特許ウォッチ

公開番号2023138998
公報種別公開特許公報(A)
公開日2023-10-03
出願番号2023108341,2021108614
出願日2023-06-30,2014-12-13
発明の名称DNA抗体構築物及びその使用方法
出願人ザトラスティーズオブザユニバーシティオブペンシルバニア,イノビオファーマシューティカルズ,インコーポレイティド
代理人個人,個人,個人,個人,個人
主分類C12N 15/13 20060101AFI20230926BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】合成抗体またはその断片をインビボ生成する組み換え核酸配列を含む組成物、及び前記組成物を投与することによる対象内の疾患の予防及び/または治療方法を提供すること。
【解決手段】本明細書では、抗体をコードする組み換え核酸配列を含む組成物が開示される。本明細書では、組成物を対象に投与することによる対象内での合成抗体の生成方法も開示される。本開示は、前記組成物及び生成方法を用いて対象内の疾患の予防方法及び/または治療方法も提供する。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
（ａ）配列番号４４に記載される核酸配列と；
（ｂ）配列番号６７に記載される核酸配列と；
（ｃ）配列番号６９に記載される核酸配列と；
（ｄ）配列番号７１に記載される核酸配列と；
（ｅ）配列番号７３に記載される核酸配列と；
（ｆ）配列番号７５に記載される核酸配列と；
（ｇ）配列番号７７に記載される核酸配列と；
（ｈ）配列番号５８に記載される核酸配列と；
（ｉ）配列番号６０に記載される核酸配列と；
（ｊ）配列番号６５に記載される核酸配列と
からなる群から選択される核酸配列の全長にわたって少なくとも約９５％の同一性を有する前記核酸配列を含む合成抗体をコードする核酸分子。
続きを表示（約 1,500 文字）【請求項２】
前記核酸配列が、
（ａ）配列番号４４に記載される前記核酸配列と；
（ｂ）配列番号６７に記載される前記核酸配列と；
（ｃ）配列番号６９に記載される前記核酸配列と；
（ｄ）配列番号７１に記載される前記核酸配列と；
（ｅ）配列番号７３に記載される前記核酸配列と；
（ｆ）配列番号７５に記載される前記核酸配列と；
（ｇ）配列番号７７に記載される前記核酸配列と；
（ｈ）配列番号５８に記載される前記核酸配列と；
（ｉ）配列番号６０に記載される前記核酸配列と；
（ｊ）配列番号６５に記載される前記核酸配列と
からなる群から選択される、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項３】
（ａ）配列番号４５に記載されるアミノ酸配列と；
（ｂ）配列番号６８に記載されるアミノ酸配列と；
（ｃ）配列番号７０に記載されるアミノ酸配列と；
（ｄ）配列番号７２に記載されるアミノ酸配列と；
（ｅ）配列番号７４に記載されるアミノ酸配列と；
（ｆ）配列番号７６に記載されるアミノ酸配列と；
（ｇ）配列番号７８に記載されるアミノ酸配列と；
（ｈ）配列番号５９に記載されるアミノ酸配列と；
（ｉ）配列番号６１に記載されるアミノ酸配列と；
（ｊ）配列番号６６に記載されるアミノ酸配列と
からなる群から選択されるアミノ酸配列の全長にわたって少なくとも約９５％の同一性を有する前記アミノ酸配列を含む合成抗体をコードする核酸分子。
【請求項４】
前記核酸が、
（ａ）配列番号４５に記載される前記アミノ酸配列と；
（ｂ）配列番号６８に記載される前記アミノ酸配列と；
（ｃ）配列番号７０に記載される前記アミノ酸配列と；
（ｄ）配列番号７２に記載される前記アミノ酸配列と；
（ｅ）配列番号７４に記載される前記アミノ酸配列と；
（ｆ）配列番号７６に記載される前記アミノ酸配列と；
（ｇ）配列番号７８に記載される前記アミノ酸配列と；
（ｈ）配列番号５９に記載される前記アミノ酸配列と；
（ｉ）配列番号６１に記載される前記アミノ酸配列と；
（ｊ）配列番号６６に記載される前記アミノ酸配列と
からなる群から選択される前記アミノ酸配列を有するタンパク質をコードする、請求項３に記載の核酸分子。
【請求項５】
前記核酸配列が、軽鎖ポリペプチド、重鎖ポリペプチド、軽鎖ポリペプチド及び重鎖ポリペプチドの両方、またはその断片をコードする、請求項１～４のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項６】
前記核酸配列が軽鎖ポリペプチド及び重鎖ポリペプチドをコードする場合、前記核酸配列が、プロテアーゼ切断部位もコードする、請求項５に記載の核酸分子。
【請求項７】
前記プロテアーゼ切断部位が、前記軽鎖ポリペプチドと前記重鎖ポリペプチドとの間に位置し、前記プロテアーゼ切断部位が、フリン切断部位及び２Ａペプチド配列を含む、請求項６に記載の核酸分子。
【請求項８】
前記核酸分子が、免疫グロブリン（Ｉｇ）シグナルペプチドをさらにコードする、請求項１～４のいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項９】
