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公開番号2025081152
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-05-27
出願番号2023194729
出願日2023-11-15
発明の名称細胞の培養方法および組成物
出願人ネクスジェン株式会社
代理人個人,個人,個人
主分類C12N 5/0789 20100101AFI20250520BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】造血幹細胞または造血幹前駆細胞を増殖培養する際に、最終的に培養された細胞集団中に含まれる造血幹細胞または造血幹前駆細胞の割合を高く維持しながら、造血幹細胞または造血幹前駆細胞を増殖するための培養方法、およびこれら方法に用いるための培養組成物を提供する。
【解決手段】Lin(-)CD34(+)の造血幹前駆細胞、またはCD34(+)CD48(-)、CD48(-)c-Kit(+)、もしくはCD34(+)CD48(-)c-Kit(+)の造血幹細胞の培養における使用のためのサイトカインを含む細胞培養組成物であって、(1)ヒストン脱アセチラーゼ阻害剤(HDAC阻害剤)、並びにIL-6、IL-3およびFlt3Lからなる群から選択される1以上のサイトカイン;または(2)IL-6、IL-3およびFlt3Lからなる群から選択される、2以上のサイトカインを含む前記細胞培養組成物とする。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
Ｌｉｎ（－）ＣＤ３４（＋）の造血幹前駆細胞、またはＣＤ３４（＋）ＣＤ４８（－）、ＣＤ４８（－）ｃ－Ｋｉｔ（＋）、もしくはＣＤ３４（＋）ＣＤ４８（－）ｃ－Ｋｉｔ（＋）の造血幹細胞の培養における使用のためのサイトカインを含む細胞培養組成物であって、
（１）ヒストン脱アセチラーゼ阻害剤（ＨＤＡＣ阻害剤）、並びにＩＬ－６、ＩＬ－３およびＦｌｔ３Ｌからなる群から選択される１以上のサイトカイン；または
（２）ＩＬ－６、ＩＬ－３およびＦｌｔ３Ｌからなる群から選択される、２以上のサイトカイン
を含む前記細胞培養組成物。
続きを表示（約 1,200 文字）【請求項２】
ＨＤＡＣ阻害剤およびＩＬ－６、並びに、ＩＬ－３またはＦｌｔ３Ｌを含む、請求項１に記載の細胞培養組成物。
【請求項３】
ＨＤＡＣ阻害剤およびＩＬ－６、並びにＩＬ－３およびＦｌｔ３Ｌを含む、請求項１に記載の細胞培養組成物。
【請求項４】
ＨＤＡＣ阻害剤が、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）、バルプロ酸、ブチリルヒドロキサム酸、酪酸ナトリウム、Ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ、ＮＣＣ－１４９、ＮＣＨ－４７、ＮＣＨ－５１、ＭＳ－２７５、ＦＫ２２８、Ａｐｉｃｉｄｉｎ、ＭＧＣＤ－０１０３、ＤＬＳ３、ＳＡＨＡ、及びＨＤＡＣ６阻害剤ｌ６１からなる群から選択されるＨＤＡＣ阻害剤である、請求項１に記載の細胞培養組成物。
【請求項５】
Ｌｉｎ（－）ＣＤ３４（＋）の造血幹前駆細胞またはＣＤ３４（＋）ＣＤ４８（－）、ＣＤ４８（－）ｃ－Ｋｉｔ（＋）、もしくはＣＤ３４（＋）ＣＤ４８（－）ｃ－Ｋｉｔ（＋）の造血幹細胞を含む細胞集団を準備する工程；および
サイトカインを含む細胞培養組成物を用いて、前記細胞集団を培養する工程であって、前記細胞培養組成物が、
（１）ＨＤＡＣ阻害剤、並びにＩＬ－６、ＩＬ－３およびＦｌｔ３Ｌからなる群から選択される１以上のサイトカイン；または
（２）ＩＬ－６、ＩＬ－３およびＦｌｔ３Ｌからなる群から選択される、２以上のサイトカイン
を含む工程を含む、造血幹前駆細胞または造血幹細胞の培養方法。
【請求項６】
前記細胞培養組成物が、ＨＤＡＣ阻害剤およびＩＬ－６、並びに、ＩＬ－３またはＦｌｔ３Ｌ含む請求項５に記載の培養方法。
【請求項７】
前記細胞培養組成物が、ＨＤＡＣ阻害剤およびＩＬ－６、並びにＩＬ－３およびＦｌｔ３Ｌを含む請求項５に記載の培養方法。
【請求項８】
ＨＤＡＣ阻害剤が、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）、バルプロ酸、ブチリルヒドロキサム酸、酪酸ナトリウム、Ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ、ＮＣＣ－１４９、ＮＣＨ－４７、ＮＣＨ－５１、ＭＳ－２７５、ＦＫ２２８、Ａｐｉｃｉｄｉｎ、ＭＧＣＤ－０１０３、ＤＬＳ３、ＳＡＨＡ、及びＨＤＡＣ６阻害剤ｌ６１からなる群から選択されるＨＤＡＣ阻害剤である、請求項５に記載の培養方法。
【請求項９】
請求項５に記載の培養法を用いて、造血幹前駆細胞または造血幹細胞を含む細胞集団を製造する方法。
【請求項１０】
請求項５に記載の培養法における、
（１）ＨＤＡＣ阻害剤並びにＩＬ－６、ＩＬ－３およびＦｌｔ３Ｌからなる群から選択される１以上のサイトカイン；または
（２）ＩＬ－６、ＩＬ－３およびＦｌｔ３Ｌからなる群から選択される、２以上のサイトカイン
