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公開番号2025039572
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-03-21
出願番号2024218897,2022208535
出願日2024-12-13,2018-09-07
発明の名称1型及び2型真性糖尿病の治療に(1)ネオ膵島の製造、及び(2)異なる臓器傷害及び疾病の治療に使用される様々な細胞型からのエクソソームの生成のための中空繊維系細胞培養技術の適応
出願人シンバイオセルテック・エルエルシー
代理人個人,個人,個人
主分類C12N 5/071 20100101AFI20250313BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】間葉系又は脂肪系幹細胞又は膵島、又は他の細胞由来のエクソソーム(細胞外ナノ小胞)及び/又はネオ膵島を中空繊維系細胞増殖(HFCE)システム内で生成する方法を提供すること。
【解決手段】中空繊維系細胞増殖(HFCE)システムにおいて間葉系又は脂肪幹細胞及び膵島細胞を増殖させる培養と、前記HFCEシステムからネオ膵島を収集することと、を含む、方法により、上記課題を解決する。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
ネオ膵島を生成するための方法であって、
中空繊維系細胞増殖（ＨＦＣＥ）システムにおいて間葉系又は脂肪幹細胞及び膵島細胞を増殖させる培養と、
前記ＨＦＣＥシステムからネオ膵島を収集することと、を含む、方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本開示は、概して、細胞生物学及び医学の分野に関する。具体的には、本開示は、対象の治療に使用するための細胞及びエクソソームの産生に関し、より具体的には、真性糖尿病の治療に有用な細胞及びエクソソームの産生に関する。
続きを表示（約 2,000 文字）【背景技術】
【０００２】
骨髄、脂肪、臍帯、胎盤、羊水、及び他の供給源からの間葉系幹又は間質細胞（ＭＳＣ）は、様々な急性及び慢性の疾患及び臓器傷害の有望な治療に使用されてきた、強力な抗炎症、抗アポトーシス、有糸分裂性、血管新生及び血管新生保護、免疫調節、抗線維症、抗血栓症、及び抗生パラクリン活性を保有する非胚性の「成体」幹細胞である。最も具体的には、本発明者らは、（ＷｅｓｔｅｎｆｅｌｄｅｒＣ，ＧｏｏｃｈＡ．ら幹細胞移行薬第６巻、第７号、１６３１～１６４３、２０１７年７月）同種異系のＭＳＣ及び同種異系の培養増殖膵島細胞の共凝集体が、ヒト及びイヌＴ１ＤＭ（ＮＯＤマウス）に密接に似ている自己免疫Ｔ１ＤＭのマウスモデルにおいてＴ１ＤＭを永続的に補正することを示した。ＮＩのＭＳＣ成分は、インビボでのインスリン産生内分泌膵島細胞の同種免疫及び自己免疫攻撃に対する強固な保護を提供し、これらは、重篤な感染、悪性腫瘍、肝臓及び腎臓疾患における移植膵島の損傷を引き起こす可能性があるため、毒性の可能性のある抗拒絶薬の使用を不要にする。加えて、ＮＩ技術は、１人の膵臓ドナーからの８０＋治療用量の生成を可能にし、これは、糖尿病レシピエントは、１つの単一の治療のために４人以上のドナーを必要とする膵島移植プロトコルとは対照的である。培養中のＭＳＣは、その多面効果を媒介する有益なサイトカイン及び増殖因子を放出する。加えて、基本的に全ての細胞と同様に、ＭＳＣはエクソソーム（直径３０～１００ｎｍ）をそれらの微小環境内に放出し、隣接する細胞によって取り込まれ、次いで、標的細胞内のパラクリンシグナル伝達をもたらす。シグナル伝達は、完全なＭＳＣのものと本質的に同一である有益な効果を発揮することが知られている、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、タンパク質、及び脂質の横方向の移動によって生じる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
ＷｅｓｔｅｎｆｅｌｄｅｒＣ，ＧｏｏｃｈＡ．ら幹細胞移行薬第６巻、第７号、１６３１～１６４３、２０１７年７月
【発明の概要】
【０００４】
本明細書では、ａ）間葉系及び／又は脂肪幹細胞、ｂ）膵島細胞、ｃ）間葉系及び／又は脂肪幹細胞由来エクソソーム、及びｄ）内皮、筋肉、及び他の培養細胞などの他の細胞型から誘導されるエクソソームを記載する。
ネオ膵島（NeoIslet）（ＮＩ）が更に記載され、ＮＩは間葉及び／又は脂肪幹細胞、及び膵島細胞を含む。
【０００５】
エクソソーム（細胞外ナノ小胞）を生成する方法が本明細書に開示される。このような方法は、間葉系又は脂肪系幹細胞又は膵島、又は中空繊維系細胞増殖（ＨＦＣＥ）システム内の他の細胞の増殖、及び培養増殖間葉、脂肪幹細胞、又はＨＦＣＥシステムからの他の細胞によって放出されるエクソソームを回収することを含んでもよい。
【０００６】
本方法の実施形態では、細胞は、７０～９５％コンフルエンスに増殖される。更なる実施形態では、ＨＦＣＥシステムを通して灌流される培養培地は、中空繊維のルーメンへのエクソソームの放出を増強するように調節されてもよい。
【０００７】
実施形態は、このような方法によって産生されるエクソソーム、及びＴ１ＤＭ、Ｔ２ＤＭ、又は関連する微小血管疾患に罹患している対象を、上記の方法により生成されたエクソソームで処置することによって、治療する方法が挙げられる。特定の実施形態では、エクソソームは、治療前に少なくとも２年間冷凍保存されている。
【０００８】
ネオ膵島を生成するための方法の実施形態が提供される。特定の実施形態は、ＨＦＣＥシステム内の間葉又は脂肪幹細胞及び膵島細胞を増殖させ、ＨＦＣＥシステムからネオ膵島を収集することを含む。本方法の実施形態では、細胞は、７０～９５％コンフルエンスに増殖される。
【０００９】
実施形態では、ＮｅｏＩｓｔｅｌは、ａ）分化した膵島細胞、及び間葉系又は脂肪幹細胞、及び／又は再分化された膵島細胞、及び間葉系又は脂肪幹細胞を含んでもよい。特定の実施形態では、膵島細胞及び幹細胞が、ネオ膵島中で、約１：１００、１：７５、１：５０、１：２５、１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、２５：１、５０：１、７５：１、又は１００：１の膵島細胞：幹細胞比にて存在する。
【００１０】
特定の実施形態では、収集されたネオ膵島は、ヒドロゲル中に配置され、及び／又は封入される。
（【００１１】以降は省略されています）

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