前記Ｉｇシグナルペプチドが、ＩｇＥシグナルペプチドを含む、請求項８に記載の核酸分子。
【請求項１０】
前記核酸分子が、発現ベクターを含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の核酸分子。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、合成抗体またはその断片をインビボ生成する組み換え核酸配列を含む組成物、及び前記組成物を投与することによる対象内の疾患の予防及び／または治療方法に関する。
続きを表示（約 15,000 文字）【背景技術】
【０００２】
（関連出願の相互参照）
本願は、２０１３年１２月１３日出願の国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０７５１３７に対する優先権を主張するものであり、この出願は、参照することでその全体が本明細書に組み入れられる。
【０００３】
免疫グロブリン分子は、システイン残基間のジスルフィド結合（Ｓ－Ｓとして示す）によって共有結合された軽（Ｌ）鎖及び重（Ｈ）鎖を２つずつ含む。重鎖（ＶＨ）及び軽鎖（ＶＬ）の可変ドメインは、抗体分子の結合部位に寄与する。重鎖定常領域は、３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）と、（柔軟な）ヒンジ領域とからなる。軽鎖も、定常ドメイン（ＣＬ）を有する。重鎖及び軽鎖の可変領域は、４つのフレームワーク領域（ＦＲ；ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４）と、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ：ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）とを含む。従って、これらは非常に複雑な遺伝系であり、インビボ組み立てが困難となっている。
【０００４】
標的モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、過去２５年間で最も重要な医療用治療の進歩の１つである。この種の免疫療法は今や、多数の自己免疫疾患、癌及び感染の治療に対して日常的に用いられている。悪性腫瘍に対して、現在用いられている免疫グロブリン（Ｉｇ）療法の多くは、腫瘍に向けた細胞毒性化学療法レジメンを併用する。この併用法により全体的な生存率が著しく改善されている。特定の癌に対して用いるｍＡｂ製剤が多数認可されており、例えば、非ホジキンリンパ腫治療のためのＣＤ２０を標的とするキメラｍＡｂであるリツキサン（リツキシマブ）、ならびにＣＴＬＡ－４を阻害し、黒色腫及び他の悪性腫瘍の治療に用いられているヒトｍＡｂであるイピリムマブ（エルボイ）が挙げられる。さらに、ベバシズマブ（アバスチン）は、ＶＥＧＦ及び腫瘍新血管形成を標的とし、大腸癌の治療に用いられているもう一つの代表的なヒト化ｍＡｂである。悪性腫瘍の治療に最も注目されているｍＡｂは、恐らくＨｅｒ２／ｎｅｕを標的とするヒト化製剤であるトラスツズマブ（ハーセプチン）であり、患者の一部の乳癌に対して大きな有効性を持つことが実証されている。さらに、多数のｍＡｂが、自己免疫及び特定の血液疾患の治療に用いられている。
【０００５】
癌治療に加えて、ジフテリア、Ａ型及びＢ型肝炎、狂犬病、破傷風、水痘、及び呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）などの多くの感染に対する防御効力をポリクローナルＩｇの受動伝達により調節する。実際、いくつかのポリクローナルＩｇ製剤は、積極的なワクチン接種を介して防御Ｉｇを生成するのに十分な時間がない状況下の疾患流行地を旅行している個人において特定の感染性因子に対する一時的な防御をもたらす。さらに、免疫不全の子供において、ＲＳＶ感染を標的とするｍＡｂであるパリビズマブ（シナジス）は、ＲＳＶに対して防御することが臨床的に実証されている。
【０００６】
抗体ベースの治療はリスクがないわけではない。１つのかかるリスクは、抗体依存性感染増強（ＡＤＥ）であり、非中和性抗ウイルスタンパク質が宿主細胞へのウイルス侵入をしやすくする場合に起こり、細胞の感染性の増加につながる。いくつかの細胞は、ウイルスが侵入するのに用いる表面上に通常の受容体を有していない。抗ウイルスタンパク質（すなわち、抗体）は、細胞膜内で、これらの細胞のいくつかが有する抗体Ｆｃ受容体に結合する。ウイルスは、抗体の他方の末端で抗原結合部位に結合する。このウイルスは、このメカニズムを使用して、ヒトマクロファージに感染することができ、通常は軽症のウイルス感染を引き起こし、生命に関わるようになる。ＡＤＥの最も広く知られている例は、デングウイルス（ＤＥＮＶ）による感染の状況で発生する。それは、ある血清型のＤＥＮＶに以前感染したことがある人が、何カ月または何年も経ってから異なる血清型に感染する場合に観察される。かかる場合では、疾患の臨床経過はより深刻になり、これらの人は、ＡＤＥが起こっていない人と比べてより高いウイルス血症を有する。