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公開番号2024081690
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-06-18
出願番号2024044060,2021564413
出願日2024-03-19,2020-04-24
発明の名称細胞の凍結保存のための組成物および方法
出願人リージェンツオブザユニバーシティオブミネソタ
代理人弁理士法人朝日奈特許事務所
主分類C12N 1/00 20060101AFI20240611BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】細胞を凍結保存するための組成物および方法を提供する。
【解決手段】凍結保存用組成物は、300mM以下の組成物中の糖成分の総濃度を有する糖成分、2M以下の組成物中の糖アルコール成分の総濃度を有する糖アルコール成分、ならびにポリマー成分およびアルブミンの少なくとも1つを含み、但し、凍結保存用組成物が凍結保存量未満のジメチルスルホキシド(DMSO)を含む。細胞を凍結保存する方法は、細胞を凍結保存用組成物に加えること、凍結保存用組成物を凍結すること、凍結した凍結保存用組成物を保存すること、凍結保存用組成物を解凍すること、解凍した凍結保存用組成物から細胞を移すこと、ならびに細胞が生存可能であるために効果的な条件下で細胞を培養することを含む。上記凍結することは、0.1℃/分～5℃/分の速度で冷却することを含み得る。当該方法は、解凍後の洗浄工程なしで実施され得る。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
凍結保存用組成物であって、凍結保存用組成物が、
糖成分であって、凍結保存用組成物中の糖成分の総濃度が３００ｍＭ以下である、糖成分と、
糖アルコール成分であって、凍結保存用組成物中の糖アルコール成分の総濃度が２Ｍ以下である、糖アルコール成分と、
１％～１５％の濃度でのポリマー成分と、
グリシン、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、プロリン、およびセリンを含むアミノ酸成分と、
任意に、０．５％～１０％の濃度でのアルブミンと、
を含み、但し、凍結保存用組成物が１４０ｍＭ未満のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含む、凍結保存用組成物。
続きを表示（約 970 文字）【請求項２】
前記糖成分が、１ｍＭ～２５０ｍＭ、１０ｍＭ～２００ｍＭ、２０ｍＭ～１２０ｍＭ、２５ｍＭ～１００ｍＭ、または３０ｍＭ～８０ｍＭの濃度で提供される、請求項１記載の凍結保存用組成物。
【請求項３】
前記糖成分が、トレハロース、マルトース、ラクトース、フルクトース、スクロース、グルコース、デキストラン、メレジトース、ラフィノース、ニゲロトリオース、マルトトリオース、マルトトリウロース、ケストース、セロビオース、キトビオース、およびラクツロースからなる群より選択される少なくとも１つの糖を含む、請求項１または２に記載の凍結保存用組成物。
【請求項４】
前記糖成分が、トレハロース、マルトース、およびラクトースからなる群より選択される少なくとも１つの糖を含む、請求項３記載の凍結保存用組成物。
【請求項５】
前記糖成分がトレハロースを含む、請求項４記載の凍結保存用組成物。
【請求項６】
前記糖成分が、１０ｍＭ～２００ｍＭ、２０ｍＭ～１２０ｍＭ、または３０ｍＭ～８０ｍＭのトレハロース、マルトース、ラクトース、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の凍結保存用組成物。
【請求項７】
前記糖成分が、１０ｍＭ～２００ｍＭ、２０ｍＭ～１２０ｍＭ、または３０ｍＭ～８０ｍＭのトレハロースを含む、請求項６記載の凍結保存用組成物。
【請求項８】
３０ｍＭ～８０ｍＭのトレハロースを含む、請求項７記載の凍結保存用組成物。
【請求項９】
前記糖アルコール成分が、０．２Ｍ～１．２Ｍ、０．２Ｍ～１Ｍ、または０．３Ｍ～０．８Ｍの濃度で提供される、請求項１～８のいずれか１項に記載の凍結保存用組成物。
【請求項１０】
