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公開番号2025069157
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-04-30
出願番号2025002788,2023115159
出願日2025-01-08,2019-10-15
発明の名称TREM2安定化抗体
出願人ノバルティスアーゲー
代理人個人,個人,個人,個人
主分類C07K 16/28 20060101AFI20250422BHJP(有機化学)
要約【課題】ヒトミエロイド細胞に発現するトリガー受容体2(hTREM2)タンパク質に結合してそれを安定化させる抗体及びこれらの抗体の使用方法を提供する。
【解決手段】hTREM2タンパク質の免疫グロブリンスーパーファミリー(IgSF)ドメインに結合して前記hTREM2タンパク質を安定化させる抗体又はその抗原結合断片を提供する。特定のアミノ酸配列を有する上記抗体又はその抗原結合断片も提供する。これらの抗体又は抗体をコードするベクターは神経炎症性又は神経変性疾患疾患の治療に使用できる。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
ヒトミエロイド細胞上トリガー発現２（ｈｕｍａｎｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇｅｘｐｒ
ｅｓｓｉｏｎｏｎｍｙｅｌｏｉｄｃｅｌｌｓ２）（ｈＴＲＥＭ２）タンパク質の
免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）ドメインに結合して前記ｈＴＲＥＭ２タ
ンパク質（例えば配列番号１、２又は３）を安定化させる抗体又はその抗原結合断片。
続きを表示（約 1,500 文字）【請求項２】
ｈＴＲＥＭ２のＤ３９、Ｓ４０、Ｍ４１、Ｋ４２、Ｗ４４、Ｇ４５、Ｒ４６、Ｒ４７、
Ｈ６７、Ｎ６８、Ｌ６９、Ｗ７０、Ｌ７１、Ｌ７２、Ｆ７４、Ｌ７５、Ｒ７７、Ｄ８７、
Ｔ８８、Ｌ８９及びＧ９０からなる群から選択される１つ以上の残基に結合する、請求項
１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３】
ｈＴＲＥＭ２のＤ３９、Ｓ４０、Ｍ４１、Ｋ４２、Ｗ４４、Ｇ４５、Ｒ４６及びＲ４７
からなる群から選択される１つ以上の残基、Ｈ６７、Ｎ６８、Ｌ６９、Ｗ７０、Ｌ７１、
Ｌ７２、Ｆ７４、Ｌ７５及びＲ７７からなる群から選択される１つ以上の残基、並びにＤ
８７、Ｔ８８、Ｌ８９及びＧ９０からなる群から選択される１つ以上の残基に結合する、
請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項４】
ｈＴＲＥＭ２のＤ３９、Ｓ４０、Ｍ４１、Ｋ４２、Ｗ４４、Ｇ４５、Ｒ４６及びＲ４７
からなる群から選択される５つ以上の残基、Ｈ６７、Ｎ６８、Ｌ６９、Ｗ７０、Ｌ７１、
Ｌ７２、Ｆ７４、Ｌ７５及びＲ７７からなる群から選択される４つ以上の残基、並びにＤ
８７、Ｔ８８、Ｌ８９及びＧ９０からなる群から選択される３つ以上の残基に結合する、
請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項５】
ｈＴＲＥＭ２のＤ３９、Ｓ４０、Ｍ４１、Ｋ４２、Ｗ４４、Ｇ４５、Ｒ４６及びＲ４７
からなる群から選択される７つ以上の残基、Ｈ６７、Ｎ６８、Ｌ６９、Ｗ７０、Ｌ７１、
Ｌ７２、Ｆ７４、Ｌ７５及びＲ７７からなる群から選択される４つ以上の残基、並びにＤ
８７、Ｔ８８、Ｌ８９及びＧ９０からなる群から選択される３つ以上の残基に結合する、
請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項６】
ｈＴＲＥＭ２のＤ３９、Ｓ４０、Ｍ４１、Ｋ４２、Ｗ４４、Ｇ４５、Ｒ４６及びＲ４７
からなる群から選択される５つ以上の残基、残基Ｈ６７、Ｎ６８、Ｌ６９、Ｗ７０、Ｌ７
１、Ｌ７２、Ｆ７４、Ｌ７５及びＲ７７の全て、並びにＤ８７、Ｔ８８、Ｌ８９及びＧ９
