ＨＡヒドロゲルへのプロドラッグ組成物の薬物負荷を定量化するために分析的定量化方法が必要である。
【課題を解決するための手段】
（【００１１】以降は省略されています）

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