特許ウォッチ

公開番号2025081763
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-05-27
出願番号2025034586,2022205946
出願日2025-03-05,2017-03-13
発明の名称新しい免疫調節細胞およびその製造方法
出願人トリゼルゲーエムベーハー
代理人個人,個人,個人
主分類C12N 5/0786 20100101AFI20250520BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】様々な免疫学的および非免疫学的な疾患および症状を処置するのに有用な新規免疫調節性マクロファージ細胞を作製するための方法、得られるマクロファージ細胞、ならびにマクロファージ細胞を含む医薬組成物を提供する。
【解決手段】(a)対象の血液試料からCD14陽性単球を単離することと;(b)該単球を気体透過性バッグ内で、(i)M-CSFおよび/またはGM-CSFならびに(ii)CD16リガンドを含有する培地中で培養することと;(c)該細胞をIFN-γと接触させることと;(d)該培地から該免疫調節性マクロファージ細胞を得ることとを含む、免疫調節性マクロファージ細胞を作製するための方法とする。
【選択図】図10
特許請求の範囲【請求項１】
（ａ）対象の血液試料からＣＤ１４陽性単球を単離することと；
（ｂ）該単球を気体透過性バッグ内で、（ｉ）Ｍ－ＣＳＦおよび／またはＧＭ－ＣＳＦならびに（ｉｉ）ＣＤ１６リガンドを含有する培地中で培養することと；
（ｃ）該細胞をＩＦＮ－γと接触させることと；
（ｄ）該培地から該免疫調節性マクロファージ細胞を得ることと
を含む、免疫調節性マクロファージ細胞を作製するための方法。
続きを表示（約 720 文字）【請求項２】
ステップ（ｂ）において該培地がヒト血清、例えばヒトＡＢ血清を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ステップ（ｂ）において該Ｍ－ＣＳＦおよび／またはＧＭ－ＣＳＦの濃度が５～１００ｎｇ／ｍｌ、好ましくは２０～２５ｎｇ／ｍｌの範囲である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ステップ（ｂ）において該単球がＩＦＮ－γ刺激に先立って少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、または少なくとも７日間培養される、請求項１～３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
該気体透過性バッグがプラスチック、好ましくはポリオレフィンで作られている、請求項１～４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
ステップ（ｃ）において該ＩＦＮ－γの濃度が５～１００ｎｇ／ｍｌ、好ましくは２０～２５ｎｇ／ｍｌの範囲である、請求項１～５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
請求項１～６に記載の方法によって得られる免疫調節性マクロファージ細胞。
【請求項８】
以下のマーカー：ＣＤ３８、ＣＤ２０９およびシンデカン－３のうちの１つ以上を発現しない、免疫調節性マクロファージ細胞。
【請求項９】
マーカーＣＤ１０３、ＣＤ１０およびＣｌｅｃ－９ａのうちの少なくとも１つを発現する、免疫調節性マクロファージ細胞。
【請求項１０】
マーカーＣＤ８５ｈおよびＣＤ２５８のうちの少なくとも１つをさらに発現する、請求項８または９に記載の免疫調節性マクロファージ細胞。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、様々な免疫学的および非免疫学的な疾患および症状を処置するのに有用な新規免疫調節性マクロファージ細胞に関する。細胞は、他の細胞とは区別される特異なマーカーおよび活性パターンによって特徴付けられる。本発明はさらに、血液単球から免疫調節性マクロファージ細胞を作製するための方法を提供する。さらなる他の態様では、本発明は、本発明の免疫調節性マクロファージ細胞またはその細胞レベル以下の画分を含む医薬組成物に関する。本発明の免疫調節性マクロファージ細胞の細胞レベル以下の画分を作製するための方法も提供する。
続きを表示（約 2,400 文字）【背景技術】
【０００２】
レシピエントに寛容性を確立する手段として寛容ドナーから不寛容レシピエントへ免疫調節細胞を移すことは、実験的免疫学において周知の技術であるが、その臨床的応用は現在になってようやく真剣な注目を集めている［１］。現在のところ、調節性Ｔ細胞［２］、寛容原性樹状細胞［３］および調節性マクロファージ［４］を含めたいくつかの免疫調節細胞種が前臨床開発の時点に到達しつつあり、そのことは、免疫抑制剤としてそれらを初期治験で調査するのを可能にするであろう。
【０００３】
