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公開番号2025023052
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-02-14
出願番号2024206738,2020554040
出願日2024-11-27,2019-10-31
発明の名称抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩
出願人味の素株式会社
代理人弁理士法人秀和特許事務所
主分類C07K 14/31 20060101AFI20250206BHJP(有機化学)
要約【課題】本発明は、抗体の修飾、特に、抗体の位置選択的な修飾を可能にする技術を開発することを目的とする。
【解決手段】抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩であって、
下記式(I):
A-L-B-R (I)
〔式中、
Aは、抗体に対する親和性物質であり、
Lは、切断性部分を含む2価の基である切断性リンカーであり、
Bは、(a)生体直交性官能基を含む2価の基、または(b)生体直交性官能基を含まない2価の基であり、
Rは、前記抗体に対する反応性基である。〕で表されるものであり、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基(Q)をN末端に含むポリペプチドである、化合物またはその塩。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩であって、
前記化合物が、下記式（Ｉ）：
Ａ－Ｌ－Ｂ－Ｒ（Ｉ）
〔式中、
Ａは、抗体に対する親和性物質であり、
Ｌは、切断性部分を含む２価の基である切断性リンカーであり、
Ｂは、（ａ）生体直交性官能基を含む２価の基、または（ｂ）生体直交性官能基を含まない２価の基であり、
Ｒは、前記抗体に対する反応性基である。〕で表されるものであり、かつ
抗体に対する親和性物質が、グルタミン残基（Ｑ）をＮ末端に含むポリペプチドである、化合物またはその塩。
続きを表示（約 1,800 文字）【請求項２】
前記ポリペプチドが、グルタミン残基（Ｑ）－グルタミン酸（Ｅ）－スレオニン残基（Ｔ）からなるトリペプチド（ＱＥＴ）をＮ末端に含むポリペプチドである、請求項１記載の化合物またはその塩。
【請求項３】
グルタミン残基がピログルタミル化されている、請求項１または２記載の化合物またはその塩。
【請求項４】
前記ポリペプチドが、１６個以上１２３個以下のアミノ酸残基数を有するポリペプチドである、請求項１～３のいずれか一項記載の化合物またはその塩。
【請求項５】
前記ポリペプチドが、２０個以上７０個以下のアミノ酸残基数を有するポリペプチドである、請求項１～３のいずれか一項記載の化合物またはその塩。
【請求項６】
前記ポリペプチドが、以下（１）～（４）からなる群より選ばれる、請求項１～５のいずれか一項記載の化合物またはその塩：
TIFF
2025023052000063.tif
45
153
〔Ｑは、Ｎ末端のグルタミン残基であり、Ｅはグルタミン酸残基であり、Ｔはスレオニン残基であり、実線は結合手であり、スペーサー部分は１個以上５０個以下のアミノ酸残基からなる部分であり、抗体に対する親和性物質は１５個以上７０個以下のアミノ酸残基からなる部分である。〕。
【請求項７】
抗体に対する親和性ポリペプチド部分が、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＬ、プロテインＺ、および抗体に対する親和性を有するそれらの断片、ならびに抗体に対する親和性を有するそれらの変異体からなる群より選ばれる、請求項６記載の化合物またはその塩。
【請求項８】
抗体に対する親和性ポリペプチド部分が、ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＸＩＸＳＩＲＤＤＣ（配列番号５）のアミノ酸配列（２つのＸは、それぞれ独立して、アルギニン残基、グルタミン酸残基、およびグルタミン残基からなる群より選ばれる１つのアミノ酸残基である。）において、いずれかの１つのアミノ酸残基が、リジン残基により置換されており、かつ配列番号５のアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項６または７記載の化合物またはその塩。
【請求項９】
抗体に対する親和性ポリペプチド部分が、ＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号６）のアミノ酸配列において、いずれかの１つのアミノ酸残基が、リジン残基により置換されており、かつ配列番号６のアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項６～８のいずれか一項記載の化合物またはその塩。
【請求項１０】
抗体に対する親和性物質が、下記からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含む、請求項１～９のいずれか一項記載の化合物またはその塩：
（１）ＱＥＴＮＰＴＥＮＬＹＦＱＱＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号７）；
（２）ＱＴＡＤＮＱＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣＳＱＳＡＮＬＬＡＥＡＱＱＬＮＤＡＱＡＰＱＡ（配列番号８）；
（３）ＱＥＴＫＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号９）；
（４）ＱＥＴＦＮＫＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号１０）；
（５）ＱＥＴＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＫＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＲＤＤＣ（配列番号２２）；
（６）ＱＥＴＦＮＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ（配列番号２３）；
（７）ＱＥＴＭＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ（配列番号５１）；
（８）ＱＥＴＱＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ（配列番号５２）；
（９）ＱＥＴＣＱＲＲＦＹＥＡＬＨＤＰＮＬＮＥＥＱＲＮＡＲＩＲＳＩＫＤＤＣ（配列番号５３）；
