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公開番号2024082819
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-06-20
出願番号2022196945
出願日2022-12-09
発明の名称培地及び培地を用いる細胞の培養方法
出願人三洋化成工業株式会社
代理人
主分類C12N 5/07 20100101AFI20240613BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】本発明の課題は、細胞接着性に優れる培地を提供することにある。
【解決手段】アミンへの炭素数2～4のアルキレンオキサイド付加物を含有する培地であって、前記アミンへの炭素数2～4のアルキレンオキサイド付加物の濃度が、前記培地の体積に基づいて、0.1～1000μg/mlである培地。前記アミンは、炭素数1～20のアミンであることが好ましい。また、前記炭素数2～4のアルキレンオキサイドは、プロピレンオキサイドであることが好ましい。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
アミンへの炭素数２～４のアルキレンオキサイド付加物を含有する培地であって、
前記アミンへの炭素数２～４のアルキレンオキサイド付加物の濃度が、前記培地の体積に基づいて、０．１～１０００μｇ／ｍｌである培地。
続きを表示（約 330 文字）【請求項２】
前記アミンが、炭素数１～２０のアミンである請求項１に記載の培地。
【請求項３】
前記炭素数２～４のアルキレンオキサイドがプロピレンオキサイドである請求項１又は２に記載の培地。
【請求項４】
前記アミンへの炭素数２～４のアルキレンオキサイド付加物において、前記アミンが有する活性水素１モルに対する炭素数２～４のアルキレンオキサイドの平均付加モル数が０．１～１０モルである請求項１又は２に記載の培地。
【請求項５】
血清の含有量が、培地の体積に基づいて、１５体積％以下である請求項１又は２に記載の培地。
【請求項６】
請求項１又は２に記載の培地を用いる細胞の培養方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は培地及び培地を用いる細胞の培養方法に関する。
続きを表示（約 2,500 文字）【背景技術】
【０００２】
従来は、細胞培養用の培地としてＥａｇｌｅ’ｓＭＥＭ（ｍｉｎｉｍｕｍｅｓｓｅｎｔｉａｌｍｅｄｉｕｍ）等のアミノ酸、ビタミン、無機塩および糖類等からなる基礎培地に、動物細胞増殖因子を添加した培養培地が知られている。この場合、動物細胞増殖因子としては、血清が一般的で、高価にもかかわらず必要量は多く、５～２０体積％程度添加する必要がある。
また、動物由来の因子の混入を嫌う用途では、血清以上に高価な既知の細胞成長因子やホルモン類等を含む細胞培養用の培地が注目されている（特許文献１）。しかし、上記の培地では、高価な上に培養での細胞増殖性が不十分であり、安全かつ比較的安価な細胞増殖性に繋がる細胞接着性の改善が求められていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
特開２００８－２６３９５５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の課題は、細胞接着性に優れる培地を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、上記の課題を解決すべく鋭意検討した結果、本発明に到達した。
即ち本発明は、アミンへの炭素数２～４のアルキレンオキサイド付加物を含有する培地であって、前記アミンへの炭素数２～４のアルキレンオキサイド付加物の濃度が、前記培地の体積に基づいて、０．１～１０００μｇ／ｍｌである培地；前記の培地を用いる細胞の培養方法である。
【発明の効果】
【０００６】
本発明の培地は、優れた細胞接着性を発揮する。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
本発明の培地は、アミンへの炭素数２～４のアルキレンオキサイド付加物を含有する。
アミンへの炭素数２～４のアルキレンオキサイド付加物は、１種を単独で用いても、２種以上を併用してもよい。
【０００８】
前記のアミンとしては、炭素数１～２０のアミン等が挙げられ、具体的には、炭素数１～２０の脂肪族アミン及び炭素数６～２０の芳香族アミン等が挙げられる。
炭素数１～２０の脂肪族アミンとしては、モノアミン（メチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、ブチルアミン、ペンチルアミン、ヘキシルアミン、ドデシルアミン、２－アミノプロパノール、４－アミノブタノール、３－メトキシプロピルアミン、ジエチルアミン、ジプロピルアミン、ジブチルアミン、シクロヘキシルアミン）；
ジアミン［エチレンジアミン、１，２－ジアミノプロパン、ジアミノブタン、ジアミノペンタン、トリメチレンジアミン、ヘキサメチレンジアミン、Ｎ－シクロヘキシル－１，３－プロパンジアミン、ジメチルアミノエチルアミン、エチルアミノエチルアミン、メチルアミノプロミルアミン、１，２－ビス（３－アミノプロポキシ）エタン、ピペラジン、ジシクロヘキシルメタンジアミン、イソホルンジアミン等］；
トリアミン［ジエチレントリアミン、Ｎ－（２－アミノエチル）ピペラジン、ビス（３－アミノプロピル）アミン、ビス（ヘキサメチレン）トリアミン、メチルイミノビスプロピルアミン、スペルミジン等］；
アミノ基を４個以上有するポリアミン（トリエチレンテトラミン、テトラエチレンペンタミン、ペンタエチレンヘキサミン、ヘキサエチレンヘプタミン等）等が挙げられる。
炭素数６～２０の芳香族アミンとしては、モノアミン（アニリン、キシレンジアミン等）；
ポリアミン（フェニレンジアミン、トリレンジアミン、ジエチルトリレンジアミン、キシリレンジアミン、ジフェニルメタンジアミン、ジフェニルエーテルジアミン等）等が挙げられる。
前記のアミンは、１種を単独で用いても、２種以上を組み合わせても良い。
前記のアミンの内、基礎培地への溶解性及び細胞接着性の観点から好ましいのは、活性水素（窒素原子に結合した水素原子）を２個以上含むアミンであり、更に好ましいのは、活性水素（窒素原子に結合した水素原子）を３個以上含むアミンであり、特に好ましいのは活性水素（窒素原子に結合した水素原子）を４個以上含むアミンである。
【０００９】
前記の炭素数２～４のアルキレンオキサイドとしては、エチレンオキサイド、１，２－プロピレンオキサイド、１，３－プロピレンオキサイド、１，２－ブチレンオキサイド、１，３－ブチレンオキサイド、１，４－ブチレンオキサイド、２，３－ブチレンオキサイド等が挙げられる。
前記の炭素数２～４のアルキレンオキサイドの内、基礎培地への溶解性及び細胞接着性の観点から好ましいのは、エチレンオキシド、プロピレンオキサイド（１，２－プロピレンオキサイド、１，３－プロピレンオキサイド）であり、更に好ましいのは、プロピレンオキサイド（１，２－プロピレンオキサイド、１，３－プロピレンオキサイド）であり、特に好ましいのは１，２－プロピレンオキサイドである。
【００１０】
前記のアミンが有する活性水素（窒素原子に結合した水素原子）１モルに対する炭素数２～４のアルキレンオキサイドの平均付加モル数は、細胞毒性及び細胞接着性の観点から、０．１～１０モルであることが好ましい。
前記アミンが水酸基を有する場合、炭素数２～４のアルキレンオキサイドは、窒素原子に結合した水素原子だけでなく、水酸基に付加していても良い。
アミンへの炭素数２～４のアルキレンオキサイド付加物が有する窒素原子の重量割合は、細胞接着性及び細胞毒性の観点から、アミンへの炭素数２～４のアルキレンオキサイド付加物の重量を基準として、１～４０重量％であることが好ましく、１～２０重量％であることが更に好ましく、３～１０重量％であることが特に好ましい。
（【００１１】以降は省略されています）

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