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公開番号2024160215
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-11-13
出願番号2024102534,2022538765
出願日2024-06-26,2021-05-05
発明の名称NKG2D、CD16及びCLEC12Aに結合するタンパク質
出願人ドラゴンフライセラピューティクス, インコーポレイテッド
代理人個人,個人,個人,個人
主分類C07K 16/46 20060101AFI20241106BHJP(有機化学)
要約【課題】2種以上のNK活性化受容体に係合し得、天然リガンドがNKG2Dに結合することをブロックし得る、多重特異性結合タンパク質、多重特異性結合タンパク質を含む医薬組成物、及びがんの治療に有用な治療方法を提供する。
【解決手段】タンパク質であって:(a)NKG2Dに結合するFabフラグメントを含む第1の抗原結合部位;(b)CLEC12Aに結合する第2の抗原結合部位;及び(c)CD16に結合するのに十分な抗体Fcドメインもしくはその一部、またはCD16に結合する第3の抗原結合部位を含み;ここで、CLEC12Aに結合する前記第2の抗原結合部位は、特定のアミノ酸配列を含む、CDR1、CDR2、及びCDR3を含むVH;ならびにそれぞれが特定のアミノ酸配列を含む、CDR1、CDR2、及びCDR3を含むVLを含む、タンパク質である。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
タンパク質であって：
（ａ）ＮＫＧ２Ｄに結合する第１の抗原結合部位；
（ｂ）ＣＬＥＣ１２Ａに結合する第２の抗原結合部位；及び
（ｃ）ＣＤ１６に結合するのに十分な抗体Ｆｃドメインもしくはその一部、またはＣＤ１６に結合する第３の抗原結合部位を含み；
ここで、ＣＬＥＣ１２Ａに結合する前記第２の抗原結合部位は、以下：
（ｉ）それぞれが配列番号１３７、２７２、及び２７３のアミノ酸配列を含む、相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、相補性決定領域２（ＣＤＲ２）、及び相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）；ならびにそれぞれが配列番号１４０、１４１、及び１４２のアミノ酸配列を含む、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；
（ｉｉ）それぞれ配列番号１３７、１３８、及び１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびにそれぞれ配列番号１４０、１４１、及び１４２のアミノ酸配列を含む、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号２５１、１９６、及び２４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびにそれぞれ配列番号１９８、１９９、及び２０１のアミノ酸配列を含む、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｉｖ）それぞれ配列番号２２１、１６６、及び２２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびにそれぞれ配列番号２４０、２２６、及び１７９のアミノ酸配列を含む、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｖ）それぞれ配列番号２０６、１６６、及び２４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびにそれぞれ配列番号２４５、２３９、及び１７９のアミノ酸配列を含む、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｖｉ）それぞれ配列番号２２１、２３６、及び２２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびにそれぞれ、配列番号１５２、２２６、及び１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｖｉｉ）それぞれ配列番号１５９、１７０、及び１８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびにそれぞれ配列番号１８６、１８８、及び１８９のアミノ酸配列を含む、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号１９７、２０２、及び２０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２１１、２１２、及び２１４のアミノ酸配列をそれぞれ含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｉｘ）それぞれ配列番号２２０、２２２、及び２５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびにそれぞれ、配列番号２２４、２２５、及び２２７のアミノ酸配列を含む、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ；または
（ｘ）それぞれ配列番号２３０、２３１、及び２３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびにそれぞれ、配列番号２３３、２３４、及び２３５のアミノ酸配列を含む、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ、を含む。
続きを表示（約 1,900 文字）【請求項２】
請求項１のタンパク質であって、ＣＬＥＣ１２Ａに結合する前記第２の抗原結合部位が、
