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公開番号2025000723
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-01-07
出願番号2024163874,2021540589
出願日2024-09-20,2020-01-15
発明の名称変異したインターロイキン-34(IL-34)ポリペプチドおよび治療におけるその使用
出願人アンスティチュート、ナシオナル、ドゥ、ラ、サンテ、エ、ドゥ、ラ、ルシェルシュ、メディカル,INSTITUT NATIONAL DELA SANTE ET DE LA RECHERCHE MEDICALE,ナントユニベルシテ
代理人個人,個人,個人,個人,個人
主分類C07K 14/54 20060101AFI20241224BHJP(有機化学)
要約【課題】アゴニストまたはアンタゴニストとして使用され得る新規の変異したIL-34ポリペプチドを提供する。
【解決手段】開示される1つの対象は、特定のアミノ酸配列の21位のアスパラギン(N)残基から前記特定のアミノ酸配列の242位のプロリン(P)残基までの範囲にあり、56位のヒスチジン(H)残基および112位のグリシン(G)残基が両方ともシステイン(C)残基で置換されているアミノ酸配列を有する変異したIL-34ポリペプチド(P1)である。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
ａ）配列番号１の２１位のアスパラギン（Ｎ）残基から配列番号１の２４２位のプロリン（Ｐ）残基までの範囲にあり、
１００位のセリン残基がフェニルアラニン残基で置換されている変異（Ｓ１００Ｆ）、
３６位のスレオニン残基がチロシン残基で置換されている変異（Ｔ３６Ｙ）、
１３１位のグルタミン残基がフェニルアラニン残基で置換されている変異（Ｑ１３１Ｆ）、
３６位のスレオニン残基がトリプトファン残基で置換されている変異（Ｔ３６Ｗ）、
３６位のスレオニン残基がフェニルアラニン残基で置換されている変異（Ｔ３６Ｆ）、および
５６位のヒスチジン残基および１１２位のグリシン残基が両方ともシステイン残基で置換されている変異（Ｈ５６ＣおよびＧ１１２Ｃ）
からなる群から選択される少なくとも１つの変異を含む、アミノ酸配列、
ｂ）ａ）で定義される配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列であって、ただし前記ポリペプチドが、ＣＳＦ－１Ｒ、ＰＴＰ－ζ、およびＣＤ１３８からなる群から選択される少なくとも１つの受容体のリガンドのアゴニストである、アミノ酸配列、および
ｃ）ａ）またはｂ）で定義される配列のフラグメントであって、ただし前記ポリペプチドが、ＣＳＦ－１Ｒ、ＰＴＰ－ζ、およびＣＤ１３８からなる群から選択される少なくとも１つの受容体のリガンドのアゴニストである、フラグメント
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはからなる変異したＩＬ３４ポリペプチド。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、変異したインターロイキン－３４（ＩＬ－３４）ポリペプチドおよび治療におけるその使用に関する。
続きを表示（約 2,600 文字）【背景技術】
【０００２】
インターロイキン－３４は、２００８年に最初に記載された、機能が部分的にのみ理解されているサイトカインである。ＩＬ－３４はコロニー刺激因子１（ＣＳＦ－１またはＭ－ＣＳＦ）と相同性をほとんど共有しないが、共通する受容体ＣＳＦ－１Ｒ（ＣＤ１１５、ｃ－Ｆｍｓ）を共有しており、またＩＬ－３４は、２つの明確に異なる受容体（ＰＴＰ－ζ）およびＣＤ１３８（シンデカン－１）を有する。またＩＬ－３４は、ヘテロダイマーを形成するためにＣＳＦ－１と対形成することが示されている。今日まで、このサイトカインは、ＣＳＦ－１が発現され、かつ炎症に応答してマクロファージ、単球、および樹状細胞の分化および生存に関与する組織とは異なるいくつかの組織により放出されるとの研究が示されている。ＩＬ－３４の関与は、神経保護、自己免疫性疾患、感染症、がん、および移植といった多様な領域で示されている（ＧｕｉｌｌｏｎｎｅａｕＣ．ＣｅｌｌＭｏｌＬｉｆｅＳｃｉ．２０１７）。また、近年の研究により、移植寛容のＦｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞分泌性サイトカインメディエーターとしてのＩＬ－３４の新規かつ見込みのある治療上の役割が示されている（Ｂｅｚｉｅｅｔａｌ．，ＪＣＩ，２０１５）。
【発明の概要】
【０００３】
