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公開番号2024077636
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-06-07
出願番号2024028885,2020564068
出願日2024-02-28,2019-05-14
発明の名称免疫グロブリン分子の条件的活性化のための結合部分
出願人ハープーンセラピューティクス,インク.
代理人弁理士法人清原国際特許事務所
主分類C07K 19/00 20060101AFI20240531BHJP(有機化学)
要約【課題】結合分子のその標的への結合をマスクするための非CDRループと、バルク血清タンパク質を結合するためのCDRとを含む結合部分、結合部分を含有する条件的に活性な標的結合タンパク質、上記結合タンパク質を含む医薬組成物、およびそのような製剤を使用する方法を提供する。
【解決手段】条件的に活性な結合タンパク質であって、該結合タンパク質は、非CDRループを含む結合部分と、切断可能なリンカーと、CD3εドメインに結合する免疫グロブリン分子を含む第1の標的抗原結合ドメインであって、ここで、前記非CDRループは、第1の標的抗原結合ドメインに特異的な結合部位を含む、第1の標的抗原結合ドメインと、第2の標的抗原結合ドメインと、を含み、ここで、結合部位は、第1の標的抗原結合ドメインのその標的への結合をマスクすることができる、結合タンパク質である。
【選択図】図7
特許請求の範囲【請求項１】
非ＣＤＲループおよび切断可能なリンカーを含む結合部分であって、ここで、前記結合部分は、結合分子のその標的への結合をマスクすることができ、ここで、前記結合分子は、免疫グロブリン分子または非免疫グロブリン分子を含む、
結合部分。
続きを表示（約 810 文字）【請求項２】
前記結合部分は、天然ペプチド、合成ペプチド、操作された足場、または操作されたバルク血清タンパク質である、請求項１に記載の結合部分。
【請求項３】
前記操作された足場は、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、ＶＨＨ、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン、免疫グロブリン様足場、ＤＡＲＰｉｎ、シスチンノットペプチド、リポカリン、３ヘリックスバンドル足場、プロテインＧ関連アルブミン結合モジュール、またはＤＮＡあるいはＲＮＡのアプタマー足場を含む、請求項１または２に記載の結合部分。
【請求項４】
前記結合部分はバルク血清タンパク質に結合することができる、請求項１－３のいずれか１つに記載の結合部分。
【請求項５】
前記非ＣＤＲループは、可変ドメイン、定常ドメイン、Ｃ１セットドメイン、Ｃ２セットドメイン、Ｉドメイン、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項１－４のいずれか１つに記載の結合部分。
【請求項６】
前記結合部分は相補性決定領域（ＣＤＲ）をさらに含む、請求項１－５のいずれか１つに記載の結合部分。
【請求項７】
前記結合部分はバルク血清タンパク質に結合することができる、請求項６に記載の結合部分。
【請求項８】
前記バルク血清タンパク質は半減期延長タンパク質である、請求項７に記載の結合部分。
【請求項９】
前記バルク血清タンパク質は、アルブミン、トランスフェリン、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４、ＩｇＧ３、ＩｇＡ単量体、第ＸＩＩＩ因子、フィブリノゲン、ＩｇＥ、または五量体ＩｇＭである、請求項７または８に記載の結合部分。
【請求項１０】
前記結合部分は免疫グロブリン軽鎖に特異的な結合部位を含む、請求項１－９のいずれか１つに記載の結合部分。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、２０１８年５月１４日に出願された米国仮特許出願第６２／６７１，３４４号；２０１８年５月１４日に出願された第６２／６７１，３４９号；２０１８年１１月６日に出願された第６２／７５６，４２９号；および２０１８年１１月６日に出願された第６２／７５６，４５３号に基づく利益を主張し、その各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
続きを表示（約 12,000 文字）【０００２】
引用による組み込み
本明細書で言及される公開物、特許、および特許出願はすべて、あたかも個々の公開物、特許あるいは特許出願がそれぞれ参照により組み込まれるべく具体的かつ個々に指示されるかのように、および、その全体に記載されるかのように、同程度まで、参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００３】
Ｔ細胞エンゲージャーは、Ｔ細胞を腫瘍細胞に一時的に繋ぎ止め、Ｔ細胞による腫瘍殺傷を媒介する。ブリナツモマブ（ＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標））などのＴ細胞エンゲージャーは、いくつかの血液悪性腫瘍における臨床活動を示していた。固形腫瘍におけるＴ細胞エンゲージャーの取り入れは、腫瘍と正常組織との間で十分な差次的発現を有する腫瘍抗原の不足によって制限されている。腫瘍微小環境において優先的に活性なＴ細胞エンゲージャーは、より多くの固形腫瘍抗原の安全な標的化を可能にし得る。
【０００４】
循環における治療用分子、診断用分子、またはイメージング分子（ｉｍａｇｉｎｇｍｏｌｅｃｕｌｅ）の半減期を延長し、かつ、非特異的結合なしに、意図した位置（例えば、腫瘍細胞）内でその標的に到達する能力を向上させる必要がある。
【発明の概要】
【０００５】