（ｉ）それぞれ配列番号１３７、２７２、及び２７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；配列番号１４０、１４１、及び１４２のアミノ酸配列をそれぞれ含む、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ；または
（ｉｉ）それぞれ配列番号１３７、１３８、及び１３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびにそれぞれ配列番号１４０、１４１、及び１４２のアミノ酸配列を含む、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ、
を含む、前記タンパク質。
【請求項３】
請求項１または２に記載のタンパク質であって、ここで、
（ｉ）前記ＶＨが、配列番号３３５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、かつ前記ＶＬが、配列番号３３６と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むか；（ｉｉ）前記ＶＨが、配列番号２７０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、かつ前記ＶＬが、配列番号２７１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むか；または
（ｉｉｉ）前記ＶＨが、配列番号１７８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、かつ前記ＶＬが、配列番号２８９と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、前記タンパク質。
【請求項４】
請求項１～３のいずれか１項に記載のタンパク質であって、
（ｉ）前記ＶＨが、配列番号３３５のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＶＬが配列番号３３６のアミノ酸配列を含むか；
（ｉｉ）前記ＶＨが、配列番号２７０のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＶＬが配列番号２７１のアミノ酸配列を含むか；
（ｉｉｉ）前記ＶＨが、配列番号１７８のアミノ酸配列を含み、かつ前記ＶＬが配列番号２８９のアミノ酸配列を含む、前記タンパク質。
【請求項５】
前記ＶＨ及びＶＬが、配列番号１４３及び１４４；１４７及び１４４；２４４及び１４４；１７８及び１４４；２５６及び１４４；１４３及び１６３；１４３及び１６７；１４３及び１７１；または１７４及び１７５のアミノ酸配列をそれぞれ含む、請求項１または２に記載のタンパク質。
【請求項６】
前記第２の抗原結合部位が、一本鎖フラグメント変数（ｓｃＦｖ）として存在し、ここで、前記ｓｃＦｖが、配列番号２７４、１４５、１４６、１４９、１５０、１５３、１５４、１５６、１５７、１６０、１６１、１６４、１６５、１６８、１６９、１７２、１７３、１７６、１７７、１８０、及び１８１から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載のタンパク質。
【請求項７】
前記ｓｃＦｖが、配列番号２７４または請求項１８０のアミノ酸配列を含む、請求項６に記載のタンパク質。
【請求項８】
ＣＬＥＣ１２Ａに結合する前記第２の抗原結合部位が、それぞれ配列番号２５１、１９６、及び２４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびにそれぞれ、配列番号１９８、１９９、及び２０１のアミノ酸配列を含む、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬを含む、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項９】
ＣＬＥＣ１２Ａに結合する前記第２の抗原結合部位が、以下：
（ｉ）それぞれ、配列番号１９５、１９６、１８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；それぞれ、配列番号１９８、１９９、２０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｉｉ）それぞれ配列番号１９２、１９６、及び１８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびにそれぞれ配列番号１９８、１９９、及び２０１のアミノ酸配列を含む、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ；または
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号１９２、１９６、及び２１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびにそれぞれ、配列番号１９８、１９９、及び２０１のアミノ酸配列を含む、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むＶＬ、
を含む請求項１に記載のタンパク質。
【請求項１０】
前記ＶＨが、配列番号１４８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、かつ前記ＶＬが、配列番号２０３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１及び８～９のいずれか１項に記載のタンパク質。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０２０年５月６日に出願された米国仮出願第６３／０２０，７９８号の優先権を主張し、その全体が参照により本明細書に援用される。
続きを表示（約 2,400 文字）【０００２】
配列表
