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公開番号2024037978
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-03-19
出願番号2023214501,2020500479
出願日2023-12-20,2019-02-12
発明の名称認知症の検出のためのキット又はデバイス及び方法
出願人東レ株式会社,国立研究開発法人国立長寿医療研究センター
代理人弁理士法人平木国際特許事務所
主分類C12Q 1/6883 20180101AFI20240312BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】認知症と認知機能正常(非認知症)を判別できる一以上の認知症病型の診断が可能な認知症マーカーを提供し、当該マーカーに特異的に結合可能な核酸を用いて認知症であるか否かを客観的かつ効果的に検出できるキット又はデバイス、及び、検出方法を提供する。
【解決手段】一実施形態において、本発明は、被験体の検体中のmiRNA又はその相補鎖と特異的に結合可能な核酸を含む、認知症検出用キット又はデバイス、及び、該miRNAをin vitroで測定することを含む、認知症を検出する方法を提供する。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
検出用核酸を含む、認知症の検出用キットであって、
前記検出用核酸が、認知症マーカーであるｍｉＲ－６０８８のポリヌクレオチドと特異的に結合可能な核酸プローブ及び／又は該ポリヌクレオチドを特異的に認識し増幅するためのプライマーである、キット。
続きを表示（約 11,000 文字）【請求項２】
前記検出用核酸が、
下記の（ａ）～（ｄ）からなる群から選択されるポリヌクレオチド：
（ａ）配列番号２６で表される塩基配列もしくは当該塩基配列においてｕがｔである塩基配列からなるポリヌクレオチド、その塩基配列と９０％以上の％同一性を有する塩基配列からなるポリヌクレオチド、そのラベル化誘導体、修飾ヌクレオチドもしくはペプチド核酸（ＰＮＡ）、又はこれらのいずれかの１５以上の連続した塩基を含む部分断片、
（ｂ）配列番号２６で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド、
（ｃ）配列番号２６で表される塩基配列もしくは当該塩基配列においてｕがｔである塩基配列に相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチド、その塩基配列と９０％以上の％同一性を有する塩基配列からなるポリヌクレオチド、そのラベル化誘導体、修飾ヌクレオチドもしくはペプチド核酸（ＰＮＡ）、又はこれらのいずれかの１５以上の連続した塩基を含む部分断片、及び
（ｄ）配列番号２６で表される塩基配列もしくは当該塩基配列においてｕがｔである塩基配列に相補的な塩基配列を含むポリヌクレオチド；
である、請求項１に記載のキット。
【請求項３】
別の認知症マーカーである、ｍｉＲ－４２７４、ｍｉＲ－４２７２、ｍｉＲ－４７２８－５ｐ、ｍｉＲ－４４４３、ｍｉＲ－４５０６、ｍｉＲ－６７７３－５ｐ、ｍｉＲ－４６６２ａ－５ｐ、ｍｉＲ－３１８４－３ｐ、ｍｉＲ－４２８１、ｍｉＲ－３２０ｄ、ｍｉＲ－６７２９－３ｐ、ｍｉＲ－５１９２、ｍｉＲ－６８５３－５ｐ、ｍｉＲ－１２３４－３ｐ、ｍｉＲ－１２３３－３ｐ、ｍｉＲ－４５３９、ｍｉＲ－３９１４、ｍｉＲ－４７３８－５ｐ、ｍｉＲ－５４８ａｕ－３ｐ、ｍｉＲ－１５３９、ｍｉＲ－４７２０－３ｐ、ｍｉＲ－３６５ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－４４８６、ｍｉＲ－１２２７－５ｐ、ｍｉＲ－４６６７－５ｐ、ｍｉＲ－６８２０－５ｐ、ｍｉＲ－４５０５、ｍｉＲ－５４８ｑ、ｍｉＲ－４６５８、ｍｉＲ－４５０ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１２６０ｂ、ｍｉＲ－３６７７－５ｐ、ｍｉＲ－６７７７－３ｐ、ｍｉＲ－６８２６－３ｐ、ｍｉＲ－６８３２－３ｐ、ｍｉＲ－４７２５－３ｐ、ｍｉＲ－７１６１－３ｐ、ｍｉＲ－２２７７－５ｐ、ｍｉＲ－７１１０－３ｐ、ｍｉＲ－４３１２、ｍｉＲ－４４６１、ｍｉＲ－６７６６－５ｐ、ｍｉＲ－１２６６－３ｐ、ｍｉＲ－６７２９－５ｐ、ｍｉＲ－５２６ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－５１９ｅ－５ｐ、ｍｉＲ－５１２－５ｐ、ｍｉＲ－５０８８－５ｐ、ｍｉＲ－１９０９－３ｐ、ｍｉＲ－６５１１ａ－５ｐ、ｍｉＲ－４７３４、ｍｉＲ－９３６、ｍｉＲ－１２４９－３ｐ、ｍｉＲ－６７７７－５ｐ、ｍｉＲ－４４８７、ｍｉＲ－３１５５ａ、ｍｉＲ－５６３、ｍｉＲ－４７４１、ｍｉＲ－６７８８－５ｐ、ｍｉＲ－４４３３ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３２３ａ－５ｐ、ｍｉＲ－６８１１－５ｐ、ｍｉＲ－６７２１－５ｐ、ｍｉＲ－５００４－５ｐ、ｍｉＲ－６５０９－３ｐ、