ある実施形態は、非ＣＤＲループおよび切断可能なリンカーを含む結合部分を提供し、ここで、上記結合部分は、その標的への結合分子の結合をマスクする（ｍａｓｋｉｎｇ）ことができ、ここで、上記結合分子は、免疫グロブリン分子または非免疫グロブリン分子を含む。いくつかの実施形態では、上記部分は、天然ペプチド、合成ペプチド、操作された足場（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄｓｃａｆｆｏｌｄ）、または操作されたバルク血清タンパク質（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄｂｕｌｋｓｅｒｕｍｐｒｏｔｅｉｎ）である。いくつかの実施形態では、上記操作された足場は、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、ＶＨＨ、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン、免疫グロブリン様足場、ＤＡＲＰｉｎ、シスチンノットペプチド、リポカリン、３ヘリックスバンドル足場、プロテインＧ関連アルブミン結合モジュール、またはＤＮＡあるいはＲＮＡのアプタマーの足場（ａｐｔａｍｅｒｓｃａｆｆｏｌｄ）を含む。いくつかの実施形態では、上記部分は、バルク血清タンパク質に結合することができる。いくつかの実施形態では、非ＣＤＲループは、可変ドメイン、定常ドメイン、Ｃ１セットドメイン、Ｃ２セットドメイン、Ｉドメイン、またはそれらの任意の組み合わせに由来する。いくつかの実施形態では、上記部分は、相補性決定領域（ＣＤＲ）をさらに含む。いくつかの実施形態では、上記部分は、バルク血清タンパク質に結合することができる。いくつかの実施形態では、上記バルク血清タンパク質は、半減期延長タンパク質である。いくつかの実施形態では、上記バルク血清タンパク質は、アルブミン、トランスフェリン、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４、ＩｇＧ３、ＩｇＡ単量体、第ＸＩＩＩ因子、フィブリノゲン、ＩｇＥ、または五量体ＩｇＭである。いくつかの実施形態では、上記バルク血清タンパク質は、アルブミン、トランスフェリン、第ＸＩＩＩ因子、またはフィブリノゲンである。いくつかの実施形態では、上記結合部分内のＣＤＲは、上記バルク血清タンパク質に特異的な結合部位を提供する。いくつかの実施形態では、結合部分は、上記結合部分と、標的抗原結合ドメインあるいは非免疫グロブリン結合部分との間の特異的な分子間相互作用を介して、その標的抗原結合ドメイン（免疫グロブリン分子など）または非免疫グロブリン結合分子の標的への結合をマスクすることができる。いくつかの実施形態では、結合部分内の非ＣＤＲループは、標的抗原結合ドメイン（免疫グロブリン分子など）あるいは非免疫グロブリン結合分子への結合部分の結合に特異的な結合部位を提供する。
【０００６】
いくつかの実施形態では、結合部分は、免疫グロブリン軽鎖に特異的な結合部位を含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン軽鎖は、Ｉｇκ遊離軽鎖（Ｉｇκ ｆｒｅｅｌｉｇｈｔｃｈａｉｎ）である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、バルク血清タンパク質または免疫グロブリン軽鎖に特異的な結合部位を提供する。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン分子は、標的抗原結合ドメインである。いくつかの実施形態では、上記結合部分は、標的抗原結合ドメインに結合する。いくつかの実施形態では、上記結合部分は、標的抗原結合ドメインに共有結合する。いくつかの実施形態では、上記結合部分は、結合部分と標的抗原結合ドメインとの間の特異的な分子間相互作用を介して、標的抗原結合ドメインのその標的への結合をマスクすることができる。いくつかの実施形態では、非ＣＤＲループは、上記結合部分の標的抗原結合ドメインへの結合に特異的な結合部位を提供する。いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーが切断されると、結合部分は標的抗原結合ドメインから分離され、標的抗原結合ドメインはその標的に結合する。いくつかの実施形態において、標的抗原ドメインは腫瘍抗原に結合する。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ－２、ＨＥＲ－３、ｃ－Ｍｅｔ、ＦｏＩＲ、ＰＳＭＡ、ＣＤ３８、ＢＣＭＡ、およびＣＥＡ．５Ｔ４、ＡＦＰ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤＨ－６、ＣＡＩＸ、ＣＤ１１７、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１６６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２０５、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３５２、ＣＤ３７、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＤＬＬ３、ＥｐｈＡ２、ＦＡＰ、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＧＰＣ３、ｇｐＡ３３、ＦＬＴ－３、ｇｐＮＭＢ、ＨＰＶ－１６Ｅ６、ＨＰＶ－１６Ｅ７、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＡ３、ＳＬＣ３９Ａ６、ＭＡＧＥ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮａＰｉ２ｂ、Ｎｅｃｔｉｎ－４、ＣＤＨ－３、ＣＤＨ－１７、ＥＰＨＢ２、ＩＴＧＡＶ、ＩＴＧＢ６、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＬＲ、ＰＳＣＡ、ＰＴＫ７、ＲＯＲ１、ＳＬＣ４４Ａ４、ＳＬＩＴＲＫ５、ＳＬＩＴＲＫ６、ＳＴＥＡＰ１、ＴＩＭ１、Ｔｒｏｐ２、またはＷＴ１を含む。