０からなる群から選択される３つ以上の残基に結合する、請求項１に記載の抗体又はその
抗原結合断片。
【請求項７】
ｈＴＲＥＭ２のＳ４０、Ｍ４１、Ｗ４４、Ｇ４５、Ｗ７０、Ｌ７１、Ｌ７２、Ｆ７４、
Ｔ８８及びＬ８９からなる群から選択される１つ以上の残基に結合する、請求項１に記載
の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項８】
ｈＴＲＥＭ２のＳ４０、Ｍ４１、Ｗ４４、Ｇ４５、Ｗ７０、Ｌ７１、Ｌ７２、Ｆ７４、
Ｔ８８及びＬ８９からなる群から選択される２つ以上の残基に結合する、請求項１に記載
の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項９】
ｈＴＲＥＭ２のＳ４０、Ｍ４１、Ｗ４４、Ｇ４５、Ｗ７０、Ｌ７１、Ｌ７２、Ｆ７４、
Ｔ８８及びＬ８９からなる群から選択される３つ以上の残基に結合する、請求項１に記載
の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１０】
ｈＴＲＥＭ２のＳ４０、Ｍ４１、Ｗ４４、Ｇ４５、Ｗ７０、Ｌ７１、Ｌ７２、Ｆ７４、
Ｔ８８及びＬ８９からなる群から選択される４つ以上の残基に結合する、請求項１に記載
の抗体又はその抗原結合断片。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的手段により提出された配列表を含み、その全体が参
照により本明細書に組み込まれる。２０１９年９月１６日に作成された前記ＡＳＣＩＩの
複製は、ＰＡＴ０５８２５１＿ＳＴ２５．ｔｘｔと命名され、サイズが１４７，５５１バ
イトである。
続きを表示（約 4,300 文字）【０００２】
本発明は、ヒトミエロイド細胞に発現するトリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）タンパク質
に結合してそれを安定化させる抗体及びこれらの抗体の使用方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
ミエロイド細胞に発現するトリガー受容体又は「ＴＲＥＭ」は、マクロファージ、樹状
細胞、破骨細胞、ミクログリア、マスト細胞、単球、肺上皮細胞、皮膚ランゲルハンス細
胞、クッパー細胞、及び好中球など、様々な種類の骨髄系細胞に発現する一群の膜貫通糖
タンパク質である（Ｔａｋａｋｉ，Ｒ．ｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，２０
０６，２１４：１１８－２９）。ＴＲＥＭは、その細胞外ドメインに免疫グロブリン（Ｉ
ｇ）型の折り畳みを有し、そのため免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）に属
する。ＴＲＥＭ受容体は短い細胞内ドメインを含むが、シグナル伝達メディエーターのド
ッキングモチーフを欠いており、細胞活性化には、ＤＡＰ１２（１２ｋＤａのＤＮＡＸ活
性化タンパク質）などのアダプタータンパク質が必要である。ＴＲＥＭについては２つの
メンバー、ＴＲＥＭ１及びＴＲＥＭ２が報告されており、これらはいずれも免疫及び炎症
反応において重要な役割を果たしている。ヒトＴＲＥＭをコードする遺伝子は、ＴＲＥＭ
１、ＴＲＥＭ２、ＴＲＥＭ３、ＴＲＥＭ４及びＴＲＥＭ５をコードする遺伝子クラスター
、並びにＴＲＥＭ様遺伝子を担持する染色体６ｐ２１．１に位置する。
【０００４】
ＴＲＥＭ２は約４０ｋＤａの糖タンパク質であり、これはＮ－脱グリコシル化後に２６
ｋＤａに減少する。ＴＲＥＭ２タンパク質全体は、リーディングシグナルペプチド（アミ
ノ酸１～１８）、単一Ｖ型ＩｇＳＦ細胞外領域（アミノ酸１９～１３２）、ストーク領域
（アミノ酸１３３～１７２）、正電荷膜貫通ドメイン（アミノ酸１７３～１９７）、及び
サイトゾル尾部（アミノ酸１９８～２３０）からなる（Ｋｏｂｅｒｅｔａｌ．，Ｅｌ
ｉｆｅ５（２０１６）；Ｋｏｂｅｒｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４２９（