ｍｉＲ－６４８、ｍｉＲ－３９１７、ｍｉＲ－６０８７、ｍｉＲ－１４７０、ｍｉＲ－５８６、ｍｉＲ－３１５０ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１０５－３ｐ、ｍｉＲ－７９７３、ｍｉＲ－１９１４－５ｐ、ｍｉＲ－４７４９－３ｐ、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１２８９、ｍｉＲ－４４３３ａ－５ｐ、ｍｉＲ－３６６６、ｍｉＲ－３１８６－３ｐ、ｍｉＲ－４７２５－５ｐ、ｍｉＲ－４４８８、ｍｉＲ－４４７４－３ｐ、ｍｉＲ－６７３１－３ｐ、ｍｉＲ－４６４０－３ｐ、ｍｉＲ－２０２－５ｐ、ｍｉＲ－６８１６－５ｐ、ｍｉＲ－６３８、ｍｉＲ－６８２１－５ｐ、ｍｉＲ－１２４７－３ｐ、ｍｉＲ－６７６５－５ｐ、ｍｉＲ－６８００－５ｐ、ｍｉＲ－３９２８－３ｐ、ｍｉＲ－３９４０－５ｐ、ｍｉＲ－３９６０、ｍｉＲ－６７７５－５ｐ、ｍｉＲ－３１７８、ｍｉＲ－１２０２、ｍｉＲ－６７９０－５ｐ、ｍｉＲ－４７３１－３ｐ、ｍｉＲ－２６８１－３ｐ、ｍｉＲ－６７５８－５ｐ、ｍｉＲ－８０７２、ｍｉＲ－５１８ｄ－３ｐ、ｍｉＲ－３６０６－３ｐ、ｍｉＲ－４８００－５ｐ、ｍｉＲ－１２９２－３ｐ、ｍｉＲ－６７８４－３ｐ、ｍｉＲ－４４５０、ｍｉＲ－６１３２、ｍｉＲ－４７１６－５ｐ、ｍｉＲ－６８６０、ｍｉＲ－１２６８ｂ、ｍｉＲ－３７８ｄ、ｍｉＲ－４７０１－５ｐ、ｍｉＲ－４３２９、ｍｉＲ－１８５－３ｐ、ｍｉＲ－５５２－３ｐ、ｍｉＲ－１２７３ｇ－５ｐ、ｍｉＲ－６７６９ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－５２０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４５２４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－４２９１、ｍｉＲ－６７３４－３ｐ、ｍｉＲ－１４３－５ｐ、ｍｉＲ－９３９－３ｐ、ｍｉＲ－６８８９－３ｐ、ｍｉＲ－６８４２－３ｐ、ｍｉＲ－４５１１、ｍｉＲ－４３１８、ｍｉＲ－４６５３－５ｐ、ｍｉＲ－６８６７－３ｐ、ｍｉＲ－１３３ｂ、ｍｉＲ－３１９６、ｍｉＲ－１９３ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３１６２－３ｐ、ｍｉＲ－６８１９－３ｐ、ｍｉＲ－１９０８－３ｐ、ｍｉＲ－６７８６－５ｐ、ｍｉＲ－３６４８、ｍｉＲ－４５１３、ｍｉＲ－３６５２、ｍｉＲ－４６４０－５ｐ、ｍｉＲ－６８７１－５ｐ、ｍｉＲ－７８４５－５ｐ、ｍｉＲ－３１３８、ｍｉＲ－６８８４－５ｐ、ｍｉＲ－４６５３－３ｐ、ｍｉＲ－６３６、ｍｉＲ－４６５２－３ｐ、ｍｉＲ－６８２３－５ｐ、ｍｉＲ－４５０２、ｍｉＲ－７１１３－５ｐ、ｍｉＲ－８０８７、ｍｉＲ－７１５４－３ｐ、ｍｉＲ－５１８９－５ｐ、ｍｉＲ－１２５３、ｍｉＲ－５１８ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－７１５１－５ｐ、ｍｉＲ－３６１４－３ｐ、ｍｉＲ－４７２７－５ｐ、ｍｉＲ－３６８２－５ｐ、ｍｉＲ－５０９０、ｍｉＲ－３３７－３ｐ、ｍｉＲ－４８８－５ｐ、ｍｉＲ－１００－５ｐ、ｍｉＲ－４５２０－３ｐ、ｍｉＲ－３７３－３ｐ、ｍｉＲ－６４９９－５ｐ、ｍｉＲ－３９０９、ｍｉＲ－３２－５ｐ、ｍｉＲ－３０２ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４６８６、ｍｉＲ－４６５９ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４２８７、ｍｉＲ－１３０１－５ｐ、ｍｉＲ－５９３－３ｐ、ｍｉＲ－５１７ａ－３ｐ、ｍｉＲ－５１７ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１４２－３ｐ、ｍｉＲ－１１８５－２－３ｐ、ｍｉＲ－６０２、ｍｉＲ－５２７、ｍｉＲ－５１８ａ－５ｐ、ｍｉＲ－４６８２、ｍｉＲ－２８－５ｐ、ｍｉＲ－４２５２、ｍｉＲ－４５２－５ｐ、ｍｉＲ－５２５－５ｐ、ｍｉＲ－３６２２ａ－３ｐ、ｍｉＲ－６８１３－３ｐ、ｍｉＲ－４７６９－３ｐ、ｍｉＲ－５６９８、ｍｉＲ－１９１５－３ｐ、ｍｉＲ－１３４３－５ｐ、ｍｉＲ－６８６１－５ｐ、ｍｉＲ－６７８１－５ｐ、ｍｉＲ－４５０８、ｍｉＲ－６７４３－５ｐ、ｍｉＲ－６７２６－５ｐ、ｍｉＲ－４５２５、ｍｉＲ－４６５１、ｍｉＲ－６８１３－５ｐ、ｍｉＲ－５７８７、ｍｉＲ－１２９０、ｍｉＲ－６０７５、ｍｉＲ－４７５８－５ｐ、ｍｉＲ－４６９０－５ｐ、ｍｉＲ－７６２、ｍｉＲ－３７１ａ－５ｐ、ｍｉＲ－６７６５－３ｐ、ｍｉＲ－６７８４－５ｐ、ｍｉＲ－６７７８－５ｐ、ｍｉＲ－６８７５－５ｐ、ｍｉＲ－４５３４、ｍｉＲ－４７２１、ｍｉＲ－６７５６－５ｐ、ｍｉＲ－６１５－５ｐ、ｍｉＲ－６７２７－５ｐ、ｍｉＲ－６８８７－５ｐ、ｍｉＲ－８０６３、ｍｉＲ－６８８０－５ｐ、ｍｉＲ－６８０５－３ｐ、ｍｉＲ－４７２６－５ｐ、ｍｉＲ－４７１０、ｍｉＲ－７１１１－５ｐ、ｍｉＲ－３６１９－３ｐ、ｍｉＲ－６７９５－５ｐ、ｍｉＲ－１２５４、ｍｉＲ－１２３３－５ｐ、ｍｉＲ－６８３６－