これは、一次（最初の）感染は、子供においてほどんどが軽症の疾患（ＤＦ）を引き起こすが、二次感染（後日での再感染）は、子供及び成人の双方において深刻な疾患（ＤＨＦ及び／またはＤＳＳ）と関連付けられやすくなるという観察を説明している。４つの抗原性の異なる血清型のＤＥＮＶ（ＤＥＮＶ－１～ＤＥＮＶ－４）が存在する。ＤＥＮＶによる感染は、感染している血清型に対して終生免疫をもたらす中和同型免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）抗体の産生を誘発する。ＤＥＮＶによる感染は、他の３つの血清型に対してある程度の交差防御免疫ももたらす。中和異型抗体の誘発に加えて、ＤＥＮＶによる感染は、ウイルスを部分的にのみまたは全く中和しない異型抗体も誘発することができる。かかる交差反応性であるが非中和な抗体の産生が、より深刻な二次感染の理由かもしれない。いったん白血球内部へ入ると、ウイルスは検出されないまま複製し、最終的に、深刻な疾患を引き起こす非常に高いウイルス力価を生成する。
【０００７】
ｍＡｂ療法の臨床効力は素晴らしいものがある。しかしながら、この治療アプローチの使用及び普及を制限する問題が残っている。これらの問題のいくつかには、これらの複雑な生物製剤の製造コストが高いことが挙げられ、より広範な人口、とりわけ、大きな影響をもたらし得る発展途上国における使用を限定してしまう。さらに、有効性を達成し維持するためにｍＡｂを反復投与する必要性がしばしばあることもロジスティクス及び患者のコンプライアンスという点で障害になり得る。血清ＩｇＧとの競合により治療抗体の低いインビボ有効性を減少させるかまたは除去する新規の抗体が必要とされている。デング、ＨＩＶ、ＲＳＶ、及び他のものなどのウイルスにおける抗体依存性感染増強を除去することができる新規の抗体が必要とされている。二重特異性抗体、二官能性抗体、及び抗体カクテルは、治療的または予防的であることを証明することが可能ないくつかの機能を行うために必要である。また、これらの抗体製剤の長期安定性は短いことが多く最適ではない。したがって、当該技術分野では、安全かつコスト効率のよい方法で対象に送達することができる合成抗体分子が必要とされている。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、（ａ）配列番号４４に記載される核酸配列と；（ｂ）配列番号６７に記載される核酸配列と；（ｃ）配列番号６９に記載される核酸配列と；（ｄ）配列番号７１に記載される核酸配列と；（ｅ）配列番号７３に記載される核酸配列と；（ｆ）配列番号７５に記載される核酸配列と；（ｇ）配列番号７７に記載される核酸配列と；（ｈ）配列番号５８に記載される核酸配列と；（ｉ）配列番号６０に記載される核酸配列と；（ｊ）配列番号６５に記載される核酸配列とからなる群から選択される核酸配列の全長にわたって少なくとも約９５％の同一性を有する核酸配列を含む合成抗体をコードする核酸分子に関する。本発明はさらに、上記の核酸分子をそれを必要とする対象に投与することを含む、対象における疾患の予防方法に関する。本発明はさらに、上記の核酸分子をそれを必要とする対象に投与することを含む、対象における疾患の治療方法に関する。
【０００９】
本発明は、（ａ）配列番号４５に記載されるアミノ酸配列と；（ｂ）配列番号６８に記載されるアミノ酸配列と；（ｃ）配列番号７０に記載されるアミノ酸配列と；（ｄ）配列番号７２に記載されるアミノ酸配列と；（ｅ）配列番号７４に記載されるアミノ酸配列と；（ｆ）配列番号７６に記載されるアミノ酸配列と；（ｇ）配列番号７８に記載されるアミノ酸配列と；（ｈ）配列番号５９に記載されるアミノ酸配列と；（ｉ）配列番号６１に記載されるアミノ酸配列と；（ｊ）配列番号６６に記載されるアミノ酸配列とからなる群から選択されるアミノ酸配列の全長にわたって少なくとも約９５％の同一性を有するタンパク質をコードする核酸配列を含む合成抗体をコードする核酸分子にも関する。本発明は、上記の核酸分子を含む組成物にも関する。本発明はさらに、上記の核酸分子をそれを必要とする対象に投与することを含む、対象における疾患の予防方法に関する。本発明はさらに、上記の核酸分子をそれを必要とする対象に投与することを含む、対象における疾患の治療方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
実施例１に記載のＩｇＧ重鎖をコードする核酸配列を示す。
実施例１に記載のＩｇＧ軽鎖をコードする核酸配列を示す。
時間（時）対ＯＤ４５０ｎｍ（組織培養上清を１：１００に希釈）をプロットしたグラフを示す。
ウエスタンブロットの画像を示す。
ｐＨＩＶ－１Ｅｎｖ－Ｆａｂの生成及び発現確認を示す。（Ａ及びＢ）ｐＨＩＶ－１ＥｎｖＦａｂ抗ｇｐ１２０Ｆａｂ発現構築物の環状プラスミドマップは、ＶＲＣ０１重（Ｈ）及び軽（Ｌ）可変鎖Ｉｇ遺伝子を用いて設計した。発現レベルを増すためにＦａｂプラスミドを構築する際にいくつかの修飾を含んだ。図５に示すように、ＦａｂＶＬ断片遺伝子及びＶＨ断片遺伝子は、ｐＶａｘ１ベクターのＢａｍＨ１及びＸｈｏ１制限部位間で別々にクローニングした。（Ｃ）ｐＨＩＶ－１ＥｎｖＦａｂのインビトロ発現。グラフは、２９３Ｔ細胞トランスフェクション後のｐＨＩＶ－１ＥｎｖＦａｂ発現の時間的動態を示した。発現を示す値は、３列ウェルの平均値ＯＤ４５０ｎｍ±標準偏差である。対照として、２９３Ｔ細胞もｐＶａｘ１バックボーンでトランスフェクトした。
