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公開番号2024056776
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-04-23
出願番号2024015623,2019569128
出願日2024-02-05,2019-01-29
発明の名称辺円対応変倍構造を有する生乳中の体細胞検査キット
出願人株式会社キコーコーポレーション
代理人個人,個人,個人,個人,個人
主分類C12M 1/34 20060101AFI20240416BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】辺円対応変倍構造を有する生乳中の体細胞検査キットの提供。
【解決手段】本発明は、簡便かつ、測定感度および測定精度が十分な、試料中(特に液体試料中、例えば、生乳)の検査対象物質を検出および/または定量するための積層フィルタ、試料用検査具およびキットを提供する。本発明は、試料中(特に液体試料中、例えば、生乳)の検査対象物質を検出および/または定量するための積層フィルタであって、該積層フィルタは、複数のフィルタを含み、該複数のフィルタの少なくとも2つは検査対象物質と反応する反応用試薬を含む、積層フィルタに関する。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
明細書に記載の発明。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、試料中（特に液体試料中）の検査対象物質を検出および／または定量するための積層フィルタ、試料用検査具およびキットに関する。特に、本発明は、生乳中（例えば、ウシ生乳中）の体細胞（例えば、白血球）を検査するための積層フィルタ、試料用検査具およびキットに関する。
続きを表示（約 3,700 文字）【背景技術】
【０００２】
日本国内の酪農戸数は１８，６００戸、乳用経産牛は８９．２８万頭が飼育されている。酪農家の総戸数は減少しつつあるが、一戸当たりの頭数は増加している。酪農家にとっては高品質な生乳を生産し、経営の安定を図るべく日夜努力されているが、一方で乳房炎という、生乳の品質を低下させる「病気」との戦いも余儀なくされている。乳牛が乳房炎に罹患すると、典型的には、以下の問題を生じる、（１）生乳中に体細胞（特に白血球）が増加し、乳成分に変化が起こり生乳の品質を低下させる、（２）乳房炎は生乳の生産量、つまりウシのミルクの出が悪くなることになり、乳量の損失を伴う、（３）体細胞が多く含まれた生乳は乳製品の生産性と品質の低下を招くため、ＪＡや乳業メーカーの買取り価格が引き下げられて農家の損失となる。生乳１ミリリットル中の体細胞数が２０万を超えると乳価は１ｋｇあたり５円から最大４０円引き下げられる。現在の乳価は１ｋｇあたり７８～８０円である。
【０００３】
酪農家の収入の９０％は生乳の販売であり、乳牛一頭から得られる所得は平均１６万７千円程度である。もし乳房炎に罹患すると一頭当たりの損失は８７，０００円といわれ、収入の半分が損失することになる。現在北海道だけでも乳房炎による経済的損失は３００億円、米国では年間２０億ドルといわれている。したがって、乳房炎を早期に発見して治療することは、酪農家にとっての喫緊の課題であり、乳房炎の解決が、経営の安定に繋がるといっても過言ではない。
【０００４】
ところが、生乳中の体細胞数を精度良く測定するにはフローサイトメーターという高額な装置（８００～２０００万円）が必要であり、酪農家が保有するのは難しい。また酪農家が現場で使用することができるような検査キットは感度と精度が低く、乳房炎の罹患を判断するのが難しい。
【０００５】
生乳中の体細胞は８５％～９０％が白血球であり、乳房炎に罹患すると生乳中にこの体細胞が増え生乳の質が落ちる。生乳や各種の体細胞を簡便に測定するは白血球細胞内にエステラーゼという加水分解酵素があり、このエステラーゼの酵素活性を測定することで、生乳中の体細胞を推定するという検査キットが考案されている（特許文献１：特表２００５－５２６５１３）。特許文献１の特徴は３層構造をからなるろ過材とフィルムを使用し、最上部に穴の開いたフィルムを配し、次のフィルタに白血球エステラーゼと反応する基質を塗布し、固定化し生乳中の体細胞を補足し、基質と反応する場となるよう設計されている。さらに反応に不要な生乳や、生乳に含まれるエステラーゼ反応を阻害する成分などを吸収するためのろ紙が配置されている。実際の体細胞の測定においては、生乳をピペットで取り、その一定量を最上部の穴に滴下し第２層目のフィルタによって体細胞をろ過、補足し、不要な生乳を第３層目のろ紙に吸わせる。さらにアクチベーターと呼ばれるバッファーを最上部の穴から滴下し、白血球の持つエステーゼの至適反応条件に変換し、酵素反応が始まるのを待つ。やがて白血球エステラーゼによってフィルタに塗布されていた酵素基質が分解され、分解生成物によってフィルタの色が変化し、この色変化を肉眼または特定の機器によって判定し、生乳中に含まれる体細胞の数を推定する。その体細胞数によって乳房炎の診断の補助とする。
