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公開番号2025016593
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-02-04
出願番号2024189114,2022176366
出願日2024-10-28,2018-09-07
発明の名称非ウイルス性カプシド不含DNAベクターの脂質ナノ粒子製剤
出願人ジェネレーションバイオカンパニー
代理人個人,個人,個人,個人,個人
主分類C12N 15/88 20060101AFI20250128BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】非ウイルス性カプシド不含DNAベクターの脂質ナノ粒子製剤の提供。
【解決手段】本明細書では、イオン化脂質と、共有結合性閉端を有する非ウイルス性カプシド不含DNAベクターとを含む、脂質ナノ粒子製剤が提供される。イオン化脂質と、共有結合性閉端を有する非ウイルス性カプシド不含DNAベクター(ceDNAベクター)とを含む、脂質粒子であって、前記ceDNAベクターが、非対称逆位末端反復配列(非対称ITR)の間に操作可能に位置付けられた少なくとも1つの異種ヌクレオチド配列を含み、前記非対称ITRのうちの少なくとも1つが、機能的末端分解部位およびRep結合部位を含む、脂質粒子。
【選択図】図9
特許請求の範囲【請求項１】
イオン化脂質と、共有結合性閉端を有する非ウイルス性カプシド不含ＤＮＡベクター（ｃｅＤＮＡベクター）とを含む、脂質粒子であって、前記ｃｅＤＮＡベクターが、非対称逆位末端反復配列（非対称ＩＴＲ）の間に操作可能に位置付けられた少なくとも１つの異種ヌクレオチド配列を含み、前記非対称ＩＴＲのうちの少なくとも１つが、機能的末端分解部位およびＲｅｐ結合部位を含む、脂質粒子。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の下、２０１７年９月８日出願の米国仮特許出願第６２／５５６，３３４号、２０１７年９月８日出願の同第６２／５５６，３３３号、２０１７年９月９日出願の同第６２／５５６，３８１号、２０１８年５月２３日出願の同第６２／６７５，３１７号、２０１８年５月２３日出願の同第６２／６７５，３２２号、２０１８年５月２３日出願の同第６２／６７５，３２４号、２０１８年５月２３日出願の同第６２／６７５，３２７号の利益を主張し、各々の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
続きを表示（約 1,600 文字）【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０１８年９月７日に作成された前述のＡＳＣＩＩコピーは、０８０１７０－０９０６６０ＷＯＰＴ＿ＳＬ．ｔｘｔという名前が付けられ、サイズは６３，７９０バイトである。
【０００３】
本発明は、非ウイルス性カプシド不含ＤＮＡベクターの脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）、および標的細胞、組織、器官、または生物への外因性ＤＮＡ配列の送達のためのそれらの使用を対象とする。
【背景技術】
【０００４】
最近では、ＡＡＶ２ＩＴＲに隣接した導入遺伝子を含む共有結合性閉端を有する非ウイルス性カプシド不含ＤＮＡベクターが報告された。しかしながら、インビトロおよびインビボでの、細胞へのこれらのＤＮＡベクターの標的送達は、依然として難題である。したがって、これらの難題に対処する製剤に対する必要性が、当該技術分野において残っている。
【発明の概要】
【０００５】
一態様では、イオン化脂質およびカプシド不含非ウイルス性ベクター（ｃｅＤＮＡ）を含む新規の脂質製剤が、本明細書に提供される。本明細書に記載されるｃｅＤＮＡベクターは、共有結合性閉端を有する相補的ＤＮＡの連続鎖（直鎖状で連続的な非カプシド化構造）およびから形成されたカプシド不含の直鎖状二重鎖ＤＮＡ分子であり、互いに関して異なるか、または非対称である５’逆位末端反復（ＩＴＲ）配列および３’ＩＴＲ配列を含む。一態様では、共有結合性閉端を有する非ウイルス性カプシド不含ＤＮＡベクターは、好ましくは直鎖状二重鎖分子であり、２つの異なる逆位末端反復配列（ＩＴＲ）（例えば、ＡＡＶＩＴＲ）の間に操作可能に位置づけられた異種核酸をコードするベクターポリヌクレオチドから取得可能であり、ＩＴＲのうちの少なくとも１つは、末端分解部位および複製タンパク質結合部位（ＲＰＳ）（時として複製的タンパク質結合部位と称される）、例えば、Ｒｅｐ結合部位を含み、ＩＴＲのうちの１つは、他のＩＴＲに関する欠失、挿入、および／または置換を含む。すなわち、ＩＴＲのうちの１つは、他のＩＴＲに対して非対称である。一実施形態では、ＩＴＲのうちの少なくとも１つは、ＡＡＶＩＴＲ、例えば、野生型ＡＡＶＩＴＲまたは修飾型ＡＡＶＩＴＲである。一実施形態では、ＩＴＲのうちの少なくとも１つは、他のＩＴＲに対する修飾型ＩＴＲであり、すなわち、ｃｅＤＮＡは、互いに対して非対称であるＩＴＲを含む。
【０００６】
一実施形態では、ＩＴＲのうちの少なくとも１つは、非機能的ＩＴＲである。
【０００７】
いくつかの実施形態では、ＩＴＲのうちの１つ以上は、野生型ＩＴＲではない。
【０００８】
いくつかの実施形態では、ｃｅＤＮＡベクターは、ｃｅＤＮＡベクター上に単一認識部位を有する制限酵素で消化され、未変性ゲルおよび変性ゲルの両方の電気泳動によって分析されたときに、直鎖状で非連続的なＤＮＡ対照と比較して特徴的な直鎖状で連続的なＤＮＡのバンドを示す。
【０００９】
いくつかの実施形態では、ｃｅＤＮＡベクターの非対称ＩＴＲ配列のうちの１つ以上は、パルボウイルス、ディペンドウイルス、およびアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）から選択されるウイルスに由来する。いくつかの実施形態では、非対称ＩＴＲは、異なるウイルス血清型に由来する。例えば、１つ以上の非対称ＩＴＲは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、およびＡＡＶ１２から選択されるＡＡＶ血清型に由来し得る。
【００１０】
いくつかの実施形態では、ｃｅＤＮＡベクターの非対称ＩＴＲ配列のうちの１つ以上は、合成である。
（【００１１】以降は省略されています）

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