３ｐ、ｍｉＲ－６７６９ａ－５ｐ、ｍｉＲ－４５３２、ｍｉＲ－３６５ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１２３１、ｍｉＲ－１２２８－５ｐ、ｍｉＲ－４４３０、ｍｉＲ－２９６－３ｐ、ｍｉＲ－１２３７－５ｐ、ｍｉＲ－４４６６、ｍｉＲ－６７８９－５ｐ、ｍｉＲ－４６３２－５ｐ、ｍｉＲ－４７４５－５ｐ、ｍｉＲ－４６６５－５ｐ、ｍｉＲ－６８０７－５ｐ、ｍｉＲ－７１１４－５ｐ、ｍｉＲ－５１６ａ－５ｐ、ｍｉＲ－７６９－３ｐ、ｍｉＲ－３６９２－５ｐ、ｍｉＲ－３９４５、ｍｉＲ－４４３３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４４８５－３ｐ、ｍｉＲ－６８３１－５ｐ、ｍｉＲ－５１９ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－５５１ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１３４３－３ｐ、ｍｉＲ－４２８６、ｍｉＲ－４６３４、ｍｉＲ－４７３３－３ｐ、及びｍｉＲ－６０８６からなる群から選択される１以上のポリヌクレオチド（ただし、ｍｉＲ－４４４３、ｍｉＲ－４７２８－５ｐ及びｍｉＲ－４７３４を含むポリヌクレオチドの組み合わせを除く）と特異的に結合可能な核酸プローブ及び／又は該ポリヌクレオチド、を特異的に認識し増幅するためのプライマーを、さらなる検出用核酸として含む、請求項１又は２に記載のキット。
【請求項４】
前記さらなる検出用核酸が、下記の（ａ’）～（ｄ’）からなる群から選択されるポリヌクレオチド：
（ａ’）配列番号１～２５、２７～２１０、３７４、１３１５～１３５０、及び１４３５～１４４８のいずれかで表される塩基配列もしくは当該塩基配列においてｕがｔである塩基配列からなるポリヌクレオチド、その塩基配列と９０％以上の％同一性を有する塩基配列からなるポリヌクレオチド、そのラベル化誘導体、修飾ヌクレオチドもしくはペプチド核酸（ＰＮＡ）、又はこれらのいずれかの１５以上の連続した塩基を含む部分断片、
（ｂ’）配列番号１～２５、２７～２１０、３７４、１３１５～１３５０、及び１４３５～１４４８のいずれかで表される塩基配列を含むポリヌクレオチド、
（ｃ’）配列番号１～２５、２７～２１０、３７４、１３１５～１３５０、及び１４３５～１４４８のいずれかで表される塩基配列もしくは当該塩基配列においてｕがｔである塩基配列に相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチド、その塩基配列と９０％以上の％同一性を有する塩基配列からなるポリヌクレオチド、そのラベル化誘導体、修飾ヌクレオチドもしくはペプチド核酸（ＰＮＡ）、又はこれらのいずれかの１５以上の連続した塩基を含む部分断片、及び
（ｄ’）配列番号１～２５、２７～２１０、３７４、１３１５～１３５０、及び１４３５～１４４８のいずれかで表される塩基配列もしくは当該塩基配列においてｕがｔである塩基配列に相補的な塩基配列を含むポリヌクレオチド、
である、請求項３に記載のキット。
【請求項５】
前記キットが、別の認知症マーカーである、ｍｉＲ－１２２５－３ｐ、ｍｉＲ－３１８４－５ｐ、ｍｉＲ－６６５、ｍｉＲ－２１１－５ｐ、ｍｉＲ－１２４７－５ｐ、ｍｉＲ－３６５６、ｍｉＲ－１４９－５ｐ、ｍｉＲ－７４４－５ｐ、ｍｉＲ－３４５－５ｐ、ｍｉＲ－１５０－５ｐ、ｍｉＲ－１９１－３ｐ、ｍｉＲ－６５１－５ｐ、ｍｉＲ－３４ａ－５ｐ、ｍｉＲ－４０９－５ｐ、ｍｉＲ－３６９－５ｐ、ｍｉＲ－１９１５－５ｐ、ｍｉＲ－２０４－５ｐ、ｍｉＲ－１３７、ｍｉＲ－３８２－５ｐ、ｍｉＲ－５１７－５ｐ、ｍｉＲ－５３２－５ｐ、ｍｉＲ－２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２３７－３ｐ、ｍｉＲ－１２２４－３ｐ、ｍｉＲ－６２５－３ｐ、ｍｉＲ－３２８－３ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－２０２－３ｐ、ｍｉＲ－４７８１－５ｐ、ｍｉＲ－７１８、ｍｉＲ－３４２－３ｐ、ｍｉＲ－２６ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１４０－３ｐ、ｍｉＲ－２００ａ－３ｐ、ｍｉＲ－３７８ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４８４、ｍｉＲ－２９６－５ｐ、ｍｉＲ－２０５－５ｐ、ｍｉＲ－４３１－５ｐ、ｍｉＲ－１５０－３ｐ、ｍｉＲ－４２３－５ｐ、ｍｉＲ－５７５、ｍｉＲ－６７１－５ｐ、ｍｉＲ－９３９－５ｐ、ｍｉＲ－３６６５、ｍｉＲ－３０ｄ－５ｐ、ｍｉＲ－３０ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－９２ａ－３ｐ、ｍｉＲ－３７１ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－４８６－５ｐ、ｍｉＲ－１４７１、ｍｉＲ－１５３８、ｍｉＲ－４４９ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