特許ウォッチ

公開番号2024143793
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-10-11
出願番号2023056675
出願日2023-03-30
発明の名称抗ブタノロウイルス抗体
出願人花王株式会社
代理人弁理士法人アルガ特許事務所
主分類C12N 15/13 20060101AFI20241003BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】特定の遺伝子型のノロウイルス粒子に対して特異的な結合活性を示す抗ブタノロウイルス抗体を提供する。
【解決手段】例えば、GLTFSMYSMG(配列番号1)で示されるアミノ酸配列からなるCDR1、SINWSGGSTY(配列番号2)で示されるアミノ酸配列からなるCDR2、及びDFSFLSRCKLGSSGYDY(配列番号3)で示されるアミノ酸配列からなるCDR3、で示されるCDRを含む構造ドメインを1つ以上有する、ブタノロウイルスに結合する抗体を提供する。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
以下の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）又は（ｅ）で示されるＣＤＲを含む構造ドメインを１つ以上有する、ブタノロウイルスに結合する抗体。
（ａ）ＧＬＴＦＳＭＹＳＭＧ（配列番号１）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、ＳＩＮＷＳＧＧＳＴＹ（配列番号２）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、及びＤＦＳＦＬＳＲＣＫＬＧＳＳＧＹＤＹ（配列番号３）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
（ｂ）ＧＩＶＦＳＶＹＰＭＧ（配列番号４）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、ＧＩＮＳＦＨＮＴＴ（配列番号５）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、及びＧＡＹＲＲＬＣＰＩＥＥＹＧＭＤＦ（配列番号６）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
（ｃ）ＧＲＡＦＳＳＹＭＶＧ（配列番号７）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、ＡＩＡＷＳＴＹ（配列番号８）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、及びＧＦＰＴＬＶＡＬＰＹＥＹＤＹ（配列番号９）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
（ｄ）ＧＩＴＦＳＮＴＡＭＴ（配列番号１０）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、ＳＩＮＫＳＧＤＥＶＡ（配列番号１１）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、及びＰＹＦＧＳ（配列番号１２）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
（ｅ）ＧＳＩＦＳＦＮＡＭＡ（配列番号１３）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、ＧＩＴＳＧＧＲＴＳ（配列番号１４）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、及びＴＲＷＡＴＮＳＩＡＩＲＱＶＥＳＹＤＹ（配列番号１５）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
続きを表示（約 1,100 文字）【請求項２】
ブタノロウイルス構造タンパク質に結合する、請求項１記載の抗体。
【請求項３】
単一ドメイン抗体又はその多量体である、請求項１又は２記載の抗体。
【請求項４】
単一ドメイン抗体がＶＨＨ抗体である、請求項３記載の抗体。
【請求項５】
単一ドメイン抗体の多量体が、前記構造ドメインを複数連結した多量体である請求項３記載の抗体。
【請求項６】
単一ドメイン抗体の多量体が、前記構造ドメインの１又は複数と、該構造ドメインとは抗原特異性の異なる構造ドメインの１又は複数を連結した多量体である請求項３記載の抗体。
【請求項７】
請求項１～６のいずれか１項記載の抗体をコードする核酸。
【請求項８】
以下の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）又は（ｅ）で示されるＣＤＲを含む構造ドメインを１つ以上有する、ノロウイルスに結合する抗体を被験試料に接触させる工程を含む、試料中のブタノロウイルスの検出方法。
