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公開番号2024103547
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-08-01
出願番号2024083379,2022031731
出願日2024-05-22,2017-06-28
発明の名称免疫療法向けのT細胞組成物
出願人ジーニアス・バイオテクノロジー・インコーポレイテッド
代理人個人,個人,個人
主分類C12N 5/0783 20100101AFI20240725BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】従本発明は、養子免疫療法に有用な、選択された抗原に対し反応性の不均質なT細胞集団を含む組成物、及びこのようなT細胞組成物を作製する方法に関する。
【解決手段】本発明は、1つ以上の標的抗原に対し反応性のT細胞が豊富化された、養子細胞療法に有用な組成物を作製する方法を提供する。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
Ｔ細胞を含む組成物を作製する方法であって、以下ステップ：
（ａ）Ｔ細胞を含む初期細胞集団を得ることと、
（ｂ）前記細胞集団を１つ以上の標的抗原及びサイトカインに曝露することにより、Ｔ細胞を刺激することと、
（ｃ）前記細胞集団をサイトカインを含む培地中で培養することと、
（ｄ）前記細胞集団の抗原特異的反応性を試験することと、
（ｅ）前記得られたＴ細胞を含む組成物を採取することと
を含む、前記方法。
続きを表示（約 770 文字）【請求項２】
前記初期細胞集団において、総Ｔ細胞（ＣＤ３＋）、ＣＤ８＋、及びＣＤ４＋Ｔ細胞、単球、Ｂ細胞、ならびにＮＫ細胞の量を試験することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記細胞集団の抗原特異的反応性を試験することが、フローサイトメトリーによる活性化マーカーの検出、細胞内サイトカイン染色による抗原誘導サイトカイン産生量の測定、ＥＬＩＳＡ、またはＥＬＩＳＰＯＴを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ステップ（ｂ）及び（ｃ）における前記サイトカインが、個別に、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１のうちの１つ以上を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ステップ（ｂ）及び（ｃ）における前記サイトカインが、個別に、ＩＬ－７及びＩＬ－１５を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記方法が、ステップ（ｂ）を繰り返すことをさらに含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記方法が、前記細胞集団中の前記Ｔ細胞のポリクローナル刺激をさらに含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記ポリクローナル刺激が、ステップ（ｃ）の後に、前記細胞集団をＣＤ３、ＣＤ２８、及びＣＤ２に結合する四量体抗体に曝露することを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記細胞集団が複数のサブ集団に分割され、その各々が異なる標的抗原への曝露により刺激される、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記複数のサブ集団が、ステップ（ｃ）の前に組み合わされる、請求項９に記載の方法。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、養子免疫療法に有用な、選択された抗原に対し反応性の不均質なＴ細胞集団を含む組成物、及びこのようなＴ細胞組成物を作製する方法に関する。
続きを表示（約 2,900 文字）【背景技術】
【０００２】
ヒトの免疫系が最初に抗原に接してから何日かの期間にわたり、Ｔ細胞集団は抗原の生成を認識し、これらのＴ細胞はその抗原に対するその後の応答の性質を決定する。Ｔ細胞による抗原認識及び特異性は、細胞表面に発現するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の構造的特徴によって付与される。１つのＴ細胞は、特異的な主要組織適合複合体、すなわちＭＨＣと組み合わせて提示される１つの抗原に結合することができるＴＣＲを有する。そのため、Ｔ細胞の抗原特異性は、細胞が示す特異的なＴＣＲの存在及び機能によって特徴づけられる。複数のサブタイプの関与細胞が存在する一方、概して、出現するＴ細胞は、様々な細胞表面マーカー（ＣＤ４＋：ＴＨ１、ＴＨ２、Ｔｒｅｇ、Ｔ濾胞性ヘルパー、ＴＨ１７、ＴＨ２２、ＴＨ９；ＣＤ８＋：ＣＴＬなど）により特性決定され、細胞または液性免疫応答の結果は、これらの異なる細胞サブタイプの機能によるものである。加えて、集団におけるＴ細胞のある特定のサブセットは免疫抑制的であり（例えば、Ｔｒｅｇ、ＴＨ１７、アネルギー化Ｔ細胞）、これらの存在は免疫寛容を誘導し得る。
【０００３】
早くも１９９０年代には、ｅｘｖｉｖｏで増大された抗原特異的Ｔ細胞の養子移入がＣＭＶ及びＥＢＶに対し免疫を付与することが示された（Ｒｉｄｄｅｌｌｅｔａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ１９９２；２５７：２３８）（Ｒｏｏｎｅｙｅｔａｌ．Ｂｌｏｏｄ１９９８；９２：１５４９－５５）。しかし、腫瘍進行の過程で、腫瘍に対する免疫応答が、腫瘍退縮の促進に効果のない少数の「ドミナント」抗原に集中するようになった。ｅｘｖｉｖｏで増大されたＴ細胞を免疫療法に使用する過去の試みでは、腫瘍関連のドミナントな抗原反応性Ｔ細胞が誤って増大され、結果の非一貫性につながった。