１９７６、ｍｉＲ－４２６８、ｍｉＲ－４２７９、ｍｉＲ－３６２０－３ｐ、ｍｉＲ－３９４４－３ｐ、ｍｉＲ－３１５６－３ｐ、ｍｉＲ－３１８７－５ｐ、ｍｉＲ－４６８５－３ｐ、ｍｉＲ－４６９５－３ｐ、ｍｉＲ－４６９７－３ｐ、ｍｉＲ－４７１３－５ｐ、ｍｉＲ－４７２３－３ｐ、ｍｉＲ－３７１ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３１５１－３ｐ、ｍｉＲ－３１９２－３ｐ、ｍｉＲ－６７２８－３ｐ、ｍｉＲ－６７３６－３ｐ、ｍｉＲ－６７４０－３ｐ、ｍｉＲ－６７４１－３ｐ、ｍｉＲ－６７４３－３ｐ、ｍｉＲ－６７４７－３ｐ、ｍｉＲ－６７５０－３ｐ、ｍｉＲ－６７５４－３ｐ、ｍｉＲ－６７５９－３ｐ、ｍｉＲ－６７６１－３ｐ、ｍｉＲ－６７６２－３ｐ、ｍｉＲ－６７６９ａ－３ｐ、ｍｉＲ－６７７６－３ｐ、ｍｉＲ－６７７８－３ｐ、ｍｉＲ－６７７９－３ｐ、ｍｉＲ－６７８６－３ｐ、ｍｉＲ－６７８７－３ｐ、ｍｉＲ－６７９２－３ｐ、ｍｉＲ－６７９４－３ｐ、ｍｉＲ－６８０１－３ｐ、ｍｉＲ－６８０２－３ｐ、ｍｉＲ－６８０３－３ｐ、ｍｉＲ－６８０４－３ｐ、ｍｉＲ－６８１０－５ｐ、ｍｉＲ－６８２３－３ｐ、ｍｉＲ－６８２５－３ｐ、ｍｉＲ－６８２９－３ｐ、ｍｉＲ－６８３３－３ｐ、ｍｉＲ－６８３４－３ｐ、ｍｉＲ－６７８０ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－６８４５－３ｐ、ｍｉＲ－６８６２－３ｐ、ｍｉＲ－６８６５－３ｐ、ｍｉＲ－６８７０－３ｐ、ｍｉＲ－６８７５－３ｐ、ｍｉＲ－６８７７－３ｐ、ｍｉＲ－６８７９－３ｐ、ｍｉＲ－６８８２－３ｐ、ｍｉＲ－６８８５－３ｐ、ｍｉＲ－６８８６－３ｐ、ｍｉＲ－６８８７－３ｐ、ｍｉＲ－６８９０－３ｐ、ｍｉＲ－６８９３－３ｐ、ｍｉＲ－６８９４－３ｐ、ｍｉＲ－７１０６－３ｐ、ｍｉＲ－７１０９－３ｐ、ｍｉＲ－７１１４－３ｐ、ｍｉＲ－７１５５－５ｐ、ｍｉＲ－７１６０－５ｐ、ｍｉＲ－６１５－３ｐ、ｍｉＲ－９２０、ｍｉＲ－１８２５、ｍｉＲ－６７５－３ｐ、ｍｉＲ－１９１０－５ｐ、ｍｉＲ－２２７８、ｍｉＲ－２６８２－３ｐ、ｍｉＲ－３１２２、ｍｉＲ－３１５１－５ｐ、ｍｉＲ－３１７５、ｍｉＲ－４３２３、ｍｉＲ－４３２６、ｍｉＲ－４２８４、ｍｉＲ－３６０５－３ｐ、ｍｉＲ－３６２２ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３６４６、ｍｉＲ－３１５８－５ｐ、ｍｉＲ－４７２２－３ｐ、ｍｉＲ－４７２８－３ｐ、ｍｉＲ－４７４７－３ｐ、ｍｉＲ－４４３６ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－５１９６－３ｐ、ｍｉＲ－５５８９－５ｐ、ｍｉＲ－３４５－３ｐ、ｍｉＲ－６４２ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－６７１６－３ｐ、ｍｉＲ－６５１１ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２０８ａ－５ｐ、ｍｉＲ－６７２６－３ｐ、ｍｉＲ－６７４４－５ｐ、ｍｉＲ－６７８２－３ｐ、ｍｉＲ－６７８９－３ｐ、ｍｉＲ－６７９７－３ｐ、ｍｉＲ－６８００－３ｐ、ｍｉＲ－６８０６－５ｐ、ｍｉＲ－６８２４－３ｐ、ｍｉＲ－６８３７－５ｐ、ｍｉＲ－６８４６－３ｐ、ｍｉＲ－６８５８－３ｐ、ｍｉＲ－６８５９－３ｐ、ｍｉＲ－６８６１－３ｐ、ｍｉＲ－６８８０－３ｐ、ｍｉＲ－７１１１－３ｐ、ｍｉＲ－７１５２－５ｐ、ｍｉＲ－６４２ａ－５ｐ、ｍｉＲ－６５７、ｍｉＲ－１２３６－３ｐ、ｍｉＲ－７６４、ｍｉＲ－４３１４、ｍｉＲ－３６７５－３ｐ、ｍｉＲ－５７０３、ｍｉＲ－３１９１－５ｐ、ｍｉＲ－６５１１ａ－３ｐ、ｍｉＲ－６８０９－３ｐ、ｍｉＲ－６８１５－５ｐ、ｍｉＲ－６８５７－３ｐ、ｍｉＲ－６８７８－３ｐ、ｍｉＲ－７６６－３ｐ、ｍｉＲ－１２２９－３ｐ、ｍｉＲ－１３０６－５ｐ、ｍｉＲ－２１０－５ｐ、ｍｉＲ－１９８、ｍｉＲ－４８５－３ｐ、ｍｉＲ－６６８－３ｐ、ｍｉＲ－５３２－３ｐ、ｍｉＲ－８７７－３ｐ、ｍｉＲ－１２３８－３ｐ、ｍｉＲ－３１３０－５ｐ、ｍｉＲ－４２９８、ｍｉＲ－４２９０、ｍｉＲ－３９４３、ｍｉＲ－３４６、及びｍｉＲ－７６７－３ｐからなる群から選択される１以上のポリヌクレオチドと特異的に結合可能な核酸プローブ及び／又は該ポリヌクレオチドを特異的に認識し増幅するためのプライマーを、追加の検出用核酸としてさらに含む、請求項１～４のいずれか１項に記載のキット。
【請求項６】
前記追加の検出用核酸が、下記の（ｆ）～（ｉ）からなる群から選択されるポリヌクレオチド：
（ｆ）配列番号２１１～３７３、３７５～３９０、１３５１～１３５６及び１４４９～１４５３のいずれかで表される塩基配列もしくは当該塩基配列においてｕがｔである塩基配列からなるポリヌクレオチド、その塩基配列と９０％以上の％同一性を有する塩基配列からなるポリヌクレオチド、そのラベル化誘導体、修飾ヌクレオチドもしくはペプチド核酸（ＰＮＡ）、又はこれらのいずれかの１５以上の連続した塩基を含む部分断片、
