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公開番号2024089366
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-07-03
出願番号2022204692
出願日2022-12-21
発明の名称抗HBs抗体およびその用途
出願人国立大学法人広島大学
代理人個人,個人
主分類C12N 15/13 20060101AFI20240626BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】HBV感染の治療または予防に有効な抗体を提供する。
【解決手段】本開示は、抗HBs抗体および前記抗体を含む医薬組成物を含む。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
配列番号３のアミノ酸配列または前記アミノ酸配列において１～３個のアミノ酸残基が欠失、置換、または付加されたアミノ酸配列を含むCDR1、
配列番号４のアミノ酸配列または前記アミノ酸配列において１～３個のアミノ酸残基が欠失、置換、または付加されたアミノ酸配列を含むCDR2、および
配列番号５のアミノ酸配列または前記アミノ酸配列において１～３個のアミノ酸残基が欠失、置換、または付加されたアミノ酸配列を含むCDR3
を含む軽鎖可変領域、および、
配列番号７のアミノ酸配列または前記アミノ酸配列において１～３個のアミノ酸残基が欠失、置換、または付加されたアミノ酸配列を含むCDR1、
配列番号８のアミノ酸配列または前記アミノ酸配列において１～３個のアミノ酸残基が欠失、置換、または付加されたアミノ酸配列を含むCDR2、および
配列番号９のアミノ酸配列または前記アミノ酸配列において１～３個のアミノ酸残基が欠失、置換、または付加されたアミノ酸配列を含むCDR3
を含む重鎖可変領域
を含む、抗HBs抗体。
続きを表示（約 980 文字）【請求項２】
配列番号３のアミノ酸配列を含むCDR1、
配列番号４のアミノ酸配列を含むCDR2、および
配列番号５のアミノ酸配列を含むCDR3
を含む軽鎖可変領域、および、
配列番号７のアミノ酸配列を含むCDR1、
配列番号８のアミノ酸配列を含むCDR2、および
配列番号９のアミノ酸配列を含むCDR3
を含む重鎖可変領域
を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
ヒト化抗体である、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
配列番号２のアミノ酸配列と９０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列、または、配列番号２のアミノ酸配列もしくは配列番号２のアミノ酸配列において１～１０個のアミノ酸残基が欠失、置換、または付加されたアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および
配列番号６のアミノ酸配列と９０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列、または、配列番号６のアミノ酸配列もしくは配列番号６のアミノ酸配列において１～１０個のアミノ酸残基が欠失、置換、または付加されたアミノ酸配列を含む重鎖可変領域
を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項５】
配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項４に記載の抗体。
【請求項６】
配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域から特定されるCDR1、CDR2、およびCDR3を含む軽鎖可変領域、および配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域から特定されるCDR1、CDR2、およびCDR3を含む重鎖可変領域を含む、抗HBs抗体。
【請求項７】
HBs抗原への結合において請求項１～６のいずれかに記載の抗体と競合する、抗HBs抗体。
【請求項８】
請求項１～６のいずれかに記載の抗体を含む、医薬組成物。
【請求項９】
B型肝炎ウイルス感染の治療または予防のための、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
慢性B型肝炎、急性B型肝炎、または肝硬変の治療または予防のための、請求項９に記載の医薬組成物。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本開示は、B型肝炎ウイルス（HBV）のHBs抗原に対する抗体およびその用途に関する。
続きを表示（約 3,400 文字）【背景技術】
【０００２】
HBVは、世界でおよそ3億人が感染し、2億人以上が持続感染している、広く世界中に存在しているウイルスである。年間100万人以上がこのウイルスに由来する肝硬変や肝臓癌により死亡するという、深刻な感染症を引き起こしている。ウイルスは、多くは幼少期の感染により持続感染となるが、成人で感染しても慢性化する症例もある。持続感染となった症例の一部は慢性肝炎から肝硬変へと進展し、また一部の症例は肝細胞癌を発症する。このようにB型肝炎ウイルスの持続感染は深刻な保健上の問題であり、その治療法、感染の予防法、病態の評価方法などが喫緊の課題としてあげられている。
【０００３】
HBVは、約3,200塩基の一部分2本鎖環状DNAをゲノムとして有するウイルスである。HBVのウイルス粒子は、内部にHBVの遺伝子を持つコア粒子と、これを包む外殻（エンベロープ）とからなる。現在、HBV感染の診断には、外殻に存在するHBs抗原、コア粒子に存在するHBc関連抗原、血液中に放出されるHBe抗原、これら抗原に対する抗体や、HBV DNA量などがマーカーとして用いられ、これらを組み合わせて感染の有無や病態または治療効果の判定が行われている。HBV感染の抗ウイルス治療にはインターフェロンや核酸アナログが用いられている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本開示は、HBV感染の治療または予防に有効な抗体を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本開示は、ある態様において、