２０１７）１６０７－１６２９）。エキソン２によってコードされる細胞外領域は、３つ
の潜在的Ｎ－グリコシル化部位を含む単一のＶ型ＩｇＳＦドメインで構成される。推定上
の膜貫通領域は荷電リジン残基を含む。ＴＲＥＭ２の細胞質尾部はシグナル伝達モチーフ
を欠いており、シグナル伝達アダプター分子ＤＡＰ１２／ＴＲＹＲＯＢＰを通じてシグナ
ルを送ると考えられている。
【０００５】
ＴＲＥＭ２はＤＡＰ１２と物理的に会合し、ＤＡＰ１２は、ＴＲＥＭ２及びいくつもの
他の細胞表面受容体のシグナル伝達アダプタータンパク質として働く。ＤＡＰ１２の細胞
質ドメインは免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含む（Ｗｕｎｄｅｒｌｉｃ
ｈ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８８，３３０２７－３３０３６，２０１３）。この相互
作用性受容体の活性化後、ＤＡＰ１２には、Ｓｒｃキナーゼによる保存されたＩＴＡＭチ
ロシン残基のリン酸化が起こる。続くＳｙｋプロテインキナーゼの動員及び活性化により
、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）、ＰＩ３Ｋ、ＮＦκＢ及びホスホ
リパーゼＣγ（ＰＬＣγ）の活性化を含め、下流シグナル伝達経路が惹起される。
【０００６】
ＴＲＥＭ２は、リポ多糖類（ＬＰＳ）、熱ショックタンパク質６０、神経突起破片、細
菌、アポリポタンパク質Ｅ及び広範囲のアニオン性及び双性イオン性脂質、例えば、ホス
ファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルセリン（
ＰＳ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、カルジ
オリピン及びスフィンゴミエリンによって活性化し得る。ＴＲＥＭ２が活性化すると、ミ
クログリア及びマクロファージの貪食能が増加し、炎症誘発性サイトカインの放出が減少
し、及びＴＬＲシグナル伝達が抑制される。ＴＲＥＭ２はＣＳＦ－１受容体シグナル伝達
との相乗作用によってミクログリアの生存を維持する。さらに、ＴＲＥＭ２はプレキシン
Ａ１と相互作用して細胞接着及び運動性を調節する。ＴＲＥＭ２はまた、Ａβプラーク又
は神経細胞破片と接触するミクログリア細胞表面領域に濃密に存在する（Ｙｕａｎｅｔ
ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ９０（２０１６）７２４－７３９）。最近になって、この環境
でＴＲＥＭ２によって感知される一部のリガンド、例えばリン脂質及びミエリン脂質（Ｐ
ｏｌｉａｎｉｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１２５（２０１５）：２１
６１－２１７０）並びにＡｐｏＥ（Ａｔａｇｉｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ
．２９０（２０１５）：２６０４３－２６０５０；Ｂａｉｌｅｙｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２９０（２０１５）：２６０３３－２６０４２）が同定されている。
他のリガンドを挙げるならば、ＴＲＥＭ２はミクログリアへのＡβの取込みに寄与するた
め、Ａβ及びプラーク関連神経細胞破片であり得る（Ｘｉａｎｇｅｔａｌ．，ＥＭＢ
ＯＭｏｌ．Ｍｅｄ．８（２０１６）：９９２－１００４）。ＴＲＥＭ２はまた、アポト
ーシス細胞（Ｔａｋａｈａｓｈｉｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０１（２００
５），６４７－６５７）、ミエリン破片（Ｐｏｌｉａｎｉｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ
．Ｉｎｖｅｓｔ．１２５（２０１５）：２１６１－２１７０）及び細菌ビーズ（Ｃｅｎ
ｅｔａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．１８８（２０１３）２０１－２１２）の排除に
おいても役割を果たすことが示されている。ＴＲＥＭ２シグナル伝達は、取り込まれた被
食物の分解を促進し、脂質代謝、ミエリンの取込み及び細胞内分解に決定的に重要である
。
【０００７】
ＴＲＥＭ２は、エクトドメインシェディング及び膜内タンパク質分解による逐次的なタ
ンパク質分解プロセシングを受ける（Ｗｕｎｄｅｒｌｉｃｈ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．
２８８，３３０２７－３３０３６，２０１３）。エクトドメインシェディングの間に、Ａ
ＤＡＭ（ディスインテグリン及びメタロプロテイナーゼドメイン含有タンパク質）又はＢ
ＡＣＥ（βサイトＡＰＰ切断酵素）ファミリーのメンバーなどのプロテアーゼによってＴ
ＲＥＭ２のエクトドメインが放出される（Ｋｌｅｉｎｂｅｒｇｅｒ，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓ
ｌ．Ｍｅｄ．２０１４；６（２４３）：２４３ｒａ８６）。
【０００８】
エクトドメインが取り除かれた後、残りの膜に保持されている断片がγ－セクレターゼ
媒介性の膜内タンパク質分解によってさらにプロセシングされる。エクトドメインシェデ
ィングによって産生されるＴＲＥＭ２の可溶性断片（ｓＴＲＥＭ２）が、樹状細胞培養物
の上清中並びに非炎症性神経疾患及び多発性硬化症患者の血漿及びＣＳＦ（脳脊髄液）サ
ンプル中に観察されている（Ｋｌｅｉｎｂｅｒｇｅｒ，２０１４）。ヒトＣＳＦ中のシェ
ディングされたＴＲＥＭ２エクトドメイン、すなわちｓＴＲＥＭ２は、潜在的なアルツハ
イマー病（ＡＤ）バイオマーカーとして評価されており、一般に老化過程で増加すること
が示されている（Ｓｕａｒｅｚ－Ｃａｌｖｅｔ，ＥＭＢＯＭｏｌ．Ｍｅｄ．８，４６６
－４７６，２０１６）。ＡＤの経過における詳細な分析により、ｓＴＲＥＭ２がＡＤ初期
に臨床症状が現れる前に増加し、ＭＣＩ－ＡＤでピークに達し、ＡＤ型認知症では上昇し
たまま、但しＭＣＩ－ＡＤ段階と比較すると低いレベルに留まることが明らかになった（
Ｓｕａｒｅｚ－Ｃａｌｖｅｔ，２０１６）。
【０００９】
疾患のピークにおけるＴＲＥＭ２発現の増加は、消散を促す（例えば、腹膜炎、創傷治
癒）（Ｔｕｒｎｂｕｌｌ，２００６；Ｇａｗｉｓｈ，２０１５）。神経炎症のような慢性
炎症条件下では、ＴＲＥＭ２は絶えずシェディングされ、ミクログリア及びマクロファー
ジにおいてそのシグナル伝達機能を発揮することができない。従って、細胞表面でのＴＲ
ＥＭ２のシェディングを安定化させ及び／又は防止すると、ミクログリア及びマクロファ
ージにおいて機能性のシグナル伝達能を有するＴＲＥＭ２発現が回復することになる。
【００１０】
ヒト遺伝学研究では、ｓＴＲＥＭ２がないことよりむしろ、表面ＴＲＥＭ２が失われる
ことが疾患リスクを左右すると指摘されている。例えば、ＴＲＥＭ２タンパク質、例えば
配列番号１の４７位におけるＲからＨへのアミノ酸変異は、細胞表面発現の僅かな低下（
Ｋｌｅｉｎｂｅｒｇｅｒ２０１４）、及びＴＲＥＭ２のリガンド結合能の低下（Ｗａｎ
ｇ２０１５、Ａｔａｇｉ２０１５、Ｂａｉｌｅｙ２０１５）を引き起こす。ＴＲＥ
Ｍ２におけるアミノ酸変異Ｔ６６Ｍは、細胞表面におけるＴＲＥＭ２発現の欠損をもたら
し（Ｋｌｅｉｎｂｅｒｇｅｒ２０１４）、ひいては可溶性ＴＲＥＭ２が生成されなくな
る。ＴＲＥＭ２の切断部位における変異Ｈ１５７Ｙは、ｓＴＲＥＭ２の発現を増強して完
全長膜結合型ＴＲＥＭ２を減少させ、ＡＤリスクの増加と関連付けられる（Ｔｈｏｒｎｔ
ｏｎ２０１７、Ｓｃｈｌｅｐｃｋｏｗ２０１７）。従って、これらの遺伝学研究から
、ｓＴＲＥＭ２の減少及び細胞膜結合型ＴＲＥＭ２の増加の両方に細胞表面のＴＲＥＭ２
の安定化が望ましいことが示唆される。
（【００１１】以降は省略されています）

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