【０００４】
Ｋａｗａｋａｍｉｅｔａｌによる研究では、ほとんどの黒色腫患者が、ヒトメラニン細胞特異的抗原（ＭＡＲＴ－１／メランＡ）に対し細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）活性を示したが、もう１つの腫瘍関連抗原ｇｐ１００に対し活性を示す患者は少数に過ぎなかった。腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を養子療法に使用した場合、腫瘍退縮は、ｇｐ１００反応性Ｔ細胞との相互関連はあったが、ＭＡＲＴ－１反応性Ｔ細胞との相互関連はなかった。（ＫａｗａｋａｍｉＹ．ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５，１５４（８）：３９６１－８）。別の研究では、がん抗原を有する黒色腫患者の免疫処置により循環ＣＤ８＋ＣＴＬの数が増加したが、腫瘍退縮との相互関連はなかった（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇｅｔａｌ．，１９９８，ＮａｔｕｒｅＭｅｄｉｃｉｎｅ４：３２１）。
【０００５】
このような非一貫性は、腫瘍の微小環境が複雑であり、腫瘍の微小環境が、主に、Ｔ細胞の細胞傷害性効果を下方制御することにより腫瘍生存を促進するという事実に関係する。制御性Ｔ細胞（すなわちＴｒｅｇ）媒介の免疫寛容原性応答が発生し、これは主に、免疫優性腫瘍抗原を認識する、高存在量、高結合活性を示す腫瘍浸潤Ｔ細胞に対し向けられることが多い。加えて、抗原の損失は、腫瘍が免疫反応性を逃れる手段をもたらし得る。したがって、腫瘍から単離されたＴ細胞（例えば、ＴＩＬ）を高い抗原認識及び増大のためにｅｘｖｉｖｏで選択し、患者に再注入する場合、当該細胞はほとんどの場合、ドミナントな腫瘍抗原（複数可）に向けられ、腫瘍負荷の一時的な低減をもたらすにとどまる。このような腫瘍は、処置レジメンで複数の抗原標的化Ｔ細胞集団を使用した場合であっても、以後の投与に対し抵抗性を有する可能性がある（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００３，２６（５）：３８５－３９３）。また、先行研究では、養子Ｔ細胞療法の利点は、事前のリンパ枯渇処理（ｌｙｍｐｈｏｄｅｐｌｅｔｉｏｎ）で抑制的なリンパ球機能を打ち消すことにより増強されることが指摘されている。過去の事例では、化学療法で予め宿主の条件を整えることで、後続の免疫療法に対する応答が増大した（ＤｕｄｌｅｙＭ．Ｅ．ｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００２，Ｏｃｔ２５；２９８（５５９４）：８５０－４；ＤｕｄｌｅｙＭ．Ｅ．ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，２００５，Ａｐｒ１；２３（１０）：２３４６－５７）；（米国特許第８，０３４，３３４号）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
米国特許第８，０３４，３３４号
【非特許文献】
【０００７】
Ｒｉｄｄｅｌｌｅｔａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ１９９２；２５７：２３８
Ｒｏｏｎｅｙｅｔａｌ．Ｂｌｏｏｄ１９９８；９２：１５４９－５５
ＫａｗａｋａｍｉＹ．ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５，１５４（８）：３９６１－８
Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇｅｔａｌ．，１９９８，ＮａｔｕｒｅＭｅｄｉｃｉｎｅ４：３２１
Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００３，２６（５）：３８５－３９３
ＤｕｄｌｅｙＭ．Ｅ．ｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００２，Ｏｃｔ２５；２９８（５５９４）：８５０－４
ＤｕｄｌｅｙＭ．Ｅ．ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，２００５，Ａｐｒ１；２３（１０）：２３４６－５７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、より良好な養子Ｔ細胞療法が依然必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
一態様において、本発明は、１つ以上の標的抗原に対し反応性のＴ細胞が豊富化された、養子細胞療法に有用な組成物を作製する方法を提供する。一実施形態において、本発明は、Ｔ細胞を含む組成物を作製する方法であって、以下ステップ：
（ａ）Ｔ細胞を含む初期細胞集団を得ることと、
（ｂ）細胞集団を１つ以上の標的抗原及びサイトカインに曝露することにより、Ｔ細胞を刺激することと、
（ｃ）細胞集団をサイトカインを含む培地中で培養することと、
（ｄ）細胞集団の抗原特異的反応性を試験することと、
（ｅ）得られたＴ細胞を含む組成物を採取することと
を含む、方法を提供する。
【００１０】
一実施形態において、Ｔ細胞を含む初期細胞集団は、患者血液からの末梢血単核球（ＰＢＭＣ）である。一実施形態において、初期細胞集団は凍結され、当該方法の開始前に解凍される。一実施形態において、当該方法は、初期細胞集団において、総Ｔ細胞（ＣＤ３＋）と、ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞、単球、Ｂ細胞、ならびにＮＫ細胞の量とを試験することをさらに含む。
（【００１１】以降は省略されています）

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