を含む細胞培養組成物の使用。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本開示は、造血幹前駆細胞または造血幹細胞の培養における使用のための、ＨＤＡＣ阻害剤および／またはサイトカインを含む細胞培養組成物、当該細胞培養組成物を用いた造血幹前駆細胞または造血幹細胞の培養方法、当該細胞培養組成物を用いた造血幹前駆細胞または造血幹細胞を含む細胞集団を製造する方法、並びに、造血幹前駆細胞または造血幹細胞の培養における、ＨＤＡＣ阻害剤および／またはサイトカインを含む細胞培養組成物の使用に関する。
続きを表示（約 1,800 文字）【背景技術】
【０００２】
長期間、例えば生物個体の生涯に亘って自己複製能と多分化能を維持する幹細胞は、その自己複製能を利用して大量培養を行うことが可能であり、また、その多分化能を利用して、様々な細胞に分化させることができる。このような特性を有する幹細胞は再生医療を実用化する際の切り札となり得る細胞であると考えられている。また、多能性幹細胞に由来する系列コミット細胞である前駆細胞は、多能性幹細胞より分化しているものの、１以上の細胞タイプに分化する能力を依然として有している。このような前駆細胞も、再生医療の実用化において極めて有用である。
【０００３】
造血幹細胞（Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌ：ＨＳＣ）は、主に骨髄内に存在し、自己複製能及び多分化能をもつ血液細胞と定義され、造血幹細胞移植などに利用されている。造血幹前駆細胞（ＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＳｔｅｍａｎｄＰｒｏｇｅｎｉｔｏｒＣｅｌｌ）または造血前駆細胞（ＨｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃＰｒｏｇｅｎｉｔｏｒＣｅｌｌ）は、３つの造血系列（リンパ球系列、骨髄系列、または赤血球?巨核球系列）の１つ以上に分化する能力を保持しており、再生医療において利用されている。これら造血幹細胞および造血幹前駆細胞を培養によって増殖培養する際には、培養過程において一部の細胞において系列コミットおよび分化成熟化が進み、十分な量の造血幹細胞および造血幹前駆細胞を得ることが難しい。
【０００４】
したがって、造血幹細胞または造血幹前駆細胞の増殖培養をする方法が各種試みられてきた（特許文献１～１０、非特許文献２）。しかしながら、依然として、最終的に培養された細胞集団中に含まれる造血幹細胞または造血幹前駆細胞の割合を高く維持しながら、造血幹細胞または造血幹前駆細胞を増殖するための新たな培養方法、および当該培養に用いるための新たな培養組成物を提供することが望まれていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
特許第６９８０５３４号
特開２０２３－０２９６５５号
特表２０２１－５３６４５８号
特許第６５３３９１２号
特表２０２２－５０４７２２号
特許第６３４８８８１号
特許第４７３８７３８号
特表２０２１－５３５７４７号
ＣＡ２８５８０６９
ＵＳ２０１５／０１６４９５２
【非特許文献】
【０００６】
日本輸血細胞治療学会誌、２００６年、Ｖｏｌ．５２、Ｎｏ．５、ｐｐ．５８３－５８８
ＬａｎＷａｎｇｅｔａｌ．，ＳｔｅｍＣｅｌｌＲｅｓＴｈｅｒ．，８，１６９（２０１７）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本開示は、造血幹細胞または造血幹前駆細胞を増殖培養する際に、最終的に培養された細胞集団中に含まれる造血幹細胞または造血幹前駆細胞の割合を高く維持しながら、造血幹細胞または造血幹前駆細胞を増殖するための培養方法、およびこれら方法に用いるための培養組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本開示の発明者らは、上記課題について鋭意研究を進めた結果、予想外にも、ある種のサイトカインの組み合わせ、またはサイトカインとヒストン脱アセチル化酵素阻害剤（ＨＤＡＣ阻害剤）の組み合わせを含む細胞培養組成物を用いることで、造血幹細胞または造血幹前駆細胞を増殖培養する際に、最終的に培養された細胞集団中に含まれる造血幹細胞または造血幹前駆細胞の割合を高く維持しながら、造血幹細胞または造血幹前駆細胞の増殖を促進することが可能であることを見出した。
【０００９】
一態様において、本開示は造血幹前駆細胞または造血幹細胞の培養における使用のための、ＨＤＡＣ阻害剤および／またはサイトカインを含む細胞培養組成物を提供する。
【００１０】
一態様において、造血幹前駆細胞または造血幹細胞を含む細胞集団を準備する工程；および
ＨＤＡＣ阻害剤および／またはサイトカインを含む細胞培養組成物を用いて、前記細胞集団を培養する工程、
を含む、造血幹前駆細胞または造血幹細胞の培養方法を提供する。
（【００１１】以降は省略されています）

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