いくつかの実施形態では、標的抗原ドメインは、免疫チェックポイントタンパク質に結合する。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントタンパク質は、ＣＤ２７、ＣＤ１３７、２Ｂ４、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１５５、ＩＣＯＳ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＯＸ４０、ＤＮＡＭ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ－４、ＣＤ８、ＣＤ４０、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＤ４８、ＣＤ７０、Ａ２ＡＲ、ＣＤ３９、ＣＤ７３、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＴＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、またはＶＩＳＴＡである。いくつかの実施形態では、標的抗原結合ドメインはＴ細胞に結合する。いくつかの実施形態では、標的抗原結合ドメインはＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、切断可能リンカーは切断部位を含む。いくつかの実施形態では、切断部位は、プロテアーゼによって認識される。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、セリンプロテアーゼ、システインプロテアーゼ、アスパラギン酸塩プロテアーゼ、トレオニンプロテアーゼ、グルタミン酸プロテアーゼ、メタロプロテイナーゼ、ゼラチナーゼ、またはアスパラギンペプチドリアーゼによって認識される。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、カテプシンＢ、カテプシンＣ、カテプシンＤ、カテプシンＥ、カテプシンＫ、カテプシンＬ、カリクレイン、ｈＫ１、ｈＫ１０、ｈＫ１５、プラスミン、コラゲナーゼ、ＩＶ型コラゲナーゼ、ストロメライシン、第Ｘａ因子、キモトリプシン様プロテアーゼ、トリプシン様プロテアーゼ、エラスターゼ様プロテアーゼ、サブチリシン様プロテアーゼ、アクチニダイン（ａｃｔｉｎｉｄａｉｎ）、ブロメライン、カルパイン、カスパーゼ、カスパーゼ－３、Ｍｉｒ１－ＣＰ、パパイン、ＨＩＶ－１プロテアーゼ、ＨＳＶプロテアーゼ、ＣＭＶプロテアーゼ、キモシン、レニン、ペプシン、マトリプターゼ、レグマイン、プラスメプシン、ネペンテシン（ｎｅｐｅｎｔｈｅｓｉｎ）、メタロエキソペプチダーゼ、メタロエンドペプチダーゼ、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）、ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７、ＭＭＰ８、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１４、ＡＤＡＭ９、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１２、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）、エンテロキナーゼ、前立腺特異的標的（ＰＳＡ、ｈＫ３）、インターロイキン－１β変換酵素、トロンビン、ＦＡＰ（ＦＡＰ－α）、ジペプチジルペプチダーゼ、ＩＩ型膜貫通セリンプロテアーゼ（ＴＴＳＰ）、好中球エラスターゼ、カテプシンＧ、プロテイナーゼ３、好中球セリンプロテアーゼ４、マスト細胞キマーゼ、およびマスト細胞トリプターゼによって認識される。
【０００７】
ある実施形態は、非ＣＤＲループ、切断可能なリンカー（Ｌ）、第１の標的抗原結合ドメイン（Ｔ１）、および第２の標的抗原結合ドメイン（Ｔ２）を含む結合部分（Ｍ）を含む条件的に活性な結合タンパク質（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌｌｙａｃｔｉｖｅｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ）を提供し、ここで、上記第１の標的抗原結合ドメイン（Ｔ１）は、免疫グロブリン分子を含み、ここで、前記非ＣＤＲループは、第１の標的抗原結合ドメインに結合することができ、ここで、前記結合部分は、第１の標的抗原結合ドメインのその標的への結合をマスクすることができる。いくつかの実施形態では、結合部分は、半減期延長タンパク質に結合することができる。いくつかの実施形態では、結合部分は、天然ペプチド、合成ペプチド、操作された足場、または操作された血清バルクタンパク質（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄｓｅｒｕｍｂｕｌｋｐｒｏｔｅｉｎ）である。いくつかの実施形態では、上記操作された足場は、ｓｄＡｂ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、ＶＨＨ、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン、免疫グロブリン様足場、ＤＡＲＰｉｎ、シスチンノットペプチド、リポカリン、３ヘリックスバンドル足場、プロテインＧ関連アルブミン結合モジュール、またはＤＮＡあるいはＲＮＡのアプタマーの足場を含む。いくつかの実施形態では、非ＣＤＲループは、可変ドメイン、定常ドメイン、Ｃ１セットドメイン、Ｃ２セットドメイン、Ｉドメイン、またはそれらの任意の組み合わせに由来する。