特許請求の範囲により定義されるように、本発明は、変異したインターロイキン－３４（ＩＬ－３４）ポリペプチドおよび治療におけるその使用に関する。
【発明を実施するための形態】
【０００４】
本明細書中使用される場合、用語「ＩＬ－３４」は、当該分野におけるその一般的な意味を有し、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を特徴とするインターロイキン－３４を表す。
配列番号１：１～２０位にリーダー配列を含むインターロイキン－３４（ホモサピエンス）
TIFF
2025000723000002.tif
42
162
【０００５】
本明細書を通して使用されるアミノ酸のナンバリングは、配列番号１に記載されるアミノ酸配列に準拠して提供される。
【０００６】
本明細書中使用される場合、用語「ＣＳＦ－１Ｒ」は、当該分野におけるその一般的な意味を有し、コロニー刺激因子１受容体を表す。またＣＳＦ－１Ｒは、当該分野において、ＦＭＳ、ＦＩＭ２、Ｃ－ＦＭＳ、Ｍ－ＣＳＦ受容体、およびＣＤ１１５とも呼ばれる。この受容体は、Ｎ末端の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）およびチロシンキナーゼ活性を有するＣ末端の細胞内ドメインを含むシングルパス膜貫通受容体である。ＣＳＦ－１Ｒに対するＣＳＦ－１またはインターロイキン３４のリガンド結合は、受容体の二量体形成、ＣＳＦ－１Ｒタンパク質チロシンキナーゼ活性のアップレギュレーション、ＣＳＦ１Ｒチロシン残基のリン酸化、および下流のシグナリング事象（すなわち「生物学的活性」）をもたらす。たとえば、ＣＳＦ－１およびＩＬ－３４は両方とも、単球の生存、増殖、ならびに、マクロファージ、および破骨細胞、樹状細胞、およびミクログリアなどの他の単核球細胞系列への分化を刺激する。
【０００７】
本明細書中使用される場合、用語「ＰＴＰ－ζ」は、当該分野におけるその一般的な意味を有し、受容体型チロシンタンパク質ホスファターゼζを表す。またＰＴＰ－ζは、当該分野で「ホスファカン」としても知られている。この受容体は、２つの細胞質内チロシンタンパク質ホスファターゼドメインの、α炭酸脱水素酵素ドメイン（ａｌｐｈａ－ｃａｒｂｏｎｉｃａｎｈｙｄｒａｓｅｄｏｍａｉｎ）およびフィブロネクチンＩＩＩ型ドメインを有するシングルパスＩ型膜タンパク質である。
【０００８】
本明細書中使用される場合、用語「ＣＤ１３８」は、当該分野におけるその一般的な意味を有し、表面抗原分類１３８を表す。またＣＤ１３８は、当該分野で「シンデカン－１」としても知られている。この受容体は、膜貫通型（Ｉ型）ヘパラン硫酸プロテオグリカンである。シンデカン－１のコアタンパク質は、ヘパラン硫酸およびコンドロイチン硫酸グリコサミノグリカン鎖で置換され得る細胞外ドメイン、著しく保存されている膜貫通ドメイン、ならびに可変領域により分離されている２つの定常領域を含む、著しく保存されている細胞質内ドメインからなる。
【０００９】
本明細書中使用される場合、用語「リガンド」は、受容体に結合する親和性を有するポリペプチドなどの分子を表す。当業者が理解するように、分子は、受容体およびリガンドであり得る。ＣＳＦ－１Ｒのリガンドは、当該分野でよく知られており、ＩＬ－３４およびＣＳＦ－１が挙げられる。ＰＴＰ－ζのリガンドおよびＣＤ１３８のリガンドは、当該分野でよく知られており、ＩＬ－３４が挙げられる。
【００１０】
用語「親和性」は、本明細書中使用される場合、リガンドのその受容体に対する結合の強度を意味する。リガンドの親和性は、解離定数Ｋｄにより提供される。リガンドの親和性を決定するための好ましい方法は、参照文献の全体が本明細書中参照により組み込まれている、Ｈａｒｌｏｗ，ｅｔａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８８）、Ｃｏｌｉｇａｎｅｔａｌ．，ｅｄｓ．，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ＧｒｅｅｎｅＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＡｓｓｏｃ．ａｎｄＷｉｌｅｙＩｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，（１９９２，１９９３）、およびＭｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．９２：５８９－６０１（１９８３）で見出され得る。リガンドの親和性を決定するための当該分野でよく知られている好ましい標準的な方法の１つは、Ｂｉａｃｏｒｅ器具の使用である。
（【００１１】以降は省略されています）

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