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公開番号2024156654
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-11-06
出願番号2024101016,2020524434
出願日2024-06-24,2018-11-05
発明の名称新規操作T細胞受容体およびそれを使用した免疫療法
出願人イマティクスバイオテクノロジーズゲーエムベーハー
代理人個人,個人,個人,個人
主分類C07K 16/18 20060101AFI20241029BHJP(有機化学)
要約【課題】がん細胞に高度に特異的な分子を特異的に標的化する、新たな抗がん剤を提供する。
【解決手段】抗原COL6A3を発現する腫瘍に対して選択的かつ特異的な、新規操作T細胞受容体(TCR)ベースの分子を提供する。本発明のTCR、およびそれに由来するCOL6A3抗原結合断片は、COL6A3を発現するがん性疾患の診断、治療、および予防に有用である。さらに、本発明の抗原認識コンストラクトをコードする核酸、これらの核酸を含んでなるベクター、抗原認識コンストラクトを発現する組換え細胞、および本発明の化合物を含んでなる医薬組成物が提供される。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
配列番号５（ＣＤＲａ１）、６（ＣＤＲａ２）、および７（ＣＤＲａ３）に記載のアミノ酸配列を含んでなる、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなる第１のドメインと、配列番号１３（ＣＤＲｂ１）、１４（ＣＤＲｂ２）、および１５（ＣＤＲｂ３）に記載のアミノ酸配列を含んでなる、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなる第２のドメインとを含んでなる、抗原認識コンストラクトであって、前記相補性決定領域の少なくとも１つが、
ａ）配列番号２６（ＣＤＲａ１変異体１）および配列番号３７～４９（ＣＤＲｂ１-ｍｕｔ１～ＣＤＲｂ１-ｍｕｔ１３）、および
ｂ）配列番号２６および配列番号３７～４９の少なくとも１つを含んでなる変異配列からなる群から選択されるアミノ酸配列
の群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも１つで置換され、前記少なくとも１つのアミノ酸配列が、１つ、２つ、または３つのアミノ酸置換を含有する、抗原認識コンストラクト。
続きを表示（約 1,200 文字）【請求項２】
前記抗原認識コンストラクトが安定であり、特にＭＨＣに関する文脈で、特に配列番号１に記載のアミノ酸配列を含んでなるＣＯＬ６Ａ３抗原ペプチドに、特異的および／または選択的に結合できる、請求項１に記載の抗原認コンストラクト。
【請求項３】
前記抗原認識コンストラクトが、抗体、または二重特異性分子または断片などのその誘導体であり、またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、または二重特異性分子または断片などのその誘導体である、請求項１または２に記載の抗原認識コンストラクト。
【請求項４】
前記第１のドメインがＴＣＲαまたはγ鎖の一部であり、および／または前記第２のドメインがＴＣＲβまたはδ鎖の一部である、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗原認識コンストラクト。
【請求項５】
請求項１～４のいずれか一項に記載の抗原認識コンストラクトをコ-ドする核酸、または前記核酸を含んでなる核酸ベクタ-。
【請求項６】
請求項１～４のいずれか一項に記載の抗原認識コンストラクト、または請求項５に記載の核酸またはベクタ-を含んでなる組換え宿主細胞であって、好ましくは、ａ）Ｔリンパ球などのリンパ球、または例えば、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞などのＴリンパ球始原細胞、またはｂ）チャイニ-ズハムスタ-卵巣（ＣＨＯ）細胞などの非リンパ球である、組換え宿主細胞。
【請求項７】
請求項１～４のいずれか一項に記載の抗原認識コンストラクト、または請求項５に記載の核酸もしくはベクタ-、または請求項６に記載の宿主細胞、および薬学的に許容可能な担体、希釈剤、安定剤および／または賦形剤を含んでなる、医薬組成物。
【請求項８】
ａ．適切な宿主細胞を提供するステップと、
ｂ．請求項１～４のいずれか一項に記載の抗原認識コンストラクトをコ-ドするコ-ド配列を含んでなる、遺伝子コンストラクトを提供するステップと、
ｃ．前記遺伝子コンストラクトを前記適切な宿主細胞に導入するステップと、
ｄ．前記適切な宿主細胞によって前記遺伝子コンストラクトを発現させるステップと
を含んでなる、請求項１～４のいずれか１項に記載のＣＯＬ６Ａ３特異的抗原認識コンストラクトを生成する方法。
