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公開番号2025024779
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-02-21
出願番号2023129033
出願日2023-08-08
発明の名称細胞周期同調が可能な油脂生産酵母変異株
出願人学校法人帝京大学
代理人個人
主分類C12N 1/16 20060101AFI20250214BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】温度変化により、油脂生産効率の高い特定の細胞周期に同調停止させることができる油脂生産酵母変異株を提供する。
【解決手段】前記変異株は、23～26℃での予備培養後、32～35℃での本培養によりG1期に同調停止するリポミセススターキー(Lipomyces starkeyi)菌株、あるいは、20～23℃での予備培養後、30～32℃での本培養によりG2/M期に同調停止するリポミセススターキー菌株である。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
２３～２６℃での予備培養後、３２～３５℃での本培養によりＧ１期に同調停止するリポミセススターキー（
Lipomyces
starkeyi
）菌株。
続きを表示（約 450 文字）【請求項２】
受託番号がＮＩＴＥＢＰ－０３９４１である、請求項１に記載のリポミセススターキー（
Lipomyces
starkeyi
）菌株。
【請求項３】
２０～２３℃での予備培養後、３０～３２℃での本培養によりＧ２／Ｍ期に同調停止するリポミセススターキー（
Lipomyces
starkeyi
）菌株。
【請求項４】
受託番号がＮＩＴＥＢＰ－０３９４２又はＮＩＴＥＢＰ－０３９４３である、請求項３に記載のリポミセススターキー（
Lipomyces
starkeyi
）菌株。
【請求項５】
請求項１～４のいずれか一項に記載の菌株を用いることを特徴とする、油脂蓄積誘導方法。
【請求項６】
請求項１～４のいずれか一項に記載の菌株を２０～２６℃で予備培養した後、続いて、３０～３５℃で培養する工程
を含む、油脂蓄積誘導方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞周期同調が可能な油脂生産酵母変異株に関する。
続きを表示（約 2,300 文字）【背景技術】
【０００２】
油脂生産酵母であるリポミセス（Lipomyces）属は、単細胞当たり７０％もの油脂を蓄積し、その油脂成分がパーム油に近いことから、バイオ燃料だけでなく、食品や化粧品の代替油脂として利用が見込まれており、急速に研究が進められている。
本発明者は、リポミセスの油脂生産の分子メカニズムの解明を進めたところ、細胞周期Ｇ１期で同調することで油脂蓄積量が１．４倍に増加することを見出した（非特許文献１）。
しかしながら、油脂生産効率の高い油脂生産微生物および油脂生産方法への要求は、変わることなく続いている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
Morimoto Y. et al., Journal of Cell Science (2022) 135 (16), jcs259996
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の課題は、温度変化により、油脂生産効率の高い特定の細胞周期に同調停止させることができる油脂生産酵母変異株を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
前記課題は、以下の本発明により、解決することができる。
［１］２３～２６℃での予備培養後、３２～３５℃での本培養によりＧ１期に同調停止するリポミセススターキー（
Lipomyces
starkeyi
）菌株。
［２］受託番号がＮＩＴＥＢＰ－０３９４１である、［１］のリポミセススターキー（
Lipomyces
starkeyi
）菌株。
［３］２０～２３℃での予備培養後、３０～３２℃での本培養によりＧ２／Ｍ期に同調停止するリポミセススターキー（
Lipomyces
starkeyi
）菌株。
［４］受託番号がＮＩＴＥＢＰ－０３９４２又はＮＩＴＥＢＰ－０３９４３である、［３］のリポミセススターキー（
Lipomyces
starkeyi
）菌株。
［５］［１］～［４］のいずれかの菌株を用いることを特徴とする、油脂蓄積誘導方法。
［６］［１］～［４］のいずれかの菌株を２０～２６℃で予備培養した後、続いて、３０～３５℃で培養する工程を含む、油脂蓄積誘導方法。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、高価な薬剤処理や特殊な機器を必要とすることなく、温度変化だけで、油脂生産効率の高い特定の細胞周期に同調停止させることができ、この変異株を利用することにより、油脂蓄積の増量を達成することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
後述の参考例で実施した薬剤処理によるリポミセススターキーの細胞周期同調において、細胞内トリアシルグリセロール定量の結果を示すグラフである。
後述の実施例２で実施したＬｓ１００株、Ｌｓ７６株、Ｌｓ６３株、Ｌｓ９３株のＦＡＣＳ解析による細胞内ＤＮＡ含量を測定した結果を示すヒストグラムである。
後述の実施例３で実施したＬｓ１００株、Ｌｓ７６株、Ｌｓ６３株、Ｌｓ９３株の細胞内トリアシルグリセロール定量の結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
（本発明の油脂蓄積酵母変異株）
本発明の油脂蓄積酵母変異株は、リポミセススターキー（
Lipomyces
starkeyi
）の変異株であり、通常温度での予備培養後、培養中の温度を通常より高く上げると、特定の細胞周期で同調停止させることができる。
本発明の第一の油脂蓄積酵母変異株は、予備培養を２３～２６℃で行った後、３２～３５℃に温度を上げ、本培養を行うことにより、Ｇ１期に同調停止させることができる。
本発明の第二の油脂蓄積酵母変異株は、予備培養を２０～２３℃で行った後、３０～３５℃に温度を上げ、本培養を行うことにより、Ｇ２／Ｍ期に同調停止させることができる。
【０００９】
本発明の第一の油脂蓄積酵母変異株としては、リポミセススターキーＬｓ７６株（受託番号ＮＩＴＥＢＰ－０３９４１）株を挙げることができる。本発明の第二の油脂蓄積酵母変異株としては、Ｌｓ６３株（受託番号ＮＩＴＥＢＰ－０３９４２）、及びＬｓ９３株（受託番号ＮＩＴＥＢＰ－０３９４３）を挙げることができる。これらの変異株は、従来公知のリポミセス属よりも高い油脂蓄積量を示し、効率的な油脂生産菌として使用することができる。前記Ｌｓ７６株、Ｌｓ６３株、及びＬｓ９３株の菌学的性状は、出芽酵母であり、２３℃では良く増殖するが、３０℃を越えると増殖停止を引き起こす。
【００１０】
（本発明の油脂蓄積誘導方法）
本発明の油脂蓄積誘導方法は、本発明の油脂生産酵母変異株を使用すること、前記変異株を所望の細胞周期（特にはＧ１期またはＧ２／Ｍ期）で同調停止できる条件で培養を行うこと以外は、従来公知の油脂蓄積誘導方法に従って実施することができる。
例えば、本発明の油脂蓄積誘導方法では、予め予備培養を行っておき、その培養物を適当な油脂蓄積誘導培地に植菌することにより本培養を実施することができる。培養温度は、２０～３５℃で実施することができ、１～７日間程度振とう培養する。
（【００１１】以降は省略されています）

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