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公開番号2024110933
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-08-16
出願番号2024006236
出願日2024-01-18
発明の名称細胞の代謝産物をモニターする方法
出願人株式会社資生堂
代理人個人,個人
主分類C12Q 1/06 20060101AFI20240808BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】生きた細胞について細胞間接着した状態での代謝産物をモニターすることができる方法の提供。
【解決手段】細胞間接着した細胞を培養しながら、前記細胞と液体培地とを含む試料を磁気共鳴分光法により測定する工程を含む細胞の代謝産物をモニターする方法である。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
細胞間接着した細胞を培養しながら、前記細胞と液体培地とを含む試料を磁気共鳴分光法により測定する工程を含むことを特徴とする細胞の代謝産物をモニターする方法。
続きを表示（約 1,100 文字）【請求項２】
前記細胞が、接着細胞である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記接着細胞が、角質化上皮細胞、重層上皮細胞、外分泌上皮細胞、線維芽細胞、色素細胞、血管内皮細胞、脂肪細胞、神経細胞、免疫細胞、ランゲルハンス細胞、毛乳頭細胞、毛球部毛根鞘細胞、及び皮脂腺細胞から選択される請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記試料における測定対象物質が、エタノール、アセトン、乳酸、フマル酸、酢酸、クエン酸、コハク酸、ピルビン酸、γ－アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、ギ酸、リンゴ酸、グルコース、フルクトース、マルトース、ショ糖、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、システイン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、ヒスチジン、プロリン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、２－ピロリドン－５－カルボン酸、ウロカニン酸、オルニチン、シトルリン、β－アラニン、グルコース－６－リン酸、フルクトース－６－リン酸、グリセルアルデヒド－３―リン酸、１，３－ビスホスホグリセリン酸、ホスホエノールピルビン酸、アセチルリン酸、アデニン、ウラシル、グアニン、シトシン、チミン、チミジン、グリセロール－３－リン酸、尿素、脂質、及び多糖類の少なくともいずれかを含む請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記細胞が、コラーゲン又はポリリジンで内壁がコートされた磁気共鳴分光法用のガラス試験管で培養される請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ガラス試験管に播種される前記細胞の濃度が、０．５×１０
５
細胞／５００μＬ培地～６．０×１０
５
細胞／５００μＬ培地である請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記細胞に外部刺激を付与する工程と、
前記外部刺激を付与した後の前記細胞の代謝産物を測定する工程と、を更に含む請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記外部刺激が、化学刺激、温度刺激、光刺激、物理刺激、ｐＨ刺激、及び浸透圧刺激の少なくともいずれかである請求項７に記載の方法。
【請求項９】
特定の時間の前記試料における測定対象物質を測定する第１の測定工程と、
前記特定の時間から一定時間経過後の前記試料における測定対象物質を測定する第２の測定工程と、
第１の測定工程における測定対象物質のレベルと、第２の測定工程における測定対象物質のレベルと、の変化を指標として、前記細胞の代謝産物を評価する評価工程と、
を含む請求項７に記載の方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞の代謝産物をモニターする方法に関する。
続きを表示（約 1,000 文字）【背景技術】
【０００２】
医薬品や化粧料の研究開発、及び基礎研究において、培養細胞を用いて遺伝子、タンパク質、代謝物質等の挙動を調べることにより、薬剤等の刺激への応答や代謝物質などを評価することが一般的に行われている。また、培養細胞を用いた評価系は、動物実験の代替法としても有用である。
【０００３】
これまでに、細胞培養物の生理学的状態をモニターする方法として、採取した培養サンプルにおける代謝産物のレベルを決定する工程を含む方法が報告されている（例えば、特許文献１参照）。
【０００４】
また、生きたバクテリアを分散させて培養し、磁気共鳴分光（ＮＭＲ）スペクトル測定の手法により解析したことが報告されている（例えば、非特許文献１参照）。
【０００５】
また、細胞に外来的に発現させたタンパク質のフォールディング安定性を磁気共鳴分光（ＮＭＲ）スペクトル測定の手法により解析したことが報告されている（例えば、非特許文献２参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
特開２０１６－０２５８６０号公報
【非特許文献】
【０００７】
Ｎａｋａｎｉｓｈｉ，Ｙ．ｅｔａｌ．（２０１１）Ｊｏｕｒｎａｌｏｆｐｒｏｔｅｏｍｅｒｅｓｅａｒｃｈ，１０，８２４－８３６．
Ｉｎｏｍａｔａ，Ｋ．ｅｔａｌ．（２００９）Ｎａｔｕｒｅ４５８，１０６－１０９．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、生きた細胞の代謝産物を、細胞間接着した細胞を培養しながら非侵襲的にモニターすることができる方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
前記課題を解決するための手段としての本発明の細胞の代謝産物をモニターする方法は、細胞間接着した細胞を培養しながら、前記細胞と液体培地とを含む試料を磁気共鳴分光法により測定する工程を含む。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、生きた細胞の代謝産物を、細胞間接着した細胞を培養しながら非侵襲的にモニターすることができる方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
（【００１１】以降は省略されています）

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