【請求項９】
前記抗原認識コンストラクトを前記適切な宿主細胞から単離し精製するステップと、任意選択的に、前記抗原認識コンストラクトをＴ細胞中で再構成するステップとをさらに含んでなる、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
医療で使用するための、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗原認識コンストラクト、請求項５に記載の核酸またはベクタ-、請求項６に記載の宿主細胞、または請求項７に記載の医薬品組成物。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＣＯＬ６Ａ３抗原に対する抗原認識コンストラクトに関する。本発明は、特に、抗原ＣＯＬ６Ａ３を発現する腫瘍に対して選択的かつ特異的な、新規操作Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）ベ-スの分子を提供する。本発明のＴＣＲ、およびそれに由来するＣＯＬ６Ａ３抗原結合断片は、ＣＯＬ６Ａ３を発現するがん性疾患の診断、治療、および予防に有用である。さらに、本発明の抗原認識コンストラクトをコ-ドする核酸、これらの核酸を含んでなるベクタ-、抗原認識コンストラクトを発現する組換え細胞、および本発明の化合物を含んでなる医薬組成物が提供される。
続きを表示（約 3,400 文字）【背景技術】
【０００２】
コラ-ゲンは様々な組織の完全性を維持する上で役割を果たす、タンパク質のス-パ-ファミリ-である。コラ-ゲンは細胞外マトリックスタンパク質であり、それらの共通の構造要素として三重らせんドメインを有する。コラ-ゲンＶＩは、ミクロフィブリルの主要な構造成分である。コラ-ゲンＶＩの基本的な構造単位は、αｌ（ＶＩ）、α２（ＶＩ）、およびα３（ＶＩ）コラ-ゲン鎖のヘテロ三量体である。αｌ（ＶＩ）およびα２（ＶＩ）鎖は、それぞれＣＯＬ６Ａ１およびＣＯＬ６Ａ２遺伝子によってコ-ドされる。ＣＯＬ６Ａ３遺伝子によってコ-ドされるタンパク質は、ＶＩ型コラ-ゲンのα３サブユニット（α３（ＶＩ）コラ-ゲン鎖）である（Ｂｅｒｔｉｎｉｅｔａｌ．，２００２Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐａｅｄｉａｔｒ．Ｎｅｕｒｏｌ６：１９３-８）。ＣＯＬ６Ａ３の遺伝子発現は、乳がんの進行に関連し、大腸がんでは上昇する（ＳｍｉｔｈＭＪ，ｅｔａｌ．”Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒａｎｄｓｔｒｏｍａｕｓｉｎｇｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ-ａｃｔｉｖａｔｅｄｃｅｌｌｓｏｒｔｉｎｇｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ”Ｂｒｉｔｉｓｈｊｏｕｒｎａｌｏｆｃａｎｃｅｒ．２００９；１００：１４５２-１４６４；ＴｉｌｍａｎＧｅｔａｌ”Ｈｕｍａｎｐｅｒｉｏｓｔｉｎｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｎｏｒｍａｌｔｉｓｓｕｅｓ，ｔｕｍｏｒｓａｎｄｍｅｌａｎｏｍａ：ｅｖｉｄｅｎｃｅｓｆｏｒｐｅｒｉｏｓｔｉｎｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｙｂｏｔｈｓｔｒｏｍａｌａｎｄｍｅｌａｎｏｍａｃｅｌｌｓ”ＭｏｌＣａｎｃｅｒ．２００７；６：８０）ことが以前示されており、結腸直腸がんの予後マ-カ-であることが示されている（ＱｉａｏＪｅｔａｌ．”ＳｔｒｏｍａｄｅｒｉｖｅｄＣＯＬ６Ａ３ｉｓａｐｏｔｅｎｔｉａｌｐｒｏｇｎｏｓｉｓｍａｒｋｅｒｏｆｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｒｃｉｎｏｍａｒｅｖｅａｌｅｄｂｙｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ”Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．２０１５Ｏｃｔ６；６（３０）：２９９２９-２９９４６）。ＣＯＬ６Ａ３遺伝子はヒトゲノムの２ｑ３７に位置し、４４個のエクソンを含む。ＣＯＬ６Ａ３タンパク質は、３１７７個のアミノ酸を有し、１２個のフォンヴィレブランド因子Ａ型（ｖＷＡ）ドメイン、１個のフィブロネクチン３型ドメイン、および１個のＢＰＴＩ／クニッツファミリ-のセリンプロテア-ゼ阻害剤（ＫＵ）ドメインを含む。
【０００３】