（ｇ）配列番号２１１～３７３、３７５～３９０、１３５１～１３５６及び１４４９～１４５３のいずれかで表される塩基配列を含むポリヌクレオチド、
（ｈ）配列番号２１１～３７３、３７５～３９０、１３５１～１３５６及び１４４９～１４５３のいずれかで表される塩基配列もしくは当該塩基配列においてｕがｔである塩基配列に相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチド、その塩基配列と９０％以上の％同一性を有する塩基配列からなるポリヌクレオチド、そのラベル化誘導体、修飾ヌクレオチドもしくはペプチド核酸（ＰＮＡ）、又はこれらのいずれかの１５以上の連続した塩基を含む部分断片、及び
（ｉ）配列番号２１１～３７３、３７５～３９０、１３５１～１３５６及び１４４９～１４５３のいずれかで表される塩基配列もしくは当該塩基配列においてｕがｔである塩基配列に相補的な塩基配列を含むポリヌクレオチド、
である、請求項５に記載のキット。
【請求項７】
検出用核酸を含む、認知症の検出用デバイスであって、
前記検出用核酸が、認知症マーカーであるｍｉＲ－６０８８のポリヌクレオチドと特異的に結合可能な核酸プローブ及び／又は該ポリヌクレオチドを特異的に認識し増幅するためのプライマーである、デバイス。
【請求項８】
前記検出用核酸が、
下記の（ａ）～（ｄ）からなる群から選択されるポリヌクレオチド：
（ａ）配列番号２６で表される塩基配列もしくは当該塩基配列においてｕがｔである塩基配列からなるポリヌクレオチド、その塩基配列と９０％以上の％同一性を有する塩基配列からなるポリヌクレオチド、そのラベル化誘導体、修飾ヌクレオチドもしくはペプチド核酸（ＰＮＡ）、又はこれらのいずれかの１５以上の連続した塩基を含む部分断片、
（ｂ）配列番号２６で表される塩基配列を含むポリヌクレオチド、
（ｃ）配列番号２６で表される塩基配列もしくは当該塩基配列においてｕがｔである塩基配列に相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチド、その塩基配列と９０％以上の％同一性を有する塩基配列からなるポリヌクレオチド、そのラベル化誘導体、修飾ヌクレオチドもしくはペプチド核酸（ＰＮＡ）、又はこれらのいずれかの１５以上の連続した塩基を含む部分断片、及び
（ｄ）配列番号２６で表される塩基配列もしくは当該塩基配列においてｕがｔである塩基配列に相補的な塩基配列を含むポリヌクレオチド；
である、請求項７に記載のデバイス。
【請求項９】
別の認知症マーカーである、ｍｉＲ－４２７４、ｍｉＲ－４２７２、ｍｉＲ－４７２８－５ｐ、ｍｉＲ－４４４３、ｍｉＲ－４５０６、ｍｉＲ－６７７３－５ｐ、ｍｉＲ－４６６２ａ－５ｐ、ｍｉＲ－３１８４－３ｐ、ｍｉＲ－４２８１、ｍｉＲ－３２０ｄ、ｍｉＲ－６７２９－３ｐ、ｍｉＲ－５１９２、ｍｉＲ－６８５３－５ｐ、ｍｉＲ－１２３４－３ｐ、ｍｉＲ－１２３３－３ｐ、ｍｉＲ－４５３９、ｍｉＲ－３９１４、ｍｉＲ－４７３８－５ｐ、ｍｉＲ－５４８ａｕ－３ｐ、ｍｉＲ－１５３９、ｍｉＲ－４７２０－３ｐ、ｍｉＲ－３６５ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－４４８６、ｍｉＲ－１２２７－５ｐ、ｍｉＲ－４６６７－５ｐ、ｍｉＲ－６８２０－５ｐ、ｍｉＲ－４５０５、ｍｉＲ－５４８ｑ、ｍｉＲ－４６５８、ｍｉＲ－４５０ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１２６０ｂ、ｍｉＲ－３６７７－５ｐ、ｍｉＲ－６７７７－３ｐ、ｍｉＲ－６８２６－３ｐ、ｍｉＲ－６８３２－３ｐ、ｍｉＲ－４７２５－３ｐ、ｍｉＲ－７１６１－３ｐ、ｍｉＲ－２２７７－５ｐ、ｍｉＲ－７１１０－３ｐ、ｍｉＲ－４３１２、ｍｉＲ－４４６１、ｍｉＲ－６７６６－５ｐ、ｍｉＲ－１２６６－３ｐ、ｍｉＲ－６７２９－５ｐ、ｍｉＲ－５２６ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－５１９ｅ－５ｐ、ｍｉＲ－５１２－５ｐ、ｍｉＲ－５０８８－５ｐ、ｍｉＲ－１９０９－３ｐ、ｍｉＲ－６５１１ａ－５ｐ、ｍｉＲ－４７３４、ｍｉＲ－９３６、ｍｉＲ－１２４９－３ｐ、ｍｉＲ－６７７７－５ｐ、ｍｉＲ－４４８７、ｍｉＲ－３１５５ａ、ｍｉＲ－５６３、ｍｉＲ－４７４１、ｍｉＲ－６７８８－５ｐ、ｍｉＲ－４４３３ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３２３ａ－５ｐ、ｍｉＲ－６８１１－５ｐ、ｍｉＲ－６７２１－５ｐ、ｍｉＲ－５００４－５ｐ、ｍｉＲ－６５０９－３ｐ、ｍｉＲ－６４８、ｍｉＲ－３９１７、ｍｉＲ－６０８７、ｍｉＲ－１４７０、ｍｉＲ－５８６、ｍｉＲ－３１５０ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１０５－３ｐ、ｍｉＲ－７９７３、ｍｉＲ－１９１４－５ｐ、ｍｉＲ－４７４９－３ｐ、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１２８９、ｍｉＲ－４４３３ａ－５ｐ、ｍｉＲ－３６６６、ｍｉＲ－３１８６－３ｐ、ｍｉＲ－４７２５－５ｐ、ｍｉＲ－４４８８、ｍｉＲ－４４７４－３ｐ、ｍｉＲ－６７３