本願では、ＡＳＣＩＩテキスト形式のコンピューター可読形式（ＣＲＦ）の配列表を全体として、参照することにより、援用する。配列表のテキストファイルには、「１４２４７－５４０－２２８＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴＩＮＧ」とタイトル付けされ、２０２１年５月３日に作成され、サイズは２９１，３７５バイトである。
【０００３】
発明の分野
本出願は、細胞上のＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ１６及びＣＬＥＣ１２Ａに結合する多重特異性結合タンパク質、そのようなタンパク質を含む医薬組成物、及びがんの治療を含む、そのようなタンパク質及び医薬組成物を使用する治療方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
かなりの研究努力にもかかわらず、がんは世界中の国々で引き続き重大な臨床的及び財政的負担となっている。世界保健機関（ＷＨＯ）によると、これは２番目に多い死因である。外科、放射線療法、化学療法、生物学的療法、免疫療法、ホルモン療法、幹細胞移植、及び精密医療は、既存の治療法の中にある。これらの分野での広範な研究にもかかわらず、特に最も攻撃的ながんに対する非常に効果的で治療的な解決策はまだ特定されていない。さらに、既存の抗がん治療法の多くには、かなりの有害な副作用がある。
【０００５】
がん免疫療法は、特異性が高く、患者自身の免疫系を使用してがん細胞の破壊を促進し得るので、望ましい。二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーなどの融合タンパク質は、腫瘍細胞及びＴ細胞に結合して、腫瘍細胞の破壊を促進する、文献に記載されているがん免疫療法である。特定の腫瘍関連抗原に結合する抗体は、文献に記載されている。例えば、ＷＯ２０１６／１３４３７１及びＷＯ２０１５／０９５４１２を参照のこと。
【０００６】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、自然免疫系の構成要素であり、循環リンパ球のおよそ１５％を占める。ＮＫ細胞は、実質上、全ての組織に浸潤し、かつもともとは、事前に感作させておく必要なく腫瘍細胞を効果的に殺滅する能力を有するものとして特徴付けられた。活性化されたＮＫ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞と同様の方法で、すなわち、パーフォリン及びグランザイムを含む細胞溶解性顆粒、ならびにデスレセプター経路を介して標的細胞を殺滅する。活性化ＮＫ細胞はまた、標的組織への他の白血球の動員を促進するＩＦＮ－γ及びケモカインなどの炎症性サイトカインも分泌する。
【０００７】
ＮＫ細胞は、その表面上にある様々な活性化受容体及び阻害性受容体を介してシグナルに応答する。例えば、ＮＫ細胞が健康な自己細胞に遭遇した場合、その活性は、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）の活性化によって阻害される。あるいは、ＮＫ細胞が外来細胞またはがん細胞に遭遇すると、それらはそれらの活性化受容体（例えば、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＣＲ、ＤＮＡＭ１）を介して活性化される。ＮＫ細胞はまた、その表面上にあるＣＤ１６受容体を介し、一部の免疫グロブリンの定常領域によっても活性化される。ＮＫ細胞の活性化に対する全体的な感受性は、刺激シグナル及び阻害性シグナルの総和に依存する。ＮＫＧ２Ｄは、本質的に全てのナチュラルキラー細胞によって発現されるＩＩ型膜貫通タンパク質であり、ＮＫＧ２Ｄは活性化受容体として機能する。ＮＫＧ２Ｄは、共刺激受容体として機能するＴ細胞にも見られる。ＮＫＧ２Ｄを介してＮＫ細胞機能を調節
する能力は、悪性腫瘍を含むさまざまな治療状況で有用である。
【０００８】
Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）は、Ｃ型レクチン様分子－１（ＣＬＬ－１）または骨髄性阻害性Ｃ型レクチン様受容体（ＭＩＣＬ）としても公知であり、Ｃ型レクチン／Ｃ型レクチン様ドメイン（ＣＴＬ／ＣＴＬＤ）スーパーファミリーのメンバーである。このファミリーのメンバーは、共通のタンパク質折り畳みを共有し、かつ細胞接着、細胞間シグナル伝達、糖タンパク質代謝回転、ならびに炎症及び免疫応答における役割などの多様な機能を有する。タイプＩＩ膜貫通糖タンパク質であるＣＬＥＣ１２Ａは、白血病幹細胞の急性骨髄性白血病患者の９０％以上で過剰発現しているが、正常な造血細胞では過剰発現していない。
いくつかのバイオテクノロジー及び製薬会社によって行われた多くの努力にもかかわらず、特定のＣＬＥＣ１２Ａを標的とした生物製剤の開発は、優れた開発性特性を備えた抗体が存在しないせいで妨げられている。ＣＬＥＣ１２Ａ抗体を発見する際の課題は、抗原の複雑さに起因する可能性がある。ＣＬＥＣ１２Ａは、２０１個のアミノ酸を有する細胞外ドメイン内に６つの潜在的なＮ－グリコシル化部位を有するモノマーの高度にグリコシル化されたタンパク質である。６つのＮ－グリコシル化部位のうち４つは、分子の膜近位ドメインにクラスター化されており、細胞表面での標的の提示に関与している可能性がある。異なる細胞型の表面でのＣＬＥＣ１２Ａのグリコシル化状態のバリエーションが報告されている（Ｍａｒｓｈａｌｌｅｔａｌ．，（２００６）ＥｕｒＪＩｍｍｕｎｏｌ．３６（８）：２１５９－６９）。
したがって、がんの治療に使用するためにＣＬＥＣ１２Ａに結合する新しくかつ有用なタンパク質の分野での必要性が残っている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
国際公開第２０１６／１３４３７１号
国際公開第２０１５／０９５４１２号
【非特許文献】
【００１０】
Ｍａｒｓｈａｌｌｅｔａｌ．，（２００６）ＥｕｒＪＩｍｍｕｎｏｌ．３６（８）：２１５９－６９
【発明の概要】
（【００１１】以降は省略されています）

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