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公開番号2025013842
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-01-28
出願番号2024179154,2018534172
出願日2024-10-11,2016-12-29
発明の名称酵素変異体およびこれをコードするポリヌクレオチド
出願人ノボザイムスアクティーゼルスカブ
代理人個人,個人,個人,個人,個人,個人
主分類C12N 15/56 20060101AFI20250121BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】本発明は、特に高い温度(例えば40℃以上)で高い洗浄性能を有するα-アミラーゼ活性を有するポリペプチド(α-アミラーゼ)を提供することを目的とする。
【解決手段】本発明は、バチルス属(Bacillus)に由来するα-アミラーゼの変異体に相当するα-アミラーゼ活性を有するポリペプチドに関する。特に、本発明のポリペプチドは、ポリペプチドが高い洗浄性能(特に40℃以上の温度)を示すよう、1つ以上のアミノ酸が突然変異化(例えば置換または欠失により)されている配列番号1のアミノ酸配列を含むか、または、これから構成される。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
配列番号１の変異体アミノ酸配列を含むポリペプチドであって、前記ポリペプチドはα－アミラーゼ活性を有すると共に、配列番号１のポリペプチドと比して高い洗浄性能を示すポリペプチド。
続きを表示（約 1,400 文字）【請求項２】
前記変異体アミノ酸配列が、配列番号１のアミノ酸位置１６７において突然変異を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
前記変異体アミノ酸配列が、配列番号１のアミノ酸位置１６７においてＷ１６７Ｙなどの置換を含む、請求項２に記載のポリペプチド。
【請求項４】
前記高い洗浄性能が、自動機械式応力アッセイ（ＡＭＳＡ）アッセイを用いて評価される、請求項１～３のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項５】
前記高い洗浄性能を高温での洗浄の最中に示す、請求項１～４のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項６】
前記高温が、少なくとも４５℃など、少なくとも５０℃など、少なくとも５５℃など、および、少なくとも６０℃などの少なくとも４０℃である、請求項５に記載のポリペプチド。
【請求項７】
前記ポリペプチドが、以下からなる群から選択される条件の１つ以上：
（ａ）４０℃で１０分間の洗浄サイクルにおける漂白剤を伴うモデルＡＤＷ洗剤；
（ｂ）４０℃で１０分間の洗浄サイクルにおける漂白剤を伴わないモデルＡＤＷ洗剤；
（ｃ）５０℃で２０分間の洗浄サイクルにおける漂白剤を伴うモデルＡＤＷ洗剤；ならびに
（ｄ）５０℃で２０分間の洗浄サイクルにおける漂白剤を伴わないモデルＡＤＷ洗剤；
において高い洗浄性能を示し、前記モデルＡＤＷ洗剤が、メチルグリシン二酢酸の三ナトリウム塩（ＴｒｉｌｏｎＭｇｒａｎｕｌｅｓＳＧなど）、クエン酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、ケイ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、ポリリン酸およびケイ酸塩スケール防止剤（Ａｃｕｓｏｌ５８８Ｇなど）ならびにＳｕｒｆａｃ２３－６．５を含む、請求項４～６のいずれか一項に記載のポリペプチドを含む。
【請求項８】
前記ポリペプチドが、１０００以下のアミノ酸長、例えば９００、８００、７００、６００、５００、４００、３００、２００、１７５、１５０、１２５、１００以下のアミノ酸である、請求項１～７のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項９】
前記ポリペプチドが、４００～６００のアミノ酸長、例えば４５０～５００、４６０～５００、または、４７０～４９０のアミノ酸長である、請求項８に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