ｐＨＩＶ－１ＥｎｖＦａｂによる抗ＨＩＶＥｎｖ特異的Ｆａｂの時間的生成の測定を示す。（Ａ）抗ＨＩＶ１Ｆａｂの経時的生成。ｐＨＩＶ－１ＥｎｖＦａｂの投与後、ＥＬＩＳＡ法によって１：１００に最終希釈した血清中で特異的Ｆａｂの産生を１０日間にわたって測定し、ＯＤ４５０ｎｍとして示した。ｐＶａｘ１投与されたマウスの血清を陰性対照として用いた。（Ｂ）組み換えｇｐ１２０（ｒｇｐ１２０）で免疫化した後の抗ｇｐ１２０抗体反応の比較測定。実施例２に記載のように、ｒｇｐ１２０を単回注射してマウスを免疫化した後、１０日目までの抗ｇｐ１２０抗体の産生を測定し、ＯＤ４５０ｎｍ値として示した。この研究において、ＰＢＳを陰性対照注射として用いた。（Ｃ）免疫ブロット分析によって結合しているＨＩＶ１Ｅｎｖ－Ｆａｂの確認。実施例に記載のように、５μｇまたは１０μｇいずれかのｇｐ１２０をＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びニトロセルロースブロッティングに供したした後、ｐＨＩＶ－１ＥｎｖＦａｂ投与されたマウスの血清とともにブロットを培養した。実験用血清が結合ｒｇｐ１２０を認識したことが免疫ブロットにより示され、生成されたＦａｂの特異性が確認された。（Ｄ）ヒトＩｇＧ１Ｆａｂの時間的定量化。ｐＨＩＶ－１Ｅｎｖ－Ｆａｂを投与後、マウス血清中のＩｇＧ１を測定した。標準ＥＬＩＳＡキットにより、示された時点でＩｇＧ１を測定し、Ｆａｂ（μｇ／ｍＬ）±標準偏差で表わした。ｐＶａｘ１投与されたマウスの血清を陰性対照として用いた。ｘ軸上に示された時点で血清サンプルを分析した。図６（Ａ）、（Ｂ）、及び（Ｄ）に示すグラフの矢印は、ＤＮＡプラスミドを投与した時点を示す。
ＨＩＶ１ＥｎｖＦａｂのクレードＡＨＩＶＥｎｖ糖タンパク質へのＦＡＣＳ結合分析を示す。（Ａ）抗ＨＩＶ１Ｅｎｖ－ＦａｂのＨＩＶ－１クレードＡＥｎｖ糖タンパク質への結合を示すＦＡＣＳスキャニング。コンセンサス（ｐＣｏｎ－Ｅｎｖ－Ａ）または「最適化」（ｐＯｐｔ－Ｅｎｖ－Ａ）ＨＩＶ－１クレードＡエンベロープのいずれかを発現するＤＮＡを２９３Ｔ細胞にトランスフェクトした。トランスフェクション２日後、精製された天然ＶＲＣ０１Ｉｇ、ｐＨＩＶ－１ＥｎｖＦａｂ（プラスミド単回投与後４８時間で回収）から生成された血清、またはｐＩｇＧ－Ｅ１Ｍ２投与から生成された対照Ｉｇのいずれかで細胞を染色した。血清及びＶＲＣ０１抗体をＰＢＳ５０μｌ中でそれぞれ１：４または１：１００に希釈し、室温で３０分間培養した。その後、適切な二次フィコエリトリン（ＰＥ）に複合体化させたＩｇで細胞を染色し、ＦＡＣＳ分析用に単一及び生細胞としてゲートした。陽性細胞の結合率をスキャニングごとに示した。（Ｂ）ＦＡＣＳ結合データのグラフ図。Ｉｇ／血清試験群ごとに染色した細胞数（すなわち、発現レベルを示す）をバックグラウンド染色値で割り、試験した異なるＨＩＶクレードＡＥｎｖ製剤の関数としてｙ軸上に特異結合率（％）として示した。
ｐＨＩＶ－１Ｅｎｖ－Ｆａｂ投与されたマウスの血清によるＨＩＶ－１の経時中和を示す。中和活性の分析に用いた血清は、グラフに示された時点で回収した。中和分析をＨＩＶ－１偽型ウイルス：Ｂａｌ２６（パネルＡ；クレードＢ、Ｔｉｅｒ１）、Ｑ２３Ｅｎｖ１７（パネルＢ；クレードＡ、Ｔｉｅｒ１）、ＳＦ１６２Ｓ（パネルＣ；クレードＢ、Ｔｉｅｒ１）、及びＺＭ５３Ｍ（パネルＤ；クレードＣ、Ｔｉｅｒ２）のパネルを用いてＴＺＭ－ＢＬ細胞で行った。実施例２に記載した通り、０．０１のＭＯＩで細胞を感染させ、ｐＨＩＶ－１ＥｎｖＦａｂ投与から生成されたＦａｂを含む血清（最終希釈１：５０）の存在下で培養した。中和値を％で示す。この計算は実施例２に記載した。なお、グラフごとに示した横線は、実験用血清が５０％のウイルス中和を介在したおおよその時点を示す。
実施例２～７に記載のＨＩＶ－１ＥｎｖＦａｂの重鎖（ＶＨ－ＣＨ１）をコードする核酸配列を示す。
実施例２～７に記載のＨＩＶ－１ＥｎｖＦａｂの軽鎖（ＶＬ－ＣＬ）をコードする核酸配列を示す。
ＨＩＶＥｎｖをコードするプラスミドでトランスフェクトした細胞の免疫蛍光を示す。ｐＶＡＸ１（左パネル）またはｐＨＩＶ－Ｅｎｖ－Ｆａｂ（右パネル）からの製剤で細胞を染色した。
抗原の種類対血清濃度（ｎｇ／ｍＬ）をプロットしたグラフを示す。
合成ヒトＩｇＧ１抗体をコードする構築物を模式的に示す。
図１３の構築物によってコードされる組み立て抗体（発現時）を模式的に示す。
ＶＲＣ０１ＩｇＧのアミノ酸配列を示す。
（Ａ）ＨＩＶ－１Ｅｎｖ－ＰＧ９Ｉｇをコードする構築物の模式図を示す。
（Ｂ）（Ａ）の構築物を含むベクターの模式図を示す。
（Ｃ）染色したゲルの画像を示す。
（Ａ）ＨＩＶ－１Ｅｎｖ－４Ｅ１０Ｉｇをコードする構築物の模式図を示す。
（Ｂ）（Ａ）の構築物を含むベクターの模式図を示す。
（Ｃ）染色したゲルの画像を示す。
