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公開番号2024048319
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-04-08
出願番号2022206880
出願日2022-12-23
発明の名称細胞組織の製造方法
出願人NTN株式会社
代理人弁理士法人深見特許事務所
主分類C12N 5/071 20100101AFI20240401BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】寸法および中心位置を考慮しつつ塗布液を高い位置精度で供給することにより、小スケールかつハイスループットで作用を再現性高く高精度に評価可能な細胞組織の製造方法を提供する。
【解決手段】第2塗布液Bを供給する工程においては、N個の第1塗布液Aのそれぞれの第1寸法をr_1n(1≦n≦Nの自然数)、M個の第2塗布液のそれぞれの第2寸法をr_2m(1≦m≦Mの自然数)とし、N個の中から選択された任意の第1寸法がr_1nの第1塗布液の中心と、M個の中から選択された任意の第2寸法がr_2mの第2塗布液の中心との距離をD_n,mとすれば、任意の第1塗布液と任意の第2塗布液との間で
(数1)D_n,m<r_2m-r_1n・・・(1)
および
(数2)D_n,m>r_2m+r_1n・・・(2)
のいずれかが成立するように供給される。
【選択図】図8
特許請求の範囲【請求項１】
塗布対象物内に第１塗布液をＮ個（Ｎ≧１の自然数）供給し、細胞を配置する工程と、
前記Ｎ個の第１塗布液のうち少なくとも１個を覆うように、前記塗布対象物内に第２塗布液をＭ個（Ｍ≧１の自然数）供給する工程とを備え、
前記第２塗布液を供給する工程においては、前記Ｎ個の第１塗布液のそれぞれの中心から外縁までの寸法の最大値である第１寸法をｒ
１ｎ
（１≦ｎ≦Ｎの自然数）、前記Ｍ個の第２塗布液のそれぞれの中心から外縁までの寸法の最大値である第２寸法をｒ
２ｍ
（１≦ｍ≦Ｍの自然数）とし、Ｎ個の中から選択された任意の前記第１寸法がｒ
１ｎ
の前記第１塗布液の中心と、Ｍ個の中から選択された任意の前記第２寸法がｒ
２ｍ
の前記第２塗布液の中心との距離をＤ
ｎ，ｍ
とすれば、任意の前記第１塗布液と任意の前記第２塗布液との間で
（数１）Ｄ
ｎ，ｍ
＜ｒ
２ｍ
－ｒ
１ｎ
・・・（１）
および
（数２）Ｄ
ｎ，ｍ
＞ｒ
２ｍ
＋ｒ
１ｎ
・・・（２）
のいずれかが成立するように供給される、細胞組織の製造方法。
続きを表示（約 1,200 文字）【請求項２】
前記Ｎ個の第１塗布液のうち前記第２塗布液と重なる１個以上の前記第１塗布液の第１図心を中心とし前記１個以上の第１塗布液を全て覆い前記１個以上の前記第１塗布液のいずれかと内接するよう求められた第１仮想曲線の最大寸法である第１仮想寸法ｒ
１ｖ
以上の基準寸法よりも、前記第２寸法ｒ
２ｍ
の方が大きく、
前記第１図心は、前記第２塗布液と重なる１個以上の前記第１塗布液のそれぞれの中心位置から求められる、請求項１に記載の細胞組織の製造方法。
【請求項３】
前記Ｍ個の第２塗布液の第２図心を中心とし、前記Ｍ個の第２塗布液を全て覆い前記Ｍ個の第２塗布液のいずれかと内接するよう求められた第２仮想曲線の最大寸法である第２仮想寸法ｒ
２ｖ
以上の基準寸法よりも、前記塗布対象物の第３寸法ｒ
３
の方が大きく、
前記第２図心は、前記Ｍ個の前記第２塗布液のそれぞれの中心位置から求められる、請求項１に記載の細胞組織の製造方法。
【請求項４】
前記塗布対象物内に供給される前記Ｎ個の第１塗布液のうち少なくとも１個に含まれる前記細胞は第１細胞であり、前記少なくとも１個とは異なる他の少なくとも１個の前記第１塗布液に含まれる前記細胞は第２細胞である、請求項１または２に記載の細胞組織の製造方法。
【請求項５】
