特許ウォッチ

公開番号2024175939
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-12-19
出願番号2023094053
出願日2023-06-07
発明の名称細胞外小胞の解析方法
出願人東ソー株式会社,公益財団法人相模中央化学研究所
代理人
主分類C12Q 1/00 20060101AFI20241212BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】細胞外小胞のオミックス解析を簡便かつ精度高く実施可能な方法を提供すること。
【解決手段】試料中に含まれる細胞外小胞を不溶性担体と当該担体に固定化した、スフィンゴミエリン結合性タンパク質を含むスフィンゴミエリン認識分子とを含む吸着剤に吸着させる工程と、前記吸着剤に吸着した細胞外小胞に存在する分子を解析する工程とを含む方法で、細胞外小胞をオミックス解析することにより、前記課題を解決する
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
試料中に含まれる細胞外小胞を、細胞外小胞を吸着可能な吸着剤に吸着させる工程と、前記吸着剤に吸着した細胞外小胞に存在する分子を解析する工程とを含む、細胞外小胞のオミックス解析方法であって、
前記吸着剤が、不溶性担体と、前記不溶性担体に固定化した、スフィンゴミエリン結合性タンパク質を含むスフィンゴミエリン認識分子とを含む吸着剤である、前記解析方法。
続きを表示（約 570 文字）【請求項２】
スフィンゴミエリン認識分子が、スフィンゴミエリン結合性タンパク質、および不溶性担体との結合能を有した固定化補助タンパク質をさらに含む、請求項１に記載の解析方法。
【請求項３】
細胞外小胞に存在する分子が、細胞外小胞に存在するタンパク質である、請求項１に記載の解析方法。
【請求項４】
スフィンゴミエリン結合性タンパク質がイクイナトキシンである、請求項１から３のいずれかに記載の解析方法。
【請求項５】
イクイナトキシンが以下の（ａ）から（ｃ）のいずれかから選択されるタンパク質である、請求項４に記載の解析方法：
（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるアミノ酸残基を少なくとも含む、タンパク質；
（ｂ）配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるアミノ酸残基を少なくとも含み、ただし前記アミノ酸残基において１もしくは数個の位置での１もしくは数個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入および付加のうち、いずれか１つ以上をさらに有し、かつスフィンゴミエリン結合能を有するタンパク質；
（ｃ）配列番号１に記載のアミノ酸配列全体に対して７０％以上の相同性を有するアミノ酸配列からなるアミノ酸残基を少なくとも含み、かつスフィンゴミエリン結合能を有するタンパク質。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、試料中に含まれる細胞外小胞の解析方法に関する。特に本発明は、当該細胞外小胞のオミックス解析を精度高く実施可能な方法に関する。
続きを表示（約 1,100 文字）【背景技術】
【０００２】
細胞外小胞は、その内部にマイクロＲＮＡ、メッセンジャーＲＮＡなどの核酸やタンパク質などの物質を含んでおり、細胞間の情報伝達を担っていると考えられていることから、がんなどの各種疾患のバイオマーカーとして注目されるだけでなく、新規治療薬やドラックデリバリーシステムとしての応用も期待されている（非特許文献１）。
【０００３】
前記目的で細胞外小胞を利用する場合、試料中に含まれる細胞外小胞を単離し、当該単離した細胞外小胞中に含まれるタンパク質や核酸などを解析（いわゆるオミックス［ｏｍｉｃｓ］解析）する必要がある。
【０００４】
オミックス解析使用を目的とした細胞外小胞を単離する方法として、細胞外小胞表面に存在するホスファチジルセリンに対し結合性を有するアネキシンＶやＴｉｍ４を利用した方法が知られており（特許文献１および非特許文献２）、当該方法は細胞外小胞を簡便な操作で単離できる。しかしながら、当該方法によって単離された細胞外小胞の精製度は低く、オミックス解析用途には不十分であった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
ＷＯ２０１６／０８８６８９号
【非特許文献】
【０００６】
Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，２０１３年，１３巻，１６３７－１６５３頁
日本薬理学雑誌，２０１７年，１４９巻，１１９－１２２頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、細胞外小胞のオミックス解析を簡便かつ精度高く実施可能な方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者等は上記の課題を解決すべく鋭意検討した結果、試料中に含まれる細胞外小胞を、不溶性担体と当該担体に固定化したスフィンゴミエリン認識分子とを含む吸着剤を用いて単離することで、前記細胞外小胞を簡便、かつオミックス解析に利用可能な精製度で単離できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち本発明は、以下の［１］から［５］に記載の態様を包含する。
【００１０】
［１］試料中に含まれる細胞外小胞を、細胞外小胞を吸着可能な吸着剤に吸着させる工程と、前記吸着剤に吸着した細胞外小胞に存在する分子を解析する工程とを含む、前記細胞外小胞のオミックス解析方法であって、前記吸着剤が、不溶性担体と、前記不溶性担体に固定化したスフィンゴミエリン結合性タンパク質を含むスフィンゴミエリン認識分子とを含む吸着剤である、前記解析方法。
（【００１１】以降は省略されています）

関連特許