フリンによる切断前のＨＩＶ－１Ｅｎｖ－ＰＧ９Ｉｇのアミノ酸配列を示す。
フリンによる切断前のＨＩＶ－１Ｅｎｖ－４Ｅ１０Ｉｇのアミノ酸配列を示す。
（Ａ）ＣＨＩＫＶ－Ｅｎｖ－Ｆａｂの重（ＶＨ－ＣＨ１）鎖をコードする構築物の模式図を示す。
（Ｂ）ＣＨＩＫＶ－Ｅｎｖ－Ｆａｂの重（ＶＬ－ＣＬ）鎖をコードする構築物を模式的に示す。
ＣＨＩＫＶ－Ｅｎｖ－Ｆａｂの重（ＶＨ－ＣＨ１）または軽（ＶＬ－ＣＬ）鎖をコードする構築物を含む発現ベクターを模式的に示す。
時単位の時間（ｈｒ）対ＯＤ４５０ｎｍをプロットしたグラフを示す。
免疫ブロットの画像を示す。
ＤＮＡ投与のタイミング、事前採血及び採血を模式的に示す。
日単位の時間対ＯＤ４５０ｎｍをプロットしたグラフを示す。
暴露後の日数対生存率（％）をプロットしたグラフを示す。
マウス群対ＴＮＦ－αのｐｇ／ｍＬをプロットしたグラフを示す。
マウス群対ＩＬ－６のｐｇ／ｍＬをプロットしたグラフを示す。
ＶＨ－ＣＨ１をコードするプロモーター制御下の構築物を模式的に示す。
ＶＬ－ＣＬをコードするプロモーター制御下の構築物を模式的に示す。
発現ベクター内でクローニングした抗Ｈｅｒ－２ＦａｂのＶＨ－ＣＨ１またはＶＬ－ＣＬをコードする構築物を模式的に示す。
抗Ｈｅｒ－２ＦａｂのＶＨ－ＣＨ１をコードする核酸配列を示す。
図３２の核酸配列によってコードされるアミノ酸配列（すなわち、抗Ｈｅｒ－２ＦａｂのＶＨ－ＣＨ１のアミノ酸配列）を示す。
抗Ｈｅｒ－２ＦａｂのＶＬ－ＣＬをコードする核酸配列を示す。
図３４の核酸配列によってコードされるアミノ酸配列（すなわち、抗Ｈｅｒ－２ＦａｂのＶＬ－ＣＬのアミノ酸配列）を示す。
トランスフェクト細胞の種類対ＩｇＧ濃度（μｇ／ｍＬ）をプロットしたグラフを示す。
免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）重鎖の可変重領域（ＶＨ）、可変重定常領域１（ＣＨ１）、ヒンジ領域、可変重定常領域２（ＣＨ２）、及び可変重定常３（ＣＨ３）をコードし、かつ、ＩｇＧ軽鎖の可変軽領域（ＶＬ）及び可変軽定常領域（ＣＬ）をコードする構築物を模式的に示す。ＩｇＧの重鎖及び軽鎖は、プロテアーゼ切断部位によって分離され、各々は、（リーダー配列によってコードされる）シグナルペプチドによって先行される。
抗デングウイルス（ＤＥＮＶ）ヒトＩｇＧをコードする核酸配列を示す。
図３９の核酸配列によってコードされるアミノ酸配列（すなわち、抗ＤＥＮＶヒトＩｇＧのアミノ酸配列）を示す。このアミノ酸配列では、重鎖及び軽鎖を２つの別々のポリペプチドに分離させるプロテアーゼ切断がまだ起こっていない。
マウス群対ＯＤ４５０ｎｍをプロットしたグラフを示す。
注射後の日数対ヒトＩｇＧ濃度（ｎｇ／ｍＬ）をプロットしたグラフを示す。
図１の核酸配列（すなわち、配列番号６）によってコードされるアミノ酸配列を示す。このアミノ酸配列は、以下の実施例１に記載のＩｇＧ重鎖のアミノ酸配列である。
図２の核酸配列に（すなわち、配列番号７）よってコードされるアミノ酸配列を示す。このアミノ酸配列は、以下の実施例１に記載のＩｇＧ軽鎖のアミノ酸配列である。
図９の核酸配列（すなわち、配列番号３）によってコードされるアミノ酸配列を示す。このアミノ酸配列は、実施例２～７に記載のＨＩＶ－１Ｅｎｖ－Ｆａｂの重鎖（ＶＨ－ＣＨ１）のアミノ酸配列である。
図１０の核酸配列（すなわち、配列番号４）によってコードされるアミノ酸配列を示す。このアミノ酸配列は、実施例２～７に記載のＨＩＶ－１Ｅｎｖ－Ｆａｂの軽鎖（ＶＬ－ＣＬ）のアミノ酸配列である。
以下の実施例１１に記載のＨＩＶ－１ＰＧ９一本鎖Ｆａｂ（ｓｃＦａｂ）をコードする核酸配列を示す。
図４６の核酸配列（すなわち、配列番号５０）によってコードされるアミノ酸配列を示す。このアミノ酸配列は、以下の実施例１１に記載のＨＩＶ－１ＰＧ９ｓｃＦａｂのアミノ酸配列である。
以下の実施例１３に記載のＨＩＶ－１４Ｅ１０一本鎖Ｆａｂ（ｓｃＦａｂ）をコードする核酸配列を示す。
図４８の核酸配列（すなわち、配列番号５２）によってコードされるアミノ酸配列を示す。このアミノ酸配列は、以下の実施例１３に記載のＨＩＶ－１４Ｅ１０ｓｃＦａｂのアミノ酸配列である。
免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）重鎖の可変重領域（ＶＨ）、可変重定常領域１（ＣＨ１）、ヒンジ領域、可変重定常領域２（ＣＨ２）、及び可変重定常３（ＣＨ３）をコードする構築物を模式的に示す。ＩｇＧ重鎖をコードする核酸配列は、リーダー配列によって先行される。
ＩｇＧ軽鎖の可変軽領域（ＶＬ）及び可変軽定常領域（ＣＬ）をコードする構築物を模式的に示す。ＩｇＧ軽鎖をコードする核酸配列は、リーダー配列によって先行される。
以下の実施例９に記載のＨＩＶ－１ＶＲＣ０１ＩｇＧ１重鎖をコードする核酸配列を示す。
図５２の核酸配列（すなわち、配列番号５４）によってコードされるアミノ酸配列を示す。このアミノ酸配列は、以下の実施例９に記載のＨＩＶ－１ＶＲＣ０１ＩｇＧ１重鎖のアミノ酸配列である。
以下の実施例９に記載のＨＩＶ－１ＶＲＣ０１ＩｇＧ軽鎖をコードする核酸配列を示す。