位置１０、２５、３０、３７、４０、４８、５１、５４、６４、８１、８６、９３、９８、１０５、１０８、１０９、１１３、１１６、１１８、１２１、１３０、１３５、１３８、１４２、１６７、１７４、１７５、１７８、１８２、１８６、１８７、１８９、１９５、１９８、２０２、２０３、２０６、２０８、２１０、２１４、２１８、２３５、２３８、２４２、２４３、２４６、２４７、２５０、２５５、２５７、２５９、２６０、２６１、２６５、２６７、２６９、２７０、２７４、２７５、２７６、２８１、２９５、２９８、２９９、３１１、３１９、３２０、３３４、３３９、３６０、３６５、３６６、３８３、３８４、３８５、３９４、３９８、４０２、４０４、４１６、４３４、４６０、４６９、４７４および４８２に対応する１つ以上の位置において突然変異を含み、ここで、番号は、配列番号２に記載のアミノ酸配列に従う、請求項１～９のいずれか一項に記載のポリペプチド。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
配列表の参照
本出願は、コンピュータ読み取り可能な形態の配列表を含んでおり、これは本明細書において参照により援用される。
続きを表示（約 1,500 文字）【０００２】
本発明は、α－アミラーゼ変異体（すなわち、α－アミラーゼ活性を有するポリペプチド）、α－アミラーゼをコードする核酸、α－アミラーゼの生成方法、α－アミラーゼを含む組成物、および、α－アミラーゼの使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
α－アミラーゼ（α－１，４－グルカン－４－グルカノヒドロラーゼ、Ｅ．Ｃ．３．２．１．１）は、デンプン、ならびに、他の直鎖および分岐１，４－グリコシドオリゴ糖および多糖類の加水分解を触媒する酵素群を構成する。
【０００４】
洗剤、製パン、醸造、例えば異性化糖の調製またはデンプンからのエタノール製造の一部におけるデンプン液化および糖化などの数々の公知の用途におけるα－アミラーゼの産業的な使用には長い歴史がある。α－アミラーゼのこれらの用途および他の用途は公知であり、特に細菌性α－アミラーゼといった微生物由来のα－アミラーゼが利用される。
【０００５】
Ｔｅｒｍａｍｙｌ、ＡＡ５６０（配列番号２；国際公開第２０００／０６００６０号パンフレットも参照のこと）およびＳＰ７０７（配列番号８；Ｔｓｕｋａｍｏｔｏｅｔａｌ．，１９８８，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１５１：２５－３１も参照のこと）などのバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）由来のα－アミラーゼは、洗剤において用途が見出されているα－アミラーゼの特定の群を形成する。これらのアミラーゼは、洗剤中における安定性を向上するために変性されている。例えば、国際公開第９６／２３８７３号パンフレットには、α－アミラーゼＳＰ６９０、ＳＰ７２２（配列番号５）およびＳＰ７０７（配列番号８）（国際公開第９６／２３８７３号パンフレットの配列番号：１、２および７も参照のこと）の安定性を向上するためのこれらのアミラーゼの欠失突然変異体が開示されている。国際公開第９６／２３８７３号パンフレットにはさらに、酸化に対してアミラーゼを安定化させるための置換突然変異体が開示されている。向上した特性を有する追加のα－アミラーゼ突然変異体が、国際公開第２００６／００２６４３号パンフレットおよび国際公開第０１／６６７１２号パンフレットに開示されている。
【０００６】
それ故、天然アミラーゼを変性して一定の特性を向上させることは公知である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、特に高い温度（例えば４０℃以上）で高い洗浄性能を有するα－アミラーゼ活性を有するポリペプチド（α－アミラーゼ）を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）に由来するα－アミラーゼの変異体に相当するα－アミラーゼ活性を有するポリペプチドに関する。特に、本発明のポリペプチドは、ポリペプチドが高い洗浄性能（特に４０℃以上の温度）を示すよう、１つ以上のアミノ酸が突然変異化（例えば置換または欠失により）されている配列番号１のアミノ酸配列を含むか、または、これから構成される。
【０００９】
本発明はまた、変異体α－アミラーゼポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；このポリヌクレオチドを含む核酸構築物、ベクターおよび宿主細胞；ならびに、変異体α－アミラーゼポリペプチドを生成する方法に関する。
【００１０】
本発明はまた、変異体α－アミラーゼポリペプチドを含む洗剤組成物、ならびに、ランドリークリーニングおよび食器洗浄などの家庭および工業用クリーニングプロセスにおけるその使用に関する。
（【００１１】以降は省略されています）

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