いくつかの実施形態では、結合部分は、相補性決定領域（ＣＤＲ）をさらに含む。いくつかの実施形態では、結合部分は、バルク血清タンパク質に特異的な結合部位を含む。いくつかの実施形態では、上記バルク血清タンパク質は、アルブミン、トランスフェリン、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４、ＩｇＧ３、ＩｇＡ単量体、第ＸＩＩＩ因子、フィブリノゲン、ＩｇＥ、または五量体ＩｇＭである。いくつかの実施形態では、結合部分は、免疫グロブリン軽鎖に特異的な結合部位をさらに含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン軽鎖は、Ｉｇκ遊離軽鎖である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、バルク血清タンパク質あるいは免疫グロブリン軽鎖に特異的な結合部位、または任意の組み合わせを提供する。いくつかの実施形態では、結合部分は、上記結合部分と第１の標的抗原結合ドメインとの間の特異的な分子間相互作用を介して、第１の標的抗原結合ドメインのその標的への結合をマスクすることができる。いくつかの実施形態では、非ＣＤＲループは、結合部分の第１の標的抗原結合ドメインへの結合に特異的な結合部位を提供する。いくつかの実施形態では、第１または第２の標的抗原結合ドメインは腫瘍抗原に結合する。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は以下の少なくとも１つを含む：ＥｐＣＡＭ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ１６４２２を含む）、ＥＧＦＲ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ００５３３を含む）、ＨＥＲ－２（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ０４６２６を含む）、ＨＥＲ－３（例示的なタンパク質配列は含む、ＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ２１８６０を含む）、ｃ－Ｍｅｔ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ０８５８１を含む）、ＦｏＩＲ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ１５２３８を含む）、ＰＳＭＡ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ０４６０９を含む）、ＣＤ３８（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ２８９０７を含む）、ＢＣＭＡ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ０２２２３を含む）、およびＣＥＡ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ０６７３１を含む）、５Ｔ４（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ１３６４１を含む）、ＡＦＰ（例示的なタンパク質配列は含む、含む、ＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ０２７７１を含む）、Ｂ７－Ｈ３（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ５ＺＰＲ３を含む）、ＣＤＨ－６（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ９７３２６を含む）、ＣＡＩＸ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ１６７９０を含む）、ＣＤ１１７（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ１０７２１を含む）、ＣＤ１２３（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ２６９５１を含む）、ＣＤ１３８（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ１８８２７を含む）、ＣＤ１６６（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ１３７４０を含む）、ＣＤ１９（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ１５９３１を含む）、ＣＤ２０（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ１１８３６を含む）、ＣＤ２０５（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｏ６０４４９を含む）、ＣＤ２２（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ２０２７３を含む）、ＣＤ３０（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ２８９０８を含む）、ＣＤ３３（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ２０１３８を含む）、ＣＤ３５２（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ９６ＤＵ３を含む）、ＣＤ３７（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ１１０４９を含む）、ＣＤ４４（