１－３ｐ、ｍｉＲ－４６４０－３ｐ、ｍｉＲ－２０２－５ｐ、ｍｉＲ－６８１６－５ｐ、ｍｉＲ－６３８、ｍｉＲ－６８２１－５ｐ、ｍｉＲ－１２４７－３ｐ、ｍｉＲ－６７６５－５ｐ、ｍｉＲ－６８００－５ｐ、ｍｉＲ－３９２８－３ｐ、ｍｉＲ－３９４０－５ｐ、ｍｉＲ－３９６０、ｍｉＲ－６７７５－５ｐ、ｍｉＲ－３１７８、ｍｉＲ－１２０２、ｍｉＲ－６７９０－５ｐ、ｍｉＲ－４７３１－３ｐ、ｍｉＲ－２６８１－３ｐ、ｍｉＲ－６７５８－５ｐ、ｍｉＲ－８０７２、ｍｉＲ－５１８ｄ－３ｐ、ｍｉＲ－３６０６－３ｐ、ｍｉＲ－４８００－５ｐ、ｍｉＲ－１２９２－３ｐ、ｍｉＲ－６７８４－３ｐ、ｍｉＲ－４４５０、ｍｉＲ－６１３２、ｍｉＲ－４７１６－５ｐ、ｍｉＲ－６８６０、ｍｉＲ－１２６８ｂ、ｍｉＲ－３７８ｄ、ｍｉＲ－４７０１－５ｐ、ｍｉＲ－４３２９、ｍｉＲ－１８５－３ｐ、ｍｉＲ－５５２－３ｐ、ｍｉＲ－１２７３ｇ－５ｐ、ｍｉＲ－６７６９ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－５２０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４５２４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－４２９１、ｍｉＲ－６７３４－３ｐ、ｍｉＲ－１４３－５ｐ、ｍｉＲ－９３９－３ｐ、ｍｉＲ－６８８９－３ｐ、ｍｉＲ－６８４２－３ｐ、ｍｉＲ－４５１１、ｍｉＲ－４３１８、ｍｉＲ－４６５３－５ｐ、ｍｉＲ－６８６７－３ｐ、ｍｉＲ－１３３ｂ、ｍｉＲ－３１９６、ｍｉＲ－１９３ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３１６２－３ｐ、ｍｉＲ－６８１９－３ｐ、ｍｉＲ－１９０８－３ｐ、ｍｉＲ－６７８６－５ｐ、ｍｉＲ－３６４８、ｍｉＲ－４５１３、ｍｉＲ－３６５２、ｍｉＲ－４６４０－５ｐ、ｍｉＲ－６８７１－５ｐ、ｍｉＲ－７８４５－５ｐ、ｍｉＲ－３１３８、ｍｉＲ－６８８４－５ｐ、ｍｉＲ－４６５３－３ｐ、ｍｉＲ－６３６、ｍｉＲ－４６５２－３ｐ、ｍｉＲ－６８２３－５ｐ、ｍｉＲ－４５０２、ｍｉＲ－７１１３－５ｐ、ｍｉＲ－８０８７、ｍｉＲ－７１５４－３ｐ、ｍｉＲ－５１８９－５ｐ、ｍｉＲ－１２５３、ｍｉＲ－５１８ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－７１５１－５ｐ、ｍｉＲ－３６１４－３ｐ、ｍｉＲ－４７２７－５ｐ、ｍｉＲ－３６８２－５ｐ、ｍｉＲ－５０９０、ｍｉＲ－３３７－３ｐ、ｍｉＲ－４８８－５ｐ、ｍｉＲ－１００－５ｐ、ｍｉＲ－４５２０－３ｐ、ｍｉＲ－３７３－３ｐ、ｍｉＲ－６４９９－５ｐ、ｍｉＲ－３９０９、ｍｉＲ－３２－５ｐ、ｍｉＲ－３０２ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４６８６、ｍｉＲ－４６５９ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４２８７、ｍｉＲ－１３０１－５ｐ、ｍｉＲ－５９３－３ｐ、ｍｉＲ－５１７ａ－３ｐ、ｍｉＲ－５１７ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１４２－３ｐ、ｍｉＲ－１１８５－２－３ｐ、ｍｉＲ－６０２、ｍｉＲ－５２７、ｍｉＲ－５１８ａ－５ｐ、ｍｉＲ－４６８２、ｍｉＲ－２８－５ｐ、ｍｉＲ－４２５２、ｍｉＲ－４５２－５ｐ、ｍｉＲ－５２５－５ｐ、ｍｉＲ－３６２２ａ－３ｐ、ｍｉＲ－６８１３－３ｐ、ｍｉＲ－４７６９－３ｐ、ｍｉＲ－５６９８、ｍｉＲ－１９１５－３ｐ、ｍｉＲ－１３４３－５ｐ、ｍｉＲ－６８６１－５ｐ、ｍｉＲ－６７８１－５ｐ、ｍｉＲ－４５０８、ｍｉＲ－６７４３－５ｐ、ｍｉＲ－６７２６－５ｐ、ｍｉＲ－４５２５、ｍｉＲ－４６５１、ｍｉＲ－６８１３－５ｐ、ｍｉＲ－５７８７、ｍｉＲ－１２９０、ｍｉＲ－６０７５、ｍｉＲ－４７５８－５ｐ、ｍｉＲ－４６９０－５ｐ、ｍｉＲ－７６２、ｍｉＲ－３７１ａ－５ｐ、ｍｉＲ－６７６５－３ｐ、ｍｉＲ－６７８４－５ｐ、ｍｉＲ－６７７８－５ｐ、ｍｉＲ－６８７５－５ｐ、ｍｉＲ－４５３４、ｍｉＲ－４７２１、ｍｉＲ－６７５６－５ｐ、ｍｉＲ－６１５－５ｐ、ｍｉＲ－６７２７－５ｐ、ｍｉＲ－６８８７－５ｐ、ｍｉＲ－８０６３、ｍｉＲ－６８８０－５ｐ、ｍｉＲ－６８０５－３ｐ、ｍｉＲ－４７２６－５ｐ、ｍｉＲ－４７１０、ｍｉＲ－７１１１－５ｐ、ｍｉＲ－３６１９－３ｐ、ｍｉＲ－６７９５－５ｐ、ｍｉＲ－１２５４、ｍｉＲ－１２３３－５ｐ、ｍｉＲ－６８３６－３ｐ、ｍｉＲ－６７６９ａ－５ｐ、ｍｉＲ－４５３２、ｍｉＲ－３６５ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１２３１、ｍｉＲ－１２２８－５ｐ、ｍｉＲ－４４３０、ｍｉＲ－２９６－３ｐ、ｍｉＲ－１２３７－５ｐ、ｍｉＲ－４４６６、ｍｉＲ－６７８９－５ｐ、ｍｉＲ－４６３２－５ｐ、ｍｉＲ－４７４５－５ｐ、ｍｉＲ－４６６５－５ｐ、ｍｉＲ－６８０７－５ｐ、ｍｉＲ－７１１４－５ｐ、ｍｉＲ－５１６ａ－５ｐ、ｍｉＲ－７６９－３ｐ、ｍｉＲ－３６９２－５ｐ、ｍｉＲ－３９４５、ｍｉＲ－４４３３