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公開番号2025053919
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-04-07
出願番号2023163043
出願日2023-09-26
発明の名称RNAの合成方法
出願人池田食研株式会社
代理人
主分類C12N 15/10 20060101AFI20250331BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】簡便に低コストで製造できるRNA合成用の基質を提供することで、効率よく安価にRNAを合成できるRNAの合成方法を提供し、該合成方法に使用できるRNA合成用キットを提供するものである。
【解決手段】 RNA分解物にポリリン酸を付加したヌクレオシドポリリン酸をDNA依存型RNAポリメラーゼの基質として使用できることを見出し、本発明を完成した。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
ＤＮＡ依存型ＲＮＡポリメラーゼ、鋳型ＤＮＡ、ヌクレオシドポリリン酸（ＮＰＰ）、マグネシウム塩及び緩衝液を含む反応液を用いてインビトロ転写を行うことを特徴とする、ＲＮＡ合成方法であって、ＮＰＰがＲＮＡを酵素分解して得られるヌクレオシドモノリン酸にポリリン酸を付加したＮＰＰであることを特徴とする、ＲＮＡ合成方法。
続きを表示（約 430 文字）【請求項２】
環状ポリリン酸を用いて化学合成によってポリリン酸を付加したＮＰＰであることを特徴とする、請求項１記載のＲＮＡ合成方法。
【請求項３】
環状ポリリン酸がトリメタリン酸であり、ＮＰＰがヌクレオシドテトラリン酸である、請求項１又は２記載のＲＮＡ合成方法。
【請求項４】
ＤＮＡ依存型ＲＮＡポリメラーゼ、ヌクレオシドポリリン酸（ＮＰＰ）、マグネシウム塩及び緩衝液を含み、ＮＰＰがＲＮＡを酵素分解して得られるヌクレオシドモノリン酸にポリリン酸を付加したＮＰＰであることを特徴とする、ＲＮＡ合成用キット。
【請求項５】
環状ポリリン酸を用いて化学合成によってポリリン酸を付加したＮＰＰであることを特徴とする、請求項４記載のＲＮＡ合成用キット。
【請求項６】
環状ポリリン酸がトリメタリン酸であり、ＮＰＰがヌクレオシドテトラリン酸である、請求項４又は５記載のＲＮＡ合成用キット。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＲＮＡの合成方法及びＲＮＡ合成用キット等に関する。
続きを表示（約 1,700 文字）【背景技術】
【０００２】
新型ウイルスの感染拡大に伴い、感染症ワクチンとしてｍＲＮＡワクチンが開発、利用されると共に、がん治療ワクチンとしてもｍＲＮＡの研究が進められる等、ＲＮＡ合成の需要が急速に高まっている。
【０００３】
現在、ＲＮＡの合成は、ＲＮＡポリメラーゼ、ＮＴＰ等を使用して、目的の配列を挿入したＤＮＡを鋳型として、インビトロ転写により行われている。
【０００４】
基質であるＮＴＰは、主に酵素合成により得られることが知られているが、複数種の酵素が必要である点や酵素の基質特異性の点で、ＡＴＰ、ＣＴＰ、ＧＴＰ、ＵＴＰをそれぞれ別の系で合成する必要があるため、コストが高くなり、効率も良くないことが知られている（特許文献１又は２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
特許第５８００２１８号公報
特許第４２５６３４１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、簡便に低コストで製造できるＲＮＡ合成用の基質を提供することで、効率よく安価にＲＮＡを合成できるＲＮＡの合成方法を提供し、該合成方法に使用できるＲＮＡ合成用キットを提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明では、ＲＮＡ分解物にポリリン酸を付加したヌクレオシドポリリン酸をＤＮＡ依存型ＲＮＡポリメラーゼの基質として使用できることを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
すなわち、本発明は、以下の［１］～［６］の態様に関する。
［１］ＤＮＡ依存型ＲＮＡポリメラーゼ、鋳型ＤＮＡ、ヌクレオシドポリリン酸（ＮＰＰ）、マグネシウム塩及び緩衝液を含む反応液を用いてインビトロ転写を行うことを特徴とする、ＲＮＡ合成方法であって、ＮＰＰがＲＮＡを酵素分解して得られるヌクレオシドモノリン酸にポリリン酸を付加したＮＰＰであることを特徴とする、ＲＮＡ合成方法。
［２］環状ポリリン酸を用いて化学合成によってポリリン酸を付加したＮＰＰであることを特徴とする、［１］記載のＲＮＡ合成方法。
［３］環状ポリリン酸がトリメタリン酸であり、ＮＰＰがヌクレオシドテトラリン酸である、［１］又は［２］記載のＲＮＡ合成方法。
［４］ＤＮＡ依存型ＲＮＡポリメラーゼ、ヌクレオシドポリリン酸（ＮＰＰ）、マグネシウム塩及び緩衝液を含み、ＮＰＰがＲＮＡを酵素分解して得られるヌクレオシドモノリン酸にポリリン酸を付加したＮＰＰであることを特徴とする、ＲＮＡ合成用キット。
［５］環状ポリリン酸を用いて化学合成によってポリリン酸を付加したＮＰＰであることを特徴とする、［４］記載のＲＮＡ合成用キット。
［６］環状ポリリン酸がトリメタリン酸であり、ＮＰＰがヌクレオシドテトラリン酸である、［４］又は［５］記載のＲＮＡ合成用キット。
【発明の効果】
【０００９】
本発明により、簡便に低コストで製造できるＲＮＡ合成用の基質を提供することで、効率よく安価にＲＮＡを合成できるＲＮＡの合成方法及びＲＮＡ合成用キットを提供できるようになった。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
陽性対照（ＰＣ）、陰性対照（ＮＣ）、調製品１であるＡＴｅＰ組成物を使用した試験４の計３サンプルについてＲＮＡ合成反応を行った、各反応液について、ＴａｐｅＳｔａｔｉｏｎを用いた電気泳動結果を示す。Ａ１：マーカー、Ｂ１：ＰＣ、Ｃ１：ＮＣ及びＤ１：試験４。
陽性対照（ＰＣ）、陰性対照（ＮＣ）、調製品３であるＮＴｅＰ組成物を使用した試験５の計３サンプルについてＲＮＡ合成反応を行った、各反応液について、ＴａｐｅＳｔａｔｉｏｎを用いた電気泳動結果を示す。Ａ１：マーカー、Ｂ１：ＰＣ、Ｃ１：ＮＣ及びＤ１：試験５。
【発明を実施するための形態】
（【００１１】以降は省略されています）

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