図５４の核酸配列（すなわち、配列番号５６）によってコードされるアミノ酸配列を示す。このアミノ酸配列は、以下の実施例９に記載のＨＩＶ－１ＶＲＣ０１ＩｇＧ軽鎖のアミノ酸配列である。
以下の実施例１４に記載のＣＨＩＫＶ－Ｅｎｖ－Ｆａｂの重鎖（ＶＨ－ＣＨ１）をコードする核酸配列を示す。
図５６の核酸配列（すなわち、配列番号５８）によってコードされるアミノ酸配列を示す。このアミノ酸配列は、以下の実施例１４に記載のＣＨＩＫＶ－Ｅｎｖ－Ｆａｂの重鎖（ＶＨ－ＣＨ１）のアミノ酸配列である。
以下の実施例１４に記載のＣＨＩＫＶ－Ｅｎｖ－Ｆａｂの軽鎖（ＶＬ－ＣＬ）をコードする核酸配列を示す。
図５８の核酸配列（すなわち、配列番号６０）によってコードされるアミノ酸配列を示す。このアミノ酸配列は、以下の実施例１４に記載のＣＨＩＫＶ－Ｅｎｖ－Ｆａｂの軽鎖（ＶＬ－ＣＬ）のアミノ酸配列である。
以下の実施例１２に記載のＨＩＶ－１Ｅｎｖ－４Ｅ１０Ｉｇをコードする核酸配列を示す。
以下の実施例１０に記載のＨＩＶ－１Ｅｎｖ－ＰＧ９Ｉｇをコードする核酸配列を示す。
ＶＲＣ０１ＩｇＧ（配列番号６４）をコードする核酸配列を示す。
抗体発現プラスミドの概略設計、及びＣＨＩＫＶ－Ｆａｂ発現プラスミドの単回ＥＰ媒介注射後の抗体の発現及び結合速度の確認を示す。（Ａ）選択された抗ＣＨＩＫＶヒトモノクローナルの可変軽鎖及び重鎖（ＶＬ及びＶＨ）ＩｇＧ断片遺伝子を、ＣＨＩＫＶ－Ｆａｂ及びＣＨＩＫＶ－ＩｇＧについて別々に、最適化ＤＮＡプラスミドベクターにクローニングした。（Ｂ）抗ＣＨＩＫＶＶＬ及びＶＨ－Ｆａｂ遺伝子またはＣＨＩＫＶ－ＩｇＧをコードするＤＮＡプラスミドを、ＥＬＩＳＡ法によってそれぞれのインビトロ発現を決定するために、２９３Ｔ細胞に一緒にトランスフェクトした。空の対照であるｐＶａｘ１プラスミドでトランスフェクトした細胞は、陰性対照として機能した。（Ｃ）ＥＰ介在送達後の抗ＣＨＩＫＶ－ＩｇＧ抗体のインビボ発現。マウス（Ｂ６．Ｃｇ－Ｆｏｘｎ１
nu
／Ｊ）にＣＨＩＫＶ－ＩｇＧプラスミド（合計で１００μｇ）を単回筋肉内注射で投与した後、ＥＰを行った（１群当たりｎ＝５マウス）。空のｐＶａｘ１ベクターの注射は、陰性対照として用いた。
（Ｄ）ＣＨＩＫＶ－Ｅｎｖ抗原への特異的結合は、ＣＨＩＫＶ－ＩｇＧ及び組み換えＣＨＩＫＶ－Ｅｎｖで免疫化されたマウス由来の血清を回収したＥＬＩＳＡアッセイにより測定し、異なる時点で個々のマウスのＯＤ４５０ｎｍ値として表した。（Ｅ）ヒトＩｇＧ濃度の血清レベルは、実施例１７に記載のように、ＣＨＩＫＶ－ＩｇＧを筋肉内に注射したマウスにおいて種々の時点で測定した。（Ｆ）抗体結合親和性及び特異性の評価。タンパク質を標的にするためのＣＨＩＫＶ－ＩｇＧを注射したマウス（１４日目）由来の血清の結合親和性機能性は、以下の実施例に記載のように、ＣＨＩＫＶ感染細胞由来の細胞溶解物を用いてウエスタンブロットによって試験した。
ＣＨＩＫＶ－ＩｇＧ発現プラスミドの単回電気穿孔媒介注射後のＩｇＧの発現及び結合速度を示す。（Ａ）ＣＨＩＫＶ－Ｆａｂを投与されたマウス由来の血清は、ＣＨＩＫＶ－Ｅｎｖ抗原に特異的であった。ＥＬＩＳＡプレートを組み換えＣＨＩＫＶ－ＥｎｖまたはＨＩＶ－１Ｅｎｖ（亜型Ｂ；ＭＮ）タンパク質で被覆し、ＣＨＩＫＶ－ＩｇＧまたはｐＶａｘ１を注射したマウス由来の血清は、最初の注射後に示したように得られた。ＣＨＩＫＶ－Ｅｎｖ抗原への特異的結合は、血清を回収したＥＬＩＳＡアッセイにより測定し、異なる時点で個々のマウスのＯＤ４５０ｎｍ値として表した。（Ｂ）ＣＨＩＫＶ－Ｆａｂを投与されたマウスから生成されたＣＨＩＫＶ－Ｆａｂが、ＣＨＩＫＶ－Ｅｎｖ糖タンパク質に結合できたことが、免疫蛍光検査法（ＩＦＡ）結果により実証された。ＣＨＩＫＶ感染ベロ細胞を感染後２４時間で固定し、次いで免疫蛍光検査法でＣＨＩＫＶ－Ｅｎｖ抗原発現を検出した。細胞核をＤＡＰＩで染色した。適量のＣＨＩＫＶ－Ｅｎｖタンパク質発現が、ＣＨＩＫＶ－Ｆａｂ抗体をもつベロ細胞中で観察された。ｐＶａｘ１免疫化マウス血清を陰性対照をとして用いた。（Ｃ）プラスミドを注射したマウス由来の血清の、ＣＨＩＫＶ感染細胞への結合のＦＡＣＳ分析。ｘ軸は、ＣＨＩＫＶ－Ｅｎｖで補完したレンチウイルスＧＦＰ偽ウイルスを用いてＧＦＰ染色を示した。ｙ軸は、マウス中で産生された試験ヒトＩｇＧの染色を示した。二重陽性細胞は、ＣＨＩＫＶ感染細胞への血清結合の示唆／測定であった。
ＣＨＩＫＶ－ＩｇＧ＋ＥＰを注射したマウス由来の血清が、多数のＣＨＩＫＶ株に対して中和活性を呈したことを示す。（Ａ～Ｆ）６つの異なるＣＨＩＫＶウイルス株：Ｒｏｓｓ、ＬＲ２００６－ＯＰＹ１、ＩＮＤ－６３－ＷＢ１、ＰＣ－０８、Ｂ４４８－Ｃｈｉｎａ、及びＢｉａｎｃｈｉに対して測定した、ＣＨＩＫＶ－ＩｇＧをＥＰで投与したマウス由来の血清の中和活性を示す。中和抗体（ｎＡｂ）力価は、ベロ細胞中でＣＰＥの少なくとも５０％阻害をもたらした血清の最大希釈としてプロットした。各実験において１群当たり少なくとも１０匹のマウスである２つの独立した実験において、同様の結果が観察された。ＩＣ－５０値は、ＰｒｉｓｍＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアで行った。