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ１６０７０を含む）、ＣＤ５２（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ３１３５８を含む）、ＣＤ５６（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ１３５９１を含む）、ＣＤ７０（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ３２９７０を含む）、ＣＤ７１（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ０２７８６を含む）、ＣＤ７４（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ０４２３３を含む）、ＣＤ７９ｂ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ４０２５９を含む）、ＤＬＬ３（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ９ＮＹＪ７を含む）、ＥｐｈＡ２（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ２９３１７を含む）、ＦＡＰ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ１２８８４を含む）、ＦＧＦＲ２（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ２１８０２を含む）、ＦＧＦＲ３（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ２２６０７を含む）、ＧＰＣ３（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ５１６５４を含む）、ｇｐＡ３３（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ９９７９５を含む）、ＦＬＴ－３（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ３６８８８を含む）、ｇｐＮＭＢ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ１４９５６を含む）、ＨＰＶ－１６Ｅ６（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ０３１２６を含む）、ＨＰＶ－１６Ｅ７（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ０３１２９を含む）、ＩＴＧＡ２（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ１７３０１を含む）、ＩＴＧＡ３（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ２６００６を含む）、ＳＬＣ３９Ａ６（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ１３４３３を含む）、ＭＡＧＥ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ９ＨＣ１５を含む）、メソテリン（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ１３４２１を含む）、Ｍｕｃ１（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ１５９４１を含む）、Ｍｕｃ１６（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ８ＷＸ１７を含む）、ＮａＰｉ２ｂ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｏ９５４３６を含む）、Ｎｅｃｔｉｎ－４（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ９６９１８を含む）、ＣＤＨ－３（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ８ＷＸ１７を含む）、ＣＤＨ－１７（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｅ５ＲＪＴ３を含む）、ＥＰＨＢ２（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ２９３２３を含む）、ＩＴＧＡＶ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ０６７５６を含む）、ＩＴＧＢ６（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ１８５６４を含む）、ＮＹ－ＥＳＯ－１（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ７８３５８を含む）、ＰＲＬＲ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ１６４７１を含む）、ＰＳＣＡ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｏ４３６５３を含む）、ＰＴＫ７（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ１３３０８を含む）、ＲＯＲ１（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ０１９７３を含む）、ＳＬＣ４４Ａ４（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ５３ＧＤ３を含む）、ＳＬＩＴＲＫ５（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ８ＩＷ５２を含む）、ＳＬＩＴＲＫ６（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ９ＨＹ７を含む）、ＳＴＥＡＰ１（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ９ＵＨＥ８を含む）、ＴＩＭ１（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ９６Ｄ４２を含む）、Ｔｒｏｐ２（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ０９７５８を含む）、あるいはＷＴ１（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ１９５４４を含む）、またはそれらの任意の組み合わせ。いくつかの実施形態では、第１または第２の標的抗原結合ドメインは免疫チェックポイントタンパク質に結合する。いくつかの実施形態、免疫チェックポイントタンパク質は以下の少なくとも１つである：ＣＤ２７（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ２６８４２を含む）、ＣＤ１３７（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ０７０１１を含む）、２Ｂ４（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ９ｂＺＷ８を含む）、ＴＩＧＩＴ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ４９５Ａ１を含む）、ＣＤ１５５（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ１５１５１を含む）、イコサ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ９Ｙ６Ｗ８を含む）、ＨＶＥＭ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｏ４３５５７を含む）、ＣＤ４０Ｌ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ２９９６５を含む）、ＬＩＧＨＴ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｏ４３５５７を含む）、ＯＸ４０（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．を含む）、ＤＮＡＭ－１（例示的なタンパク質配列は含む、ＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ１５７６２を含む）、ＰＤ－Ｌ１（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ９ＺＱ７を含む）、ＰＤ１（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ１５１１６を含む）、ＰＤ－Ｌ２（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ９ＢＱ５１を含む）、ＣＴＬＡ－４（例示的なタンパク質配列はＵ
ｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ１６４１０を含む）、ＣＤ８（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ１０９６６、Ｐ０１７３２を含む）、ＣＤ４０（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ２５９４２を含む）、ＣＥＡＣＡＭ１（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ１３６８８を含む）、ＣＤ４８（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ０９３２６を含む）、ＣＤ７０（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ３２９７０を含む）、ＡＡ２ＡＲ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ２９２７４を含む）、ＣＤ３９（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ４９９６１を含む）、ＣＤ７３（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ２１５８９を含む）、Ｂ７－Ｈ３（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ５ＺＰＲ３を含む）、Ｂ７－Ｈ４（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ７Ｚ７Ｄ３を含む）、ＢＴＬＡ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ７６Ａ９を含む）、ＩＤＯ１（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ１４９０２を含む）、ＩＤＯ２（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ６ＺＱＷ０を含む）、ＴＤＯ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ４８７５５を含む）、ＫＩＲ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ９９７０６を含む）、ＬＡＧ－３（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｐ１８６２７を含む）、ＴＩＭ－３（ＨＡＶＣＲ２としても知られている、例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ８ＴＤＱ０を含む）、またはＶＩＳＴＡ（例示的なタンパク質配列はＵｎｉＰｒｏｔｋＢＩＤＮｏ．Ｑ９Ｄ６５９を含む）。