前記塗布対象物内に供給される前記Ｎ個の第１塗布液のうち少なくとも１個に前記細胞が含まれ、前記少なくとも１個とは異なる他の少なくとも１個の前記第１塗布液には前記細胞を含まずサイトカイン、薬剤、ＥＣＭおよび添加因子からなる群から選択される少なくともいずれかが含まれる、請求項１または２に記載の細胞組織の製造方法。
【請求項６】
前記第１塗布液にサイトカイン、ＥＣＭおよび添加因子からなる群から選択される少なくともいずれかが含まれる、請求項１または２に記載の細胞組織の製造方法。
【請求項７】
前記第１塗布液を供給する工程以降にゲル化剤を用いて、前記塗布対象物内に供給された前記細胞から細胞組織が形成される、請求項１または２に記載の細胞組織の製造方法。
【請求項８】
前記第１塗布液は前記細胞とゲル化剤とを含み、前記第２塗布液は前記ゲル化剤よりも粘度の高い溶液である、請求項７に記載の細胞組織の製造方法。
【請求項９】
前記第１塗布液は前記細胞を含み、前記第２塗布液はゲル化剤を含む、請求項７に記載の細胞組織の製造方法。
【請求項１０】
２液混合方式により前記塗布対象物内に前記第１塗布液および前記第２塗布液が供給される、請求項１または２に記載の細胞組織の製造方法。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本開示は、細胞組織の製造方法に関する。
続きを表示（約 3,000 文字）【背景技術】
【０００２】
１つの容器内に、異種の細胞および組織を近接して培養することで、生体と類似した極性のある細胞・組織を形成する技術が、たとえば特開２０２０－１７８６１２号公報（特許文献１）に開示されている。特開２０２０－１７８６１２号公報には、１つの容器内に複数の細胞組織を塗布針方式により形成する方法が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
特開２０２０－１７８６１２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
特開２０２０－１７８６１２号公報では、たとえば段落００９６および図１７にて、塗布対象物であるウェルと、その中に供給される第１塗布液としての細胞組織との組み合わせについて例示されている。
【０００５】
しかし特開２０２０－１７８６１２号公報には、細胞を含む第１塗布液の半径と、それを覆う第２塗布液との半径と、ウェルの大きさとの３つのパラメータの間の関係について開示されていない。仮に特開２０２０－１７８６１２号公報の図１７（ａ）において、ウェルの内壁に近い位置に第２塗布液をディスペンサを用いて滴下すれば、静電気により第２塗布液がウェルの内壁に付着したり、目的の位置からずれたりすることがある。結果として、第２塗布液が第１塗布液を完全に覆うことが出来ず、第１塗布液が崩壊する可能性がある。
【０００６】
本開示は上記の課題に鑑みなされたものである。本開示の目的は、寸法および中心位置を考慮しつつ塗布液を高い位置精度で供給することにより、小スケールかつハイスループットで作用を再現性高く高精度に評価可能な細胞組織の製造方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本開示に従った細胞組織の製造方法では、塗布対象物内に第１塗布液がＮ個（Ｎ≧１の自然数）供給され、細胞が配置される。Ｎ個の第１塗布液のうち少なくとも１個を覆うように、塗布対象物内に第２塗布液がＭ個（Ｍ≧１の自然数）供給される。第２塗布液を供給する工程においては、Ｎ個の第１塗布液のそれぞれの中心から外縁までの寸法の最大値である第１寸法をｒ
１ｎ
（１≦ｎ≦Ｎの自然数）、Ｍ個の第２塗布液のそれぞれの中心から外縁までの寸法の最大値である第２寸法をｒ
２ｍ
（１≦ｍ≦Ｍの自然数）とし、Ｎ個の中から選択された任意の第１寸法がｒ
１ｎ
の第１塗布液の中心と、Ｍ個の中から選択された任意の第２寸法がｒ
２ｍ
の第２塗布液の中心との距離をＤ