前記糖アルコール成分が、グリセロール、ソルビトール、エチレングリコール、プロピレングリコール、イノシトール、キシリトール、マンニトール、アラビトール、リビトール、エリスリトール、スレイトール、ガラクチトール、およびピニトールからなる群より選択される少なくとも１つの糖アルコールを含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の凍結保存用組成物。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本出願は、細胞を凍結保存するための組成物および方法に関する。
続きを表示（約 2,200 文字）【０００２】
［継続出願のデータ］
本出願は、引用により本明細書に組み込まれる、２０１９年４月３０日に出願された、米国仮特許出願第６２／８４０，６１７号の利益を主張する。
【０００３】
［政府の資金援助］
本発明は、国立衛生研究所によって与えられたＥＢ０２３８８０のもと、政府の支援を受けてなされた。政府は本発明において一定の権利を有する。
【発明の概要】
【０００４】
本出願は、細胞を凍結保存するための組成物および方法に関する。凍結保存用組成物は、３００ｍＭ以下の凍結保存用組成物中の糖成分の総濃度を有する糖成分、２Ｍ以下の凍結保存用組成物中の糖アルコール成分の総濃度を有する糖アルコール成分、ならびに１％～１５％の濃度でのポリマー成分および０．５％～１０％の濃度でのアルブミンの少なくとも１つを含むことができ、但し、凍結保存用組成物は凍結保存量未満のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含む。
【０００５】
糖成分は１ｍＭ～１００ｍＭの濃度で提供され得る。糖成分は、トレハロース、マルトース、ラクトース、フルクトース、スクロース、グルコース、デキストラン、メレジトース、ラフィノースラフィノース、ニゲロトリオース、マルトトリオース、マルトトリウロース、ケストース、セロビオース、キトビオース、ラクツロース、またはそれらの組み合わせを含み得る。
【０００６】
糖アルコール成分は０．２Ｍ～１．２Ｍの濃度で提供され得る。糖アルコール成分は、グリセロール、ソルビトール、エチレングリコール、プロピレングリコール、イノシトール、キシリトール、マンニトール、アラビトール、リビトール、エリスリトール、スレイトール、ガラクチトール、ピニトール、またはそれらの組み合わせを含み得る。
【０００７】
凍結保存用組成物は、０．１％～２．５％の濃度でイオン成分をさらに含み得る。凍結保存用組成物は、０．１ｍＭ～５０ｍＭの濃度でアミノ酸成分をさらに含み得る。アミノ酸成分は、イソロイシン、クレアチン、またはそれらの組み合わせを含み得る。凍結保存用組成物は第２のアミノ酸成分をさらに含み得る。第２のアミノ酸成分は、１つまたは複数のプロリン、バリン、アラニン、グリシン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、ヒスチジン、システイン、トリプトファン、チロシン、アルギニン、グルタミン、タウリン、ベタイン、エクトイン、ジメチルグリシン、エチルメチルグリシン、ＲＧＤペプチド、またはそれらの組み合わせを含み得る。
【０００８】
凍結保存用組成物は細胞をさらに含んでもよい。細胞はｉＰＳ細胞であり得る。細胞は、生存可能な回復された凍結保存された細胞であり得る。
【０００９】
細胞を凍結保存する方法は、細胞を凍結保存用組成物に加えること、該組成物を凍結すること、凍結した組成物を０℃未満の温度で保存すること、該組成物を解凍すること、解凍した組成物から細胞を移すこと、および細胞が生存可能であるために効果的な条件下で細胞を培養することを含む。上記組成物の凍結は、０℃／分超から５℃／分までの速度で冷却することを含む。当該方法は、解凍後の洗浄工程なしで実施され得る。本開示の凍結保存方法は、定義された温度で氷核形成を活発に誘導する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
実施例からの結果を示す。
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実施例で使用される冷却プロファイルを示す。
実施例で使用される冷却プロファイルを示す。
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実施例で使用される凍結保存ワークフローのグラフィック描写である。
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【発明を実施するための形態】
（【００１１】以降は省略されています）

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