（ａ）ＧＬＴＦＳＭＹＳＭＧ（配列番号１）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、ＳＩＮＷＳＧＧＳＴＹ（配列番号２）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、及びＤＦＳＦＬＳＲＣＫＬＧＳＳＧＹＤＹ（配列番号３）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
（ｂ）ＧＩＶＦＳＶＹＰＭＧ（配列番号４）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、ＧＩＮＳＦＨＮＴＴ（配列番号５）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、及びＧＡＹＲＲＬＣＰＩＥＥＹＧＭＤＦ（配列番号６）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
（ｃ）ＧＲＡＦＳＳＹＭＶＧ（配列番号７）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、ＡＩＡＷＳＴＹ（配列番号８）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、及びＧＦＰＴＬＶＡＬＰＹＥＹＤＹ（配列番号９）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
（ｄ）ＧＩＴＦＳＮＴＡＭＴ（配列番号１０）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、ＳＩＮＫＳＧＤＥＶＡ（配列番号１１）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、及びＰＹＦＧＳ（配列番号１２）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
（ｅ）ＧＳＩＦＳＦＮＡＭＡ（配列番号１３）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、ＧＩＴＳＧＧＲＴＳ（配列番号１４）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、及びＴＲＷＡＴＮＳＩＡＩＲＱＶＥＳＹＤＹ（配列番号１５）で示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲ３
【請求項９】
請求項１～６のいずれか１項記載の抗体を含有するブタノロウイルス検出キット。
【請求項１０】
請求項１～６のいずれか１項記載の抗体を含有するブタノロウイルス感染症の予防又は治療薬。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は特定の遺伝子型のノロウイルス粒子に対して特異的な結合活性を示す抗ブタノロウイルス抗体に関する。
続きを表示（約 2,900 文字）【背景技術】
【０００２】
ノロウイルスはカリシウイルス科に属する，エンベロープを持たない直径約３０～４０ｎｍの球形ウイルスである。ノロウイルスはヒトに対して嘔吐、下痢などの急性胃腸炎症状を起こすが、ヒト以外にも様々な宿主に対して感染性を示すことが報告されている。ノロウイルスのゲノムは約７．６ｋｂの１本鎖（＋）ＲＮＡであり、近年ではゲノム相同性に基づき遺伝子群1（ＧＩ）、遺伝子群２（ＧＩＩ）、遺伝子群３（ＧＩＩＩ）、遺伝子群４（ＧＩＶ）、遺伝子群５（ＧＶ）、遺伝子群６（ＧＶＩ）及び遺伝子群７（ＧＶＩＩ）の７つの遺伝子群に分類されている。このうち、ＧＩがヒト、ＧＩＩがヒト、ブタ、ＧＩＩＩがウシ、ＧＩＶがヒト、ネコ、イヌ、ＧＶがマウス、ＧＶＩ及びＧＶＩＩがイヌへの感染性を示す（非特許文献１参照）。
【０００３】
ノロウイルスの各遺伝子群には複数の遺伝子型が存在する。ノロウイルスの場合、各遺伝子型はそれぞれ異なる抗原性を示すが、同一遺伝子型は同じ抗原性を示すとされる。ノロウイルスのゲノムは変異速度が非常に速く、さらに異なる遺伝子型のウイルス間で組換えを起こすことが報告されており、新たな遺伝子型を示すノロウイルスの出現も確認されている。そのため、ノロウイルスを正確に分類することや遺伝子型を識別することは非常に重要である。
【０００４】
現在までに、ヒトへの感染性を示すノロウイルス（以下、ヒトノロウイルスと呼ぶ）では、ＧＩノロウイルスとしてＧＩ.1～ＧＩ．９の遺伝子型、ＧＩＩノロウイルスとして少なくともＧＩＩ．１～ＧＩＩ．１０、ＧＩＩ．１２～ＧＩＩ．１７、ＧＩＩ．２０～ＧＩＩ．２２の遺伝子型が報告されている。ヒトノロウイルスは、日本国内においては例年秋から冬を中心に流行する感染性胃腸炎の主要な原因の１つである。ヒトノロウイルスは学校や、医療施設、食品取扱施設などの集団施設に持ち込まれると集団発生を引き起こし、食品を汚染すると食中毒の原因となる。そのため、ヒトノロウイルスの疫学情報は重要であり、国内では厚生労働省や国立感染症研究所などでノロウイルスの遺伝子群、遺伝子型を含めた疫学データの収集が行われている。