配列番号３のアミノ酸配列または前記アミノ酸配列において１～３個のアミノ酸残基が欠失、置換、または付加されたアミノ酸配列を含むCDR1、
配列番号４のアミノ酸配列または前記アミノ酸配列において１～３個のアミノ酸残基が欠失、置換、または付加されたアミノ酸配列を含むCDR2、および
配列番号５のアミノ酸配列または前記アミノ酸配列において１～３個のアミノ酸残基が欠失、置換、または付加されたアミノ酸配列を含むCDR3
を含む軽鎖可変領域、および、
配列番号７のアミノ酸配列または前記アミノ酸配列において１～３個のアミノ酸残基が欠失、置換、または付加されたアミノ酸配列を含むCDR1、
配列番号８のアミノ酸配列または前記アミノ酸配列において１～３個のアミノ酸残基が欠失、置換、または付加されたアミノ酸配列を含むCDR2、および
配列番号９のアミノ酸配列または前記アミノ酸配列において１～３個のアミノ酸残基が欠失、置換、または付加されたアミノ酸配列を含むCDR3
を含む重鎖可変領域
を含む、抗HBs抗体を提供する。
【０００６】
本開示は、ある態様において、前記抗体を含む医薬組成物を提供する。
【発明の効果】
【０００７】
本開示によりHBs抗原に対する抗体が提供される。本開示の抗体は、HBV感染予防効果のみならず、長期間持続しうる抗ウイルス効果を有する。本開示の抗体はさらに、他の治療薬との併用においてHBV感染に対する優れた治療または予防効果を発揮しうる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
図１は、完全なHBV粒子（Dane粒子）、桿状粒子、および小型球形粒子に共通して存在するHBs抗原の領域の各遺伝子型（Genotype）の代表例アミノ酸配列を比較した図である。Genotype A, B, C, D, E, F, Hの配列（配列番号１０～１６）を示す。GenBankにおける各HBs抗原のSドメインの99～155番目のアミノ酸配列（A-determinant領域は121～147番目）である。上部の図は想定されているHBs抗原の膜表面上におけるループ構造を示したものである。
図２は、9種類のハイブリドーマの培養上清（0.01、0.1、1μg/ml）の、ヒト初代培養肝細胞に対するHBV感染阻止効果を見たものである。感染9日後のHBs抗原の産生を測定して評価した。
図３は、図２と同様の実験を行い、その効果をHBe抗原の産生を測定して評価したものである。
図４は、ハイブリドーマの拡大培養後の上清から精製した抗体を使用した実験を図３と同様に行い、その効果をHBs抗原で見たものである。
図５は、ハイブリドーマの拡大培養後の上清から精製した抗体を使用した実験を図３と同様に行い、その効果をHBe抗原で見たものである。
図６は、ハイブリドーマの拡大培養後の上清から精製した抗体#7-4gおよび3種類の抗preS1抗体（抗体41、抗体1A、抗体10）の、ヒト初代培養肝細胞に対するHBV感染阻止効果を見たものである。感染9日後のHBs抗原の産生を測定して評価した。
図７は、ハイブリドーマの拡大培養後の上清から精製した抗体#7-4gおよび3種類の抗preS1抗体（抗体41、抗体1A、抗体10）の、ヒト初代培養肝細胞に対するHBV感染阻止効果を見たものである。感染9日後のHBe抗原の産生を測定した評価した。
図８は、ヒト肝細胞キメラマウス（N=3）において抗体#7-4gのHBV感染阻止効果をみたものである。縦軸はHBVのDNA量を示す。
図９は、ヒト肝細胞キメラマウス（N=3）における抗preS1抗体（上）および抗体#7-4g（下）の抗ウイルス効果を比較して示したものである。ラインはHBVのDNA量、色付きのバーはHBs抗原量（sAg）、斜線のバーは抗Hbs抗体量（sAb）を示す。バーは左から、実線、破線、点線のマウスの結果を示す。
図１０は、ヒト肝細胞キメラマウス（N=3）において抗体#7-4gと抗preS1抗体とを併用投与した場合の抗ウイルス効果を見たものである。ラインはHBVのDNA量、色付きのバーはHBs抗原量（sAg）、斜線のバーは抗Hbs抗体量（sAb）を示す。バーは左から、実線、破線、点線のマウスの結果を示す。
図１１は、ヒト肝細胞キメラマウス（N=3）においてエンテカビル（ETV）を投与した場合の抗ウイルス効果を見たものである。ラインはHBVのDNA量、色付きのバーはHBs抗原量（sAg）またはHBe抗原（eAg）を示す。バーは左から、実線、破線、点線のマウスの結果を示す。
図１２は、ヒト肝細胞キメラマウス（N=1）において抗体#7-4gとエンテカビル（ETV）とを併用投与した場合の抗ウイルス効果を見たものである。ラインはHBVのDNA量、色付きのバーはHBs抗原量（sAg）、斜線のバーは抗Hbs抗体量（sAb）を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
特に具体的な定めのない限り、本明細書で使用される用語は、有機化学、医学、薬学、分子生物学、微生物学等の分野における当業者に一般に理解されるとおりの意味を有する。以下にいくつかの本明細書で使用される用語についての定義を記載するが、これらの定義は、本明細書において、一般的な理解に優先する。
【００１０】
本明細書において、アミノ酸残基は以下の略号で表される。
AlaまたはA：アラニン
ArgまたはR：アルギニン
AsnまたはN：アスパラギン
AspまたはD：アスパラギン酸
CysまたはC：システイン
GlnまたはQ：グルタミン
GluまたはE：グルタミン酸
GlyまたはG：グリシン
HisまたはH：ヒスチジン
IleまたはI：イソロイシン
LeuまたはL：ロイシン
LysまたはK：リジン
MetまたはM：メチオニン
PheまたはF：フェニルアラニン
ProまたはP：プロリン
SerまたはS：セリン
ThrまたはT：スレオニン
TrpまたはW：トリプトファン
TyrまたはY：チロシン
ValまたはV：バリン
（【００１１】以降は省略されています）

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