Ｔ細胞ベ-スの免疫療法の標的は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）の分子によって提示される、腫瘍関連または腫瘍特異的タンパク質に由来する、ペプチドエピト-プに相当する。これらの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）は、酵素、受容体、転写因子などの全てのタンパク質クラスに由来するペプチドであり得て、それらは各腫瘍細胞内で発現され、同一起源の非改変細胞内と比較して、通常、上方制御される。
【０００４】
細胞性免疫応答の特定の要素は、腫瘍細胞を選択的に認識し破壊できる。腫瘍浸潤性細胞集団からの、または末梢血からの腫瘍抗原特異的Ｔ細胞の単離は、がんに対する自然免疫防御において、このような細胞が重要な役割を果たすことを示唆する。特に、細胞質ゾル内に位置するタンパク質または欠陥リボソ-ム産物（ＤＲｉＰ）に由来する、通常は８～１０アミノ酸残基の主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）保有ペプチドのクラスＩ分子を認識するＣＤ８陽性Ｔ細胞が、この応答において重要な役割を果たす。ヒトのＭＨＣ分子はまた、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）とも称される。
【０００５】
ＴＣＲは、シグナル伝達媒介に関与するＣＤ３複合体のインバリアントタンパク質に関連する、免疫グロブリンス-パ-ファミリ-のヘテロ二量体細胞表面タンパク質である。ＴＣＲはαβおよびγδヘテロ二量体として存在し、それらは構造的に類似しているが、かなり異なる解剖学的位置とおそらくは機能とを有する。天然のヘテロ二量体αβＴＣＲの細胞外部分は２つのポリペプチド鎖からなり、そのそれぞれは膜近位定常ドメインおよび膜遠位可変ドメインを有する。定常ドメインおよび可変ドメインのそれぞれは、鎖内ジスルフィド結合を含む。可変ドメインは、抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）に類似した、高度に多型性のル-プを含有する。ＴＣＲ遺伝子治療の使用は、いくつかの現在のハ-ドルを克服する。それは、患者自身のＴ細胞に所望の特異性を与えて、十分な数のＴ細胞を短期間で生成できるようにし、それらの枯渇を回避する。ＴＣＲは、中央記憶Ｔ細胞または幹細胞の特徴を有するＴ細胞に形質導入され、それは移入時におけるより良好な持続性および機能を確実にしてもよい。ＴＣＲ操作Ｔ細胞は、化学療法または照射によってリンパ球減少症になったがん患者に注入され、効率的な生着ができるようにするが、免疫抑制は阻害する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
がん治療のための分子標的薬の開発が進歩しているものの、当該技術分野において、がん細胞に高度に特異的な分子を特異的に標的化する、新たな抗がん剤を開発する必要性がなおもある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本明細書は、開示されるようなＣＯＬ６Ａエピト-プに特異的に結合する、新規操作ＣＯＬ６Ａ３ＴＣＲ、それぞれの組換えＴＣＲコンストラクト、核酸、ベクタ-、および宿主細胞と；がんの治療においてこのような分子を使用する方法とを提供することによって、この必要性に対処する。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
第１の態様では、本発明の目的は、配列番号５（ＣＤＲａ１）、６（ＣＤＲａ２）、および７（ＣＤＲａ３）に記載の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなる第１のドメインと、配列番号１３（ＣＤＲｂ１）、１４（ＣＤＲｂ２）、および１５（ＣＤＲｂ３）に記載の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなる第２のドメインとを含んでなる抗原認識コンストラクトによって解決され、前記相補性決定領域の少なくとも１つは、ａ）配列番号２６（ＣＤＲａ１-ｍｕｔ１）、および配列番号３７～４９（ＣＤＲｂ１-ｍｕｔ１～ＣＤＲｂ１-ｍｕｔ１３）、好ましくは配列番号４０、およびｂ）保存的アミノ酸交換を含んでなる、配列番号２６、および配列番号３７～４９、好ましくは配列番号４０の変異配列の群から選択される、少なくとも１つの配列で置換される。
【０００９】
別の態様では、抗原認識コンストラクトのＣＤＲａ１は、配列番号５に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の同一性を有してもよい。
【００１０】
別の態様では、抗原認識コンストラクトのＣＤＲａ２は、配列番号６に記載のアミノ酸配列と、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の同一性を有してもよい。
（【００１１】以降は省略されています）

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