抗ＣＨＩＫＶ－ＥｎｖＩｇＧ及び血清の耐久性、及びＣＨＩＫＶ－Ｆａｂで免疫化した後の粘膜ＩｇＧ応答、並びにＩｇＧ発現及び暴露試験を示す。（Ａ）ＩｇＧプラスミド免疫化及びＣＨＩＫＶ暴露の概略図。（Ｂ～Ｃ）ＢＡＬＢ／ｃマウスに、０日目にｐＶａｘ１、ＣＨＩＫＶ－ＩｇＧ、またはＣＨＩＫＶ－Ｆａｂを注射し、２日目（Ｂ）または３０日目（Ｃ）にＣＨＩＫＶ－Ｄｅｌ－０３（ＪＮ５７８２４７）ＣＨＩＫＶ株（２５ｕｌの全容量中１×１０
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ＰＦＵ）で暴露した。マウスを毎日監視し、生存率は、ウイルス暴露後２０日間記録した。（Ｄ～Ｅ）異なる経路のＣＨＩＫＶウイルス感染からのマウスの防御。２つの群のマウスは、筋肉内（ＩＭ）注射により１００ｕｇのＣＨＩＫＶ－ＩｇＧで免疫化し、皮下（ｓ．ｃ）（Ｄ）で２日目に暴露し（Ｄ）、別の群のマウスは、鼻腔内（ｉ．ｎ）により暴露した。（Ｅ）ＣＨＩＫＶを接種。マウスを毎日監視し、生存率は、ウイルス暴露後２０日間記録した。↑は、ＤＮＡ投与を示し；☆は、ウイルス暴露を示した。各群は、１０匹のマウスからなり、結果は、２つの独立した実験の代表例であった。
抗ＣＨＩＫＶ－ＥｎｖＩｇＧ及び血清の耐久性、及びＣＨＩＫＶ－Ｆａｂで免疫化した後の粘膜ＩｇＧ応答、並びにＩｇＧ発現及び暴露試験を示す。（Ａ）ＩｇＧプラスミド免疫化及びＣＨＩＫＶ暴露の概略図。（Ｂ～Ｃ）ＢＡＬＢ／ｃマウスに、０日目にｐＶａｘ１、ＣＨＩＫＶ－ＩｇＧ、またはＣＨＩＫＶ－Ｆａｂを注射し、２日目（Ｂ）または３０日目（Ｃ）にＣＨＩＫＶ－Ｄｅｌ－０３（ＪＮ５７８２４７）ＣＨＩＫＶ株（２５ｕｌの全容量中１×１０
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ＰＦＵ）で暴露した。マウスを毎日監視し、生存率は、ウイルス暴露後２０日間記録した。（Ｄ～Ｅ）異なる経路のＣＨＩＫＶウイルス感染からのマウスの防御。２つの群のマウスは、筋肉内（ＩＭ）注射により１００ｕｇのＣＨＩＫＶ－ＩｇＧで免疫化し、皮下（ｓ．ｃ）（Ｄ）で２日目に暴露し（Ｄ）、別の群のマウスは、鼻腔内（ｉ．ｎ）により暴露した。（Ｅ）ＣＨＩＫＶを接種。マウスを毎日監視し、生存率は、ウイルス暴露後２０日間記録した。↑は、ＤＮＡ投与を示し；☆は、ウイルス暴露を示した。各群は、１０匹のマウスからなり、結果は、２つの独立した実験の代表例であった。
ＣＨＩＫＶ暴露試験を介した即時的なな防御及び持続的な防御の双方を示す。（Ａ）ＣＨＩＫＶ－ＩｇＧワクチン接種及び暴露試験の概略図。Ｉ群暴露：ＢＡＬＢ／ｃマウスに、０日目にＣＨＩＫＶ－ＩｇＧ、ＣＨＩＫＶ－Ｅｎｖ、またはｐＶａｘ１を注射し、２日目にＣＨＩＫＶ－Ｄｅｌ－０３（ＪＮ５７８２４７）ウイルス株（２５ｕｌの全容量中１×１０
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ＰＦＵ）で暴露した。ＩＩ群暴露：ＢＡＬＢ／ｃマウスに、０日目に単回ＣＨＩＫＶ－ＩｇＧ免疫化または示した日に多数のＣＨＩＫＶ－Ｅｎｖ免疫化のいずれかを施した後、Ｉ群暴露と同じ条件下で３５日目に暴露した。↑は、ＤＮＡ投与を示し；☆は、ウイルス暴露を示した。各試験において、マウスを２０日間監視し、生存率を記録した。（Ｂ）Ｉ群暴露試験からのマウスの生存率曲線。１００％生存率は、ＣＨＩＫＶ－ＩｇＧ免疫化マウスで記録された点に留意されたい。（Ｃ）ＩＩ群暴露試験からのマウスの生存率曲線。
（Ｄ）抗ＣＨＩＫＶヒトＩｇＧレベルの濃度は、ＣＨＩＫＶ－ＩｇＧ＋ＥＰで免疫化した後の示した時点で測定した。（Ｅ）マウスにおけるＣＨＩＫＶ－ＩｇＧ及びＣＨＩＫＶ－Ｅｎｖ免疫化した後の抗ＣＨＩＫＶ－Ｅｎｖ抗体の持続的かつ全身的な誘発。
ＣＨＩＫＶによる感染に応答したエクスビボサイトカイン産生を示す。（Ａ）４５日目（すなわち、暴露後１０日目）のＩＩ群暴露試験からのＣＨＩＫＶ－ＩｇＧ及びＣＨＩＫＶ－Ｅｎｖ投与マウスにおけるウイルス力価。各データポイントは、１０匹のマウスからの平均ウイルス力価を表した。ｐＶａｘ１免疫化マウスの群は、対照として機能した。ウイルス負荷は、ｐＶａｘ１マウスと比べてＣＨＩＫＶ－ＩｇＧ（ｐ＝０．０２４４）及びＣＨＩＫＶ－Ｅｎｖ（ｐ＝０．０２２１）の両方において有意に減少した。（Ｂ＆Ｃ）ＣＨＩＫＶ感染マウスからの血清炎症性サイトカインレベル（ＴＮＦ－α及びＩＬ－６）の特徴付け。サイトカインレベルは、特異的ＥＬＩＳＡアッセイによって４５日目（暴露後１５日目）にマウスで測定した。ＣＨＩＫＶ－ＩｇＧまたはＣＨＩＫＶ－Ｅｎｖを注射したマウスは、ＴＮＦ－α及びＩＬ－６の血清レベルが同様であり、かつ、対照群（ｐ＜０．０００１）よりもＴＮＦ－α及びＩＬ－６の血清レベルが有意に低かった。データは、マウス１匹当たり（１群当たりｎ＝１０）３つのウェルの平均を表した。
（Ｄ）ＣＨＩＫＶ－ＩｇＧまたはＣＨＩＫＶ－Ｅｎｖで免疫化した後、ＣＨＩＫＶ特異的ペプチドで刺激したマウスの脾細胞におけるＴ細胞応答。示したデータは、少なくとも２つの別々の実験の代表例であった。