ｎ，ｍ
とすれば、任意の第１塗布液と任意の第２塗布液との間で
（数１）Ｄ
ｎ，ｍ
＜ｒ
２ｍ
－ｒ
１ｎ
・・・（１）
および
（数２）Ｄ
ｎ，ｍ
＞ｒ
２ｍ
＋ｒ
１ｎ
・・・（２）
のいずれかが成立するように供給される。
【発明の効果】
【０００８】
本開示によれば、寸法および中心位置を考慮しつつ塗布液を高い位置精度で供給することにより、小スケールかつハイスループットで作用を再現性高く高精度に評価可能な細胞組織の製造方法を提供できる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
実施の形態１に従った塗布装置の模式図である。
図１に示した塗布装置の塗布機構を示す模式図である。
試料塗布セットの概略斜視図である。
実施の形態１の細胞組織の製造方法の各工程において供給される各塗布液の中心および寸法を示す概略図である。
２個の第１塗布液の配置関係を示す概略図である。
第１塗布液と、これを覆う第１仮想曲線との中心、寸法、位置の関係を示す概略図である。
第１仮想曲線と第２塗布液との関係を示す概略図である。
第１塗布液と第２塗布液との位置関係の第１例を示す概略図である。
第１塗布液と第２塗布液との位置関係の第２例を示す概略図である。
２個の第２塗布液の配置関係を示す概略図である。
第２塗布液と、これを覆う第２仮想曲線との中心、寸法、位置の関係を示す概略図である。
第２仮想曲線とウェルとの関係を示す概略図である。
実施例１における位相差顕微鏡像である。
実施例２における位相差顕微鏡像である。
実施例３において供給された各塗布液の位置および寸法を示す概略平面図である。
図１５と同一の各塗布液の中心位置および中心間の距離を示す概略平面図である。
実施例３における位相差顕微鏡像である。
実施例４における位相差顕微鏡像である。
第２塗布液のウェル内における塗布位置を変化させたときの、塗布されると想定される位置と、実際に塗布された位置とを示す模式図および写真である。
実施の形態２における第１塗布液が塗布される前の態様を示す概略図である。
実施の形態２における第１塗布液の組成を示す概略図である。
実施の形態２における第１塗布液が塗布される工程を示す概略図である。
実施の形態２における第１塗布液が塗布された後の態様を示す概略図である。
実施の形態２における第２塗布液が供給される工程を示す概略図である。
図２４の工程がなされた後のウェル内の態様を示す概略図である。
実施の形態２における培地が供給される工程を示す概略図である。
培養前の第１塗布液内の細胞の態様を示す概略図である。
培養後の第１塗布液内の細胞の態様を示す概略図である。
ウェル内に塗布液が供給された直後の位相差顕微鏡像（左）、および６日間培養後の位相差顕微鏡像（右）である。
塗布組織の実験におけるＣａ
２＋
トランジエント波形を示すグラフである。
塗布組織および２Ｄ組織のそれぞれにイソプロテレノールを添加した際のＢＰＭの変化を示すグラフである。
塗布組織および２Ｄ組織のそれぞれにイソプロテレノールを添加した際のＡＭＰの変化を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
（はじめに）
はじめに、実施の形態１の細胞組織の製造方法の特徴について簡単に説明する。図８を参照して、（Ａ）のように、供給される第１寸法ｒ
１ｎ
の第１塗布液Ａの中心と、それを覆う第２寸法ｒ
２ｍ
の第２塗布液Ｂの中心との距離Ｄ
ｎ，ｍ
は、
（数１）Ｄ
ｎ，ｍ
＜ｒ
２ｍ
－ｒ
１ｎ
・・・（１）
である。あるいは（Ｂ）のように、
（数２）Ｄ
ｎ，ｍ
＞ｒ
２ｍ
＋ｒ
１ｎ
・・・（２）
である。以下、実施の形態１の細胞組織の製造方法について、図に基づいて説明する。
（【００１１】以降は省略されています）

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