Ｔ細胞およびＢ細胞によって媒介される自己免疫疾患、慢性炎症性障害、移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）および移植拒絶反応を含めた幅広い免疫学的症状が、細胞に基づく免疫調節療法による処置を受けることができる可能性がある。これらの症状では、細胞に基づく免疫調節療法は、全身的な免疫抑制療法または抗炎症療法の必要性を低減または除去さえしてそれによって患者をその付随合併症から救う可能性を有する。調節細胞によって支援される類の免疫寛容は優勢かつ自己持続性であるため、細胞に基づく免疫調節療法が、それ以外ならば長期の全身的な免疫抑制療法または抗炎症療法を必要とするであろう疾患において、治療選択肢を提供する、という可能性が存在する。
【０００４】
移植において補助的免疫抑制剤としての使用のためにとりわけ有望な１つの候補細胞種は、免疫調節性マクロファージ（本明細書中および文献中では「Ｍｒｅｇ」と呼ぶ）である。Ｍｒｅｇ細胞は、マクロファージ分化の特有の状態を反映しており、その堅牢な表現型および強力なＴ細胞抑制剤機能によって他の活性状態にあるマクロファージとは区別される［５］。ヒトＭｒｅｇは、試験管内でマイトジェン刺激によるＴ細胞増殖を強力に抑制し、それは、インターフェロン（ＩＦＮ）γ誘導性インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ活性と接触依存的な活性化Ｔ細胞除去とに起因するものであり得る。加えて、Ｍｒｅｇは、活性化誘導調節性Ｔ細胞の発達を促し、代わってそれはエフェクターＴ細胞の増殖を抑制しかつ樹状細胞の成熟を抑制する。したがって、Ｍｒｅｇをレシピエントに投与する場合には免疫調節のフィードフォワードループが開始されて外来移植物の長期の免疫許容性または免疫病態の防止をもたらすものと仮定される。一連の事例研究および２つの初期治験において、Ｍｒｅｇ含有細胞調合薬が補助的免疫抑制処置の一形態として合計１９名の腎移植レシピエントに投与された［５］～［９］。これらの試験的研究は、固形臓器移植のためのこの技術の妥当性を明確に実証している。
【０００５】
別の２名の生体腎移植レシピエントは現在、約８．０×１０
6
細胞／ｋｇのより純粋なドナー由来Ｍｒｅｇで処置されている［５］。これら２名の患者は今や移植から６年超が経っており、彼らの単独の維持用免疫抑制としての低用量タクロリムス単剤療法において腎機能は安定している。生体腎移植におけるＭｒｅｇ療法のさらなる治験は今や、ＯＮＥＳｔｕｄｙ（Ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ：ＮＣＴ０２０８５６２９）の枠組み内で規制上の承認を得ている。この治験は、外科手術の７日前における５００ｍｇ／日のミコフェノール酸モフェチルによる援護下で用量２．５×１０
6
～７．５×１０
6
個／ｋｇ体重のドナー由来Ｍｒｅｇ細胞によって１６名の患者を処置することを目的としている。
【０００６】
免疫調節細胞の分野において近年偉大な進歩が遂げられたにもかかわらず、治療目的のため、例えばレシピエントにおける外来移植物の免疫許容性を誘導するために使用することができる調節細胞、およびこれらの細胞を最も効率的な方法で作製する方法は必要とされ続けている。特に、通常患者に対する高毒性に関連した一般的に使用される免疫抑制医薬を減らすのを可能にする、細胞に基づく療法が必要とされている。
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、以前に記載されたＭｒｅｇとは著しく異なる新規な類のＭｒｅｇ細胞を提供する。Ｍｒｅｇ細胞を製造するための改変された方法が新規な類のＭｒｅｇ細胞を生じさせることが予期せずして見出された。具体的には、本発明者らは、Ｍｒｅｇ細胞を作製するために使用する単球細胞を培養フラスコの代わりに気体透過性バッグ内で培養した場合、Ｍｒｅｇ細胞を細胞に基づく療法の手法に大いに適したものにする免疫調節特性を働かせる特有の表現型のＭｒｅｇ細胞が得られることを見出した。これらの細胞は、本明細書において、これらを既知のＭｒｅｇと区別するために「Ｍｒｅｇ－ｂｃ」と称される。
【０００８】
かくして、第１の態様において本発明は、対象の血液試料からの単球を気体透過性バッグ内でＭ－ＣＳＦ／ＧＭ－ＣＳＦ、ＣＤ１６リガンド（例えば免疫グロブリン）およびＩＦＮ－γの存在下で培養することを含む、新規な類のマクロファージを作製する方法に関する。
【０００９】
第２の態様において本発明は、本発明の第１の態様において言及した方法によって得ることができる新規な類のＭｒｅｇ細胞、すなわちＭｒｅｇ－ｂｃ細胞に関する。Ｍｒｅｇ－ｂｃ細胞は、従来技術ではみられなかった特有の表現型を有する。Ｍｒｅｇ－ｂｃ細胞は、この細胞種に特有でありかつ従来技術では記述がなかった有用な治療特性をもたらす生物学的活動を媒介する。
【００１０】
第３の態様において本発明は、本発明の第２の態様に係るＭｒｅｇ－ｂｃ細胞または上記細胞の細胞レベル以下の画分を含む医薬組成物に関する。本発明の新しい細胞種を含有する医薬組成物は、必要に応じてさらなる活性成分または賦形剤を含有していてもよい。
（【００１１】以降は省略されています）

関連特許