抗体をコードするＤＮＡ構築物によって送達されたヒト抗ＤＥＮＶ中和ｍＡｂのインビトロ発現をを示す。（ａ）送達に使用したＤＮＡプラスミドの概略図；抗体重鎖及び軽鎖配列は、フリン及び２Ａ切断部位の組み合わせによって分離する。（ｂ）ｐＤＶＳＦ－３ＷＴまたはＬＡＬＡをトランスフェクトした２９３Ｔ細胞の上清におけるヒトＩｇＧのＥＬＩＳＡ定量化分析。（ｃ）ＤＶＳＦ－３ＷＴを含有する、ｐＤＶＳＦ－３ＷＴをトランスフェクトした２９３Ｔ上清のウエスタンブロット分析。抗体をプロテインＡスピンカラムで精製し、還元（左）及び非還元（右）条件下でＳＤＳ－ＰＡＧＥで分離した。
（ｄ）ベロ細胞を非感染（モック）かまたはＤＥＮＶ１、２、３、または４で感染させるかのいずれかの後、固定し、透過処理し、ｐＤＶＳＦ－３ＷＴまたはＬＡＬＡをトランスフェクトした２９３Ｔ細胞の上清で染色した。
マウス血清中の中和ＤＥＮＶ抗体の長期発現の結果を示す。（ａ）ヒトＩｇＧの全ての血清検出可能レベルは、抗ＤＥＮＶヒトＩｇＧ抗体ＤＶＳＦ－１をコードするＤＮＡプラスミドをＦｏｘｎ１／ＮｕＪ免疫不全マウスに単回筋肉内注射した後、ＥＬＩＳＡ法で測定した。０～４週目（左）及び１９週目（右）のヒトＩｇＧレベル。各線（左）または点（右）は、個々のマウスを表した（ｎ＝５）。（ｂ）血清中の全ヒトＩｇＧは、１２９／ＳｖマウスにｐＤＶＳＦ－３ＷＴまたはｐＤＶＳＦ－３ＬＡＬＡプラスミドを筋肉内注射した後にＥＬＩＳＡ法で測定した（１群当たりｎ＝４～５）。
（ｃ）ベロ細胞を非感染（モック）かまたはＤＥＮＶ１、２、３、または４で感染させるかのいずれかの後、固定し、透過処理し、ｐＤＶＳＦ－３ＷＴまたはｐＤＶＳＦ－３ＬＡＬＡのいずれかのＤＮＡ注射後０または７日目に採取した１２９／Ｓｖマウス血清で染色した（１群当たりｎ＝５）。
（ｄ）中和は、ベロ細胞に追加する前にｐＤＶＳＦ－３ＷＴまたはｐＤＶＳＦ－３ＬＡＬＡ（１群当たりｎ＝５）のいずれかのＤＮＡ注射後７日目に採取した１２９／Ｓｖマウス血清の連続希釈物でＤＥＮＶ１、２、３、または４をインキュベートすることで評価した。感染細胞の割合を示す。
抗体をコードするＤＮＡ構築物の送達により、ウイルスのみ及び抗体感染増強疾患に対して防御したことを示す。（ａ）ウイルスのみ暴露：ＡＧ１２９マウスは、亜致死量のＤＥＮＶ２Ｓ２２１に暴露する５日前にｐＤＶＳＦ－３ＷＴ、ｐＤＶＳＦ－３ＬＡＬＡ、またはｐＶａｘ空ベクターのいずれかの筋肉内注射を受けた（１群当たりｎ＝５～６；ｐＤＶＳＦ－３ＬＡＬＡ及びｐＤＶＳＦ－３ＷＴの比較に対するｐ≦０．００８４）。（ｂ）抗体依存性感染増強暴露：ＡＧ１２９マウスは、高用量の非中和抗ＤＥＮＶｍＡｂ２Ｈ２を投与する５日前にｐＤＶＳＦ－３ＷＴ、ｐＤＶＳＦ－３ＬＡＬＡ、またはｐＶａｘ空ベクターのいずれかの筋肉内注射を受けた。３０分後、マウスに亜致死量のＤＥＮＶ２Ｓ２２１を暴露した（１群当たりｎ＝５～６；ｐＤＶＳＦ－３ＬＡＬＡ及びｐＤＶＳＦ－３ＷＴの比較に対するｐ≦０．００７２）。カプランマイヤー法による生存率曲線を（ａ～ｂ）に示す。
ｐＤＶＳＦ－３ＷＴ及びＬＡＬＡコード抗体のインビトロ機能分析を示す。（ａ）精製した組み換えＤＥＮＶＥタンパク質に対する、ｐＤＶＳＦ－３ＷＴまたはＬＡＬＡをトランスフェクトした２９３Ｔ細胞の上清中のヒトＩｇＧのＥＬＩＳＡ結合分析。（ｂ）抗体依存性感染増強は、Ｋ５６２細胞に追加する前にｐＤＶＳＦ－３ＷＴまたはＬＡＬＡの上清の連続希釈物でＤＥＮＶ１、２、３、または４をインキュベートすることで評価した。感染細胞の割合を示す。
抗体をコードするＤＮＡ構築物を送達した後のＡＧ１２９マウス中の抗ＤＥＮＶヒトＩｇＧレベルの暴露前レベルを示す。（ａ）血清中のＤＶＳＦ－３ＷＴまたはＤＶＳＦ－３ＬＡＬＡの全ヒトＩｇＧは、ＡＧ１２９マウス中のそれぞれのプラスミドをＤＮＡ筋肉内注射（ＤＥＮＶ２暴露１日前）及びＥＰした４日後にＥＬＩＳＡ法で測定した（１群当たりｎ＝５～６；ｐＤＶＳＦ－３ＷＴ及びｐＶａｘの比較に対するｐ≦０．０００５；ｐＤＶＳＦ－３ＬＡＬＡ及びｐＶａｘの比較に対するｐ≦０．０００１）。
増加したＤＥＮＶ１－４抗血清を産生したマウスにおける多数のＤＥＮＶ抗体コードプラスミドの送達を示す。（ａ）血清中のＤＶＳＦ－３ＷＴ、ＤＶＳＦ－１ＷＴ、またはＤＶＳＦ－３ＷＴ、及びＤＶＳＦ－１ＷＴの全ヒトＩｇＧは、１２９／Ｓｖマウス中のそれぞれのプラスミドをＤＮＡ筋肉内注射及びＥＰした７日後にＥＬＩＳＡ法で測定した（１群当たりｎ＝５；ｐＤＶＳＦ－１ＷＴ及びｐＤＶＳＦ－１＋３の比較に対するｐ≦０．００８８；ｐＤＶＳＦ－３ＷＴ及びｐＤＶＳＦ－１＋３の比較に対するｐ≦０．０２４０）。
上部パネルには、ＤＶＳＦ－３ＷＴは、ヒトＦｃｙＲ１ａに結合したが、ＤＶＳＦ－３ＬＡＬＡは、ＦｃｙＲ１ａに結合しなかったことを示す。下部の４つのパネルは、抗体依存性感染増強アッセイの結果を示す：ＤＶＳＦ－３ＬＡＬＡによるＤＥＮＶ－１、－２、－３、または－４のインキュベーションは、ヒト単球（Ｋ５６２細胞株）感染をもたらさなかったが、ＤＶＳＦ－３ＷＴは、ＤＥＮＶ－１、－２、及び－３の感染を高めた。
【発明を実施するための形態】
（【００１１】以降は省略されています）

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