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４４８５－３ｐ、ｍｉＲ－６８３１－５ｐ、ｍｉＲ－５１９ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－５５１ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１３４３－３ｐ、ｍｉＲ－４２８６、ｍｉＲ－４６３４、ｍｉＲ－４７３３－３ｐ、及びｍｉＲ－６０８６からなる群から選択される１以上のポリヌクレオチド（ただし、ｍｉＲ－４４４３、ｍｉＲ－４７２８－５ｐ及びｍｉＲ－４７３４を含むポリヌクレオチドの組み合わせを除く）と特異的に結合可能な核酸プローブ及び／又は該ポリヌクレオチドを特異的に認識し増幅するためのプライマーを、さらなる検出用核酸として含む、請求項７又は８に記載のデバイス。
【請求項１０】
前記さらなる検出用核酸が、下記の（ａ’）～（ｄ’）からなる群から選択されるポリヌクレオチド：
（ａ’）配列番号１～２５、２７～２１０、３７４、１３１５～１３５０、及び１４３５～１４４８のいずれかで表される塩基配列もしくは当該塩基配列においてｕがｔである塩基配列からなるポリヌクレオチド、その塩基配列と９０％以上の％同一性を有する塩基配列からなるポリヌクレオチド、そのラベル化誘導体、修飾ヌクレオチドもしくはペプチド核酸（ＰＮＡ）、又はこれらのいずれかの１５以上の連続した塩基を含む部分断片、
（ｂ’）配列番号１～２５、２７～２１０、３７４、１３１５～１３５０、及び１４３５～１４４８のいずれかで表される塩基配列を含むポリヌクレオチド、
（ｃ’）配列番号１～２５、２７～２１０、３７４、１３１５～１３５０、及び１４３５～１４４８のいずれかで表される塩基配列もしくは当該塩基配列においてｕがｔである塩基配列に相補的な塩基配列からなるポリヌクレオチド、その塩基配列と９０％以上の％同一性を有する塩基配列からなるポリヌクレオチド、そのラベル化誘導体、修飾ヌクレオチドもしくはペプチド核酸（ＰＮＡ）、又はこれらのいずれかの１５以上の連続した塩基を含む部分断片、及び
（ｄ’）配列番号１～２５、２７～２１０、３７４、１３１５～１３５０、及び１４３５～１４４８のいずれかで表される塩基配列もしくは当該塩基配列においてｕがｔである塩基配列に相補的な塩基配列を含むポリヌクレオチド、
である、請求項９に記載のデバイス。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、被験体において認知症の罹患の有無の検査のために使用される、特定のｍｉＲＮＡ又はその相補鎖と特異的に結合可能な核酸を含む認知症の検出用キット又はデバイス、及び当該ｍｉＲＮＡの発現量を測定することを含む認知症の検出方法に関する。
続きを表示（約 2,300 文字）【背景技術】
【０００２】
６５歳以上の高齢者の認知症患者数と有病率の将来推計で、日本における認知症患者数は、２０１２年では４６２万人（６５歳以上の高齢者の７人に１人（有病率１５.０％））であったが、２０２５年には約７００万人（６５歳以上の高齢者の５人に１人）になると見込まれている（内閣府Ｈ２８年版高齢者社会白書）。一方、認知症患者の医療や介護にかかるコストは２０１４年に１４兆５千億円（内訳：医療費１兆９千億円（入院約９７０３億円、外来約９４１２億円）、介護費６兆４千億円（在宅約３兆５２８１億円、施設約２兆９１６０億円）、インフォーマルケアコスト６兆２千億円）に上ったことが報告されている（厚生労働省研究班「認知症の社会的コスト推計」２０１５年５月）。世界的にも、２０３０年までに認知症患者数は７,４７０万人まで増加し、認知症医療コストは２４０兆円にも上ると試算されている（ＡＤＩ「ＷｏｒｌｄＡｌｚｈｅｉｍｅｒＲｅｐｏｒｔ２０１５」）。認知症は一般に進行性であり、脳神経細胞の不可逆的な変性を伴う。認知症治療薬のない現在、患者・介護者負担および社会的コストを軽減するためには、認知症を検査・診断し、進行を抑制するための早期医療介入を行うことが重要である。
【０００３】
現在、認知症の診断は、病歴、現症、身体所見、神経心理検査、血液検査、画像検査等の鑑別診断により行われている。
【０００４】
神経心理検査で認知症を検査する方法として、フォルスタインの「ミニメンタルステート検査」（ＭＭＳＥ）は国際的に最も広く用いられており、感度、特異度、簡便さ及びこれまでのデータ蓄積量の点からもっとも推奨されるスクリーニング検査である。ＭＭＳＥは、総得点３０点で、見当識、記銘力、注意・計算、言語機能、口頭命令動作、図形模写など複数の認知機能を簡便に評価することができ、一般に２３点以下の場合に認知症の疑いがあるとする判定が用いられている。しかし、教育歴や職歴によっては認知症であってもハイスコアを示すことがあり、このような問診法はあくまでスクリーニング目的で用いられ、確定診断に至ることはない。
【０００５】
画像検査で認知症を検査する方法として、ＣＴ、ＭＲＩ、ＰＥＴ／ＳＰＥＣＴ等の画像診断等の開発が進められている。しかし、画像診断には特殊な設備を必要とするため、実施できる医療機関が限られる。また、現状の画像診断技術では、認知症が発症する前段階と認知機能正常状態等との差を捉えることは難しいため、画像を見る医師によって判断が異なることがあり、客観性に欠けるという欠点も有する。