【０００６】
しかしながら、特許文献１は比較的簡便であるものの、測定感度および測定精度は十分とは言えない。このような背景から、生乳中の体細胞数を現場で、簡単に感度・精度良く測定する検査用の積層フィルタ、試料用検査具およびキットの開発が望まれていた。
【０００７】
また、インフルエンザの診断などに汎用されているイムノクロマトという検査用チップも支持体上に貼付されたニトロセルロースなどのいわゆるメンブランフィルターに、インフルエンザウイルスと反応する抗体を塗布しそこにインフルエンザウイルスを含む体液を流すことによって、ウイルスを検出して診断するように調製された診断用チップであるが、反応の場となるシートは一枚でしかも一箇所である。これらのチップで対象となる成分の検出感度を上げて、含まれる成分をより低濃度まで検出しようとする場合は、検査材料から対応する成分を濃縮する必要があり、診断用チップの検出感度のみを上昇させるには限界があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
特表２００５－５２６５１３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、簡便かつ、測定感度および測定精度が十分な、試料中（特に液体試料中）の検査対象物質を検出および／または定量するための積層フィルタ、試料用検査具およびキットを提供することを解決課題とする。例えば、本発明は、生乳中の体細胞を検査するための積層フィルタ、試料用検査具およびキットを提供することを解決課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記課題は、以下によって解決された：
（項目１）
検査対象物質を検出および／または定量するための積層フィルタであって、該積層フィルタは、複数のフィルタを含み、該複数のフィルタの少なくとも２つは検査対象物質と反応する反応用試薬を含む、積層フィルタ。
（項目２）
前記複数のフィルタは形状の異なるフィルタを含む、項目１に記載の積層フィルタ。
（項目３）
前記複数のフィルタが少なくとも４枚のフィルタである、項目１または２に記載の積層フィルタ。
（項目４）
前記複数のフィルタは第１のフィルタおよび第２のフィルタを含み、該第１のフィルタはｎ角形であり、該第２のフィルタはｍ角形または円形であり、ここで、ｎは３から６の整数であり、ｍはｎよりも大きい、項目１～３のいずれか一項に記載の積層フィルタ。
（項目５）
前記第１のフィルタと前記第２のフィルタとが隣接する、項目４に記載の積層フィルタ。（項目６）
前記第１のフィルタと前記第２のフィルタの面積が異なる、項目４または５に記載の積層フィルタ。
（項目７）
前記積層フィルタが複数の前記第１のフィルタと複数の前記第２のフィルタを含み、前記第１のフィルタの少なくとも１つが前記第２のフィルタの少なくとも１つと隣接する、項目４～６のいずれか一項に記載の積層フィルタ。
（項目８）
前記第１のフィルタと前記第２のフィルタが交互に積層される、項目５または７に記載の積層フィルタ。
（項目９）
前記複数の前記第１のフィルタの少なくとも２つが、頂点の位置が異なるように回転されて積層される、項目７または８に記載の積層フィルタ。
（項目１０）
前記複数の前記第２のフィルタがｍ角形であり、該第２のフィルタの少なくとも２つが、頂点の位置が異なるように回転されて積層される、項目７～９のいずれか一項に記載の積層フィルタ。
（項目１１）
前記第１のフィルタは四角形であって、前記第２のフィルタは円形である、項目４～９のいずれか一項に記載の積層フィルタ。
（項目１２）
前記フィルタが、ろ紙、不織布、およびガラス繊維からなる群から選択されるフィルタである、項目１～１１のいずれか一項に記載の積層フィルタ。
（項目１３）
前記検査対象物質と前記反応用試薬の反応が呈色反応である、項目１～１２のいずれか一項に記載の積層フィルタ。
（項目１４）
前記検査対象物質が酵素であり、前記反応用試薬が該酵素の基質を含む、項目１～１３のいずれか一項に記載の積層フィルタ。
（項目１５）
前記検査対象物質がエステラーゼであり、前記反応用試薬がエステラーゼの基質を含む、項目１～１４のいずれか一項に記載の積層フィルタ。
（項目１６）
前記反応用試薬が３－［Ｎ－（ｐ－トルエンスルホニル）－Ｌ－アラニルオキシ］インドールを含む、項目１５に記載の積層フィルタ。
（項目１７）
前記複数のフィルタの少なくとも１つは反応促進剤を含む、項目１～１６のいずれか一項に記載の積層フィルタ。
（項目１８）
項目１～１７のいずれか一項に記載の積層フィルタおよび該積層フィルタ用のハウジングを含む、試料用検査具。
（項目１９）
生乳中の白血球を測定するための、項目１８に記載の試料用検査具。
（項目２０）
前記ハウジングがシリンジを含む、項目１８または１９に記載の試料用検査具。
（項目２１）
項目１８～２０のいずれか一項に記載の試料用検査具を含む、キット。
（【００１１】以降は省略されています）

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