（１０）ＱＥＴＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＬＶＷＣＴＹＨ（配列番号２４）；および
（１１）ＱＥＴＲＧＮＣＡＹＨＫＧＱＩＩＷＣＴＹＨ（配列番号２５）。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩などに関する。
続きを表示（約 2,400 文字）【背景技術】
【０００２】
近年、抗体薬物複合体（ＡｎｔｉｂｏｄｙＤｒｕｇＣｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ：ＡＤＣ）の研究開発が盛んに行われている。ＡＤＣはその名の通り、抗体に薬物（例、抗がん剤）をコンジュゲーションした薬剤であり、がん細胞などに対して直接的な殺細胞活性を有する。代表的なＡＤＣとしては、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅ社およびＲｏｃｈｅ社が共同開発したＴ－ＤＭ１（商品名：カドサイラ（登録商標））がある（非特許文献１～３）。
【０００３】
Ｔ－ＤＭ１を始めとするＡＤＣは、開発当初からその不均一性が問題となっている。すなわち、抗体中に７０～８０程度あるＬｙｓ残基に対して、低分子薬物をランダムに反応させているため、薬物抗体比（ＤｒｕｇＡｎｔｉｂｏｄｙＲａｔｉｏ：ＤＡＲ）やコンジュゲーション位置が一定ではない。通常このようなランダムコンジュゲーション法になるとＤＡＲが０～８の範囲となり、薬物の結合数が異なる複数の薬剤が生じることが分かっている。近年ＡＤＣの薬物の結合数および結合位置を変化させると、体内動態や薬物の放出速度、効果が変化することが報告されている。これらのことから次世代型ＡＤＣではコンジュゲーションする薬物の個数と位置を制御することが求められている。個数および位置が一定であると、期待通りのｅｆｆｉｃａｃｙ、コンジュゲーション薬剤のバリエーション、ロット差いわゆるレギュレーションの問題が解決すると考えられている（非特許文献４）。
【０００４】
抗体の位置選択的修飾法は世界中で研究されているが、そのほとんどが遺伝子工学的手法もしくは酵素を用いた修飾法である。遺伝子工学的修飾法に関しては、位置選択性、個数選択性は制御できるものの、抗体自体の発現効率が低下（ＡＤＣを調製する際の総収率が低下）するなどの問題が指摘されている。また、抗体発現系の構築などに長い年月を要することが問題となっている（非特許文献５～７）。
【０００５】
また、小分子プローブを利用して細胞内のような夾雑な環境下でタンパク質を化学修飾する方法が近年報告されている。本手法は、イメージングや低分子薬物のリポジショニングを行う上で受容体の同定などに利用されている。また、ケミカルバイオロジー分野において、合成小分子プローブを用いた有機化学的なタンパク質修飾法が注目されている（非特許文献８～１０）。
【０００６】
最近、Ｃ－ＣＡＰ（ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｎｊｕｇａｔｉｏｎｂｙＡｆｆｉｎｉｔｙＰｅｐｔｉｄｅ）法が開発された。本方法は、親和性ペプチド（Ａｆｆｉｎｉｔｙ
Ｐｅｐｔｉｄｅ）に対してＮＨＳ活性化エステルおよび薬物が連結されたペプチド試薬を抗体と反応させる方法（すなわち、ペプチド部分を含むリンカーを介したＡＤＣの作製方法）により、抗体の位置選択的な修飾に成功している。本方法は世界で初めて、化学合成的手法により、薬物で抗体Ｆｃ領域を位置選択的に修飾することに成功したものであり、しかも実用上も良好な結果〔反応時間３０分、収率７０％（ＤＡＲ１の場合）、位置選択性１００％〕が確認されている。ペプチド試薬を５等量程度加えることで、ＤＡＲを２で制御できることが実証されており、修飾位置も制御できる点で画期的である（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
国際公開第２０１６／１８６２０６号
【非特許文献】
【０００８】
ＲｅｉｃｈｅｒｔＪＭｅｔａｌ．，ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ２００５；２３：１０７３－８
ＫｕｂｏｔａＴｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＳｃｉ２００９；１００：１５６６－７２
ＷｕＡＭｅｔａｌ．，ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ２００５；２３：１１３７－４６
ＪｕｎｕｔｕｌａＪＲｅｔａｌ．，ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ２００８；２６：９２５－３２
ＳｈｅｎＢＱｅｔａｌ．，ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ２０１２；３０：１８４－９
ＨｏｆｅｒＴｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２００９；４８：１２０４７－５７
ＬｉｕＷｅｔａｌ．，ＮａｔＭｅｔｈｏｄｓ２００７；４：２３９－４４
Ｓ．Ｔ．Ｌａｕｇｈｌｉｎｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２００８；３２０，６６４
Ａ．Ｅ．Ｓｐｅｅｒｓｅｔａｌ．，ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ２００４；５，４１
Ｙ．Ｔａｋａｏｋａｅｔａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１３；５２，４０８８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、抗体の修飾、特に、抗体の位置選択的な修飾を可能にする技術を開発することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、鋭意検討した結果、（１）抗体に対する親和性物質、および（２）その抗体を構成するアミノ酸残基に対する反応性基、ならびに（３）当該親和性物質と当該反応性基との間に切断性部分を含み、（４）切断性部分での切断により生体直交性官能基を反応性基側に有する構造単位（すなわち、生体直交性官能基および反応性基を含む構造単位）を生成できるという構造的特徴を有する、新規かつ独創的な設計思想に基づき開発された化合物が、抗体の位置特異的な修飾に有用であることを見出した（例、図１－１、図１－２、図１－３、図２）。
（【００１１】以降は省略されています）

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