【０００６】
認知症診断疾患ガイドラインで推奨される血液検査は、アルツハイマー型認知症などの変性性認知症の診断における、認知症および認知症様症状をきたす内科疾患除外診断のために必要である。しかし、現段階で認知症を同定できる血液検査項目は存在しない。アルツハイマー型認知症における脳脊髄液（ＣＳＦ、ＣｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌＦｌｕｉｄ）アミロイドタンパク濃度低値とタウ濃度高値が、サロゲートマーカーとして活用されつつあるが、患者侵襲性が高いという問題点がある。
【０００７】
近年、アルツハイマー型認知症や神経変性性疾患などの認知症を診断するためのマーカーの開発が行われている。
【０００８】
例えば、血漿に含まれる６個のｍｉＲＮＡ（ｍｉＲ－４８３－５ｐ、ｍｉＲ－４８６－５ｐ、ｍｉＲ－３０ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－２００ａ―３ｐ、ｍｉＲ－５０２－３ｐ、ｍｉＲ－１４２－３ｐ）を用いて、認知症の前段階である軽度認知機能障害（ＭＣＩ）に含まれる早期アルツハイマーを診断可能であるとの報告がある（非特許文献１）。また、軽度認知症の被験者を対象に、認知症症状が緩和されるサプリメント摂取させ、摂取前後の血清中ｍｉＲＮＡ発現を比較することにより認知症マーカー探索を試みた結果、２１個のマーカー（ｈｓａ－ｍｉＲ－４８６－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２１－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－９２ａ－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－４５１ａ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｂ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２６－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２５－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１０ｂ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｅ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１４０－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１０１－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２２２－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１０ａ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２２１－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３７５、ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ａ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５８４－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２７ｂ－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－４８４、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２５ａ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－９３－５ｐ等）を抽出したとの報告がある（特許文献１）。
【０００９】
神経変性疾患、特にアルツハイマー病の予防及び治療に特異的なｍｉＲＮＡターゲット探索では、ｍｉＲ－２０６が同定された（特許文献２）。特許文献２は、このアンチセンス鎖により、神経成長因子ＢＤＮＦとＩＧＦ―１レベルが増加し、シナプスが再生することをアルツハイマー病モデルマウスで確認し、このマーカーは診断にも適用できたと報告している。
【００１０】
アルツハイマー病の診断を目指し、検体中の６７種（ｈｓａ－ｍｉＲ－１２９６、ｈｓａ－ｍｉＲ－４２４＊、ｈｓａ－ｍｉＲ－４２４、ｈｓａ－ｍｉＲ－６２９など）のｍｉＲＮＡ発現量を測定することによってアルツハイマー病の診断が可能との報告がある（特許文献３）。
（【００１１】以降は省略されています）

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