【０００８】
いくつかの実施形態では、第１または第２の標的抗原結合ドメインは免疫細胞に結合する。いくつかの実施形態では、第１または第２の標的抗原結合ドメインはＴ細胞に結合する。いくつかの実施形態では、第１または第２の標的抗原結合ドメインはＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、結合部分（Ｍ）、切断可能なリンカー（Ｌ）、第１の標的抗原結合ドメイン（Ｔ１）、および第２の標的抗原結合ドメイン（Ｔ２）は、構成Ｍ：Ｌ：Ｔ１：Ｔ２、および構成Ｔ２：Ｔ１：Ｌ：Ｍのうち１つである。いくつかの実施形態では、結合部分はアルブミン結合ドメイン（抗Ａｌｂ）を含み、第１の標的抗原結合ドメイン（Ｔ１）はＣＤ３結合ドメイン（例えば、抗ＣＤ３ｓｃＦＶ）を含み、および、ＰｒｏＴｒｉＴＡＣ分子は、抗Ａｌｂ：抗ＣＤ３：Ｔ２の配向（ｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ）を有している。いくつかの実施形態では、結合部分はアルブミン結合ドメイン（抗Ａｌｂ）を含み、第２の標的抗原結合ドメイン（Ｔ２）はＣＤ３結合ドメイン（例えば、抗ＣＤ３ｓｃＦＶ）を含み、および、ＰｒｏＴｒｉＴＡＣ分子は、抗Ａｌｂ：Ｔ１：抗ＣＤ３の配向を有している。Ｔ１ドメインは、ある例において、限定されないが、抗ＥＧＦＲドメイン、抗ＭＳＬＮドメイン、抗ＢＣＭＡドメイン、抗ＥｐＣＡＭドメイン、抗ＰＳＭＡドメイン、または抗ＤＬＬ３ドメインなどの腫瘍抗原結合ドメインである。
【０００９】
いくつかの実施形態では、切断可能リンカーは切断部位を含む。いくつかの実施形態では、切断部位は、プロテアーゼによって認識される。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、セリンプロテアーゼ、システインプロテアーゼ、アスパラギン酸塩プロテアーゼ、トレオニンプロテアーゼ、グルタミン酸プロテアーゼ、メタロプロテイナーゼ、ゼラチナーゼ、またはアスパラギンペプチドリアーゼによって認識される。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、カテプシンＢ、カテプシンＣ、カテプシンＤ、カテプシンＥ、カテプシンＫ、カテプシンＬ、カリクレイン、ｈＫ１、ｈＫ１０、ｈＫ１５、プラスミン、コラゲナーゼ、ＩＶ型コラゲナーゼ、ストロメライシン、第Ｘａ因子、キモトリプシン様プロテアーゼ、トリプシン様プロテアーゼ、エラスターゼ様プロテアーゼ、サブチリシン様プロテアーゼ、アクチニダイン、ブロメライン、カルパイン、カスパーゼ、カスパーゼ－３、Ｍｉｒ１－ＣＰ、パパイン、ＨＩＶ－１プロテアーゼ、ＨＳＶプロテアーゼ、ＣＭＶプロテアーゼ、キモシン、レニン、ペプシン、マトリプターゼ、レグマイン、プラスメプシン、ネペンテシン（ｎｅｐｅｎｔｈｅｓｉｎ）、メタロエキソペプチダーゼ、メタロエンドペプチダーゼ、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）、ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７、ＭＭＰ８、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１４、ＡＤＡＭ９、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１２、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）、エンテロキナーゼ、前立腺特異的標的（ＰＳＡ、ｈＫ３）、インターロイキン－１β変換酵素、トロンビン、ＦＡＰ（ＦＡＰ－α）、ジペプチジルペプチダーゼ、ＩＩ型膜貫通セリンプロテアーゼ（ＴＴＳＰ）、好中球エラスターゼ、カテプシンＧ、プロテイナーゼ３、好中球セリンプロテアーゼ４、マスト細胞キマーゼ、およびマスト細胞トリプターゼによって認識される。いくつかの実施形態では、条件的に活性なタンパク質は、結合部分に結合された半減期延長ドメインを含み、ここで、上記半減期延長ドメインは、結合タンパク質にセーフティ・スイッチ（ｓａｆｅｔｙｓｗｉｔｃｈ）を提供し、およびここで、リンカーが切断されると、結合部分と半減期延長ドメインを第１の標的抗原結合ドメインから分離することによって、結合タンパク質が活性化され、それにより、結合タンパク質がセーフティ・スイッチから分離される。いくつかの実施形態では、リンカーの切断は腫瘍微小環境内にある。
【００１０】
ある実施形態は、結合部分内の非ＣＤＲループによって標的抗原結合ドメインに結合した結合部分を含む、条件的に活性な結合タンパク質をもたらし、ここで、上記結合部分は、半減期延長ドメインにさらに結合され、切断可能なリンカーを含み、ここで、上記標的抗原結合ドメインは、免疫グロブリン分子を含み、ここで、上記結合タンパク質は、リンカーの切断によるその活性化前に延長された半減期を有しており、およびここで、活性化の際に、結合部分および半減期延長ドメインは標的抗原結合ドメインから分離され、ならびにここで、活性化状態の結合タンパク質は、延長された半減期を有していない。いくつかの実施形態では、リンカーの切断は腫瘍微小環境内にある。
（【００１１】以降は省略されています）

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