【０００５】
一方、ヒトノロウイルスと同じＧＩＩに分類されるノロウイルスのうち、ＧＩＩ．１１、ＧＩＩ．１８、ＧＩＩ．１９はブタに感染することが報告されている（以下、ブタノロウイルスと呼ぶ）。これらブタノロウイルスは、ヒトノロウイルスの中でも流行性の高いＧＩＩノロウイルスと近縁であるとされる。現在までに、ブタノロウイルスのヒトへの感染は報告されていない。しかしながら、ＧＩＩノロウイルスにおいて、流行性の高いヒトノロウイルスに近い遺伝子型のブタノロウイルスが報告されている（非特許文献２、３参照）。そのため、ブタはノロウイルスのヒトへの感染源としてだけでなく、新たな組換え型発生のリザーバーとなる可能性としても公衆衛生的問題が懸念されている（非特許文献４参照）。そのため、ブタノロウイルスに関しても疫学調査が行われている。
【０００６】
ブタノロウイルスを特異的に検出できることは、ブタノロウイルスの疫学調査を行う上でも重要となる。特に、ヒトノロウイルスとブタノロウイルスは同一の遺伝子群（ＧＩＩ）を形成することから、疫学的情報を得るためには、遺伝子型レベルの識別方法が必要となる。
【０００７】
ウイルス由来のタンパク質の検出する方法では抗体が用いられ、例えばイムノクロマト法やＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏ－ｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ）法を測定原理とした抗原検査法がこれに該当する。ノロウイルスの場合、各遺伝子型はそれぞれ異なる抗原性を示すが、同一遺伝子型は同じ抗原性を示すとされる。また、ノロウイルスの構造タンパク質であるＶＰ１タンパク質には、遺伝子群毎にアミノ酸配列が保存されている領域がする。そのためノロウイルスに対しても、イムノクロマト法やＥＬＩＳＡ法を測定原理とした抗原検査キットが市販されている。
【０００８】
しかし、斯かる市販のキットでは、ＧＩ及びＧＩＩノロウイルスのカプシドタンパク質に幅広く結合するモノクローナル、又はポリクローナルＩｇＧ抗体が用いられているため、ＧＩＩノロウイルスにおいて、遺伝子型を判別できるものはない。また、現在までにブタノロウイルスであるＧＩＩ．１１、ＧＩＩ．１８、ＧＩＩ．１９に対して特異的な抗体として公開されているものはない。ブタノロウイルスに対して優れた結合活性と結合特異性を示す抗体は、ブタノロウイルスの迅速かつ簡便な検出及び識別において重要となるが、ゲノム変異の速度が速く、非常に多くの遺伝子型が報告されているノロウイルスにおいて、遺伝子型レベルの高い特異性を示す抗体を開発することは困難という課題がある。
【０００９】
一方、市販されている抗原検査キットの殆どはマウスやウサギ等に由来するモノクローナル、又はポリクローナルＩｇＧ抗体が用いられている。ＶＨＨ（Ｖａｒｉａｂｌｅｄｏｍａｉｎｏｆｈｅａｖｙｃｈａｉｎｏｆｈｅａｖｙｃｈａｉｎａｎｔｉｂｏｄｙ）はラクダ科動物が有する重鎖抗体の可変部ドメインからのみなる単一ドメイン抗体の１つである。ＶＨＨはＩｇＧ抗体と同等の結合活性を示しながらも、（１）ＩｇＧ抗体と比較して分子量が１０分の１程度であり、従来の抗体では結合できない新規のエピトープが期待されること、（２）ＩｇＧ抗体とは異なり、可逆性の高いタンパク質構造をもち、熱や圧に対して優れた耐性を示すこと、（３）ＩｇＧ抗体とは異なり、酵母や細菌等の微生物を用いた生産が可能であること、等の特徴をもつ。さらに、（４）ＶＨＨは、ｃＤＮＡディスプレイ法やファージディスプレイ法等の試験管内の抗体選抜技術との親和性が非常に高く、マウスやウサギ等への免疫によって得られるＩｇＧ抗体と比較して、より短期間に開発することが可能である。そのため、ＶＨＨは医薬品や検査薬に用いられてきたＩｇＧ抗体やＩｇＡ抗体といった従来の免疫グロブリンに代わる抗体としてその利用が期待されている。
【００１０】
抗原検査キットの開発においても、ＶＨＨの優位性は明らかである。特に、ＶＨＨが有する特性から、（１）ＶＨＨは粒子やニトロセルロース膜に高密度に固相化することが可能であり、より多くのパラトープを基材上に提示することができること、（２）ＶＨＨはタンパク質としての安定性に優れており、製品のより優れた保存安定性が期待できること、（３）ＶＨＨは微生物によって大量かつ安価に生産可能であるため、製造原価をより低減させることが出来ること、（４）ＶＨＨはイムノクロマト法において非特異的反応の原因となりうるＦｃ領域を有さないこと、がＩｇＧ抗体と比較して優位であると考えられる。
（【００１１】以降は省略されています）

関連特許