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公開番号2025038022
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-03-18
出願番号2024215015,2023061539
出願日2024-12-10,2014-12-24
発明の名称抗TROP2抗体-薬物コンジュゲート
出願人第一三共株式会社,北海道公立大学法人札幌医科大学
代理人個人,個人,個人
主分類C07K 16/28 20060101AFI20250311BHJP(有機化学)
要約【課題】抗腫瘍効果と安全性面に優れる、優れた治療効果を有する抗体-薬物コンジュゲートの製造方法の提供。
【解決手段】抗TROP2抗体を還元条件で処理した後に次の化合物:(maleimid-N-yl)-CH₂CH₂-C(=O)-GGFG-NH-CH₂CH₂-C(=O)-(NH-DX)を反応させる工程を含む、次の薬物-リンカー構造:-(Succinimid-3-yl-N)-CH₂CH₂-C(=O)-GGFG-NH-CH₂CH₂-C(=O)-(NH-DX)をチオエーテル結合を介して抗TROP2抗体に結合させた抗体-薬物コンジュゲートの製造方法。式中、-(NH-DX)は、次式:
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で示される基であり、-GGFG-は、-Gly-Gly-Phe-Gly-を示す。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
抗ＴＲＯＰ２抗体を還元条件で処理した後に次の化合物：
(maleimid-N-yl)-CH
2
CH
2
-C(=O)-GGFG-NH-CH
2
CH
2
-C(=O)-(NH-DX)
を反応させる工程を含む、
次の薬物－リンカー構造：
-(Succinimid-3-yl-N)-CH
2
CH
2
-C(=O)-GGFG-NH-CH
2
CH
2
-C(=O)-(NH-DX)
をチオエーテル結合を介して抗ＴＲＯＰ２抗体に結合させた抗体－薬物コンジュゲートの製造方法。
（式中、(maleimid-N-yl)-は、次式：
JPEG
2025038022000043.jpg
21
17
で示される、窒素原子が結合部位である基であり、
-(Succinimid-3-yl-N)-は、次式：
JPEG
2025038022000044.jpg
21
19
で示される構造であり、このものの３位で抗体と結合し、１位の窒素原子上でこれを含むリンカー構造内のメチレン基と結合し、
-(NH-DX)は、次式：
JPEG
2025038022000045.jpg
44
53
で示される、１位のアミノ基の窒素原子が結合部位となっている基であり、
-GGFG-は、-Gly-Gly-Phe-Gly-のテトラペプチド残基を示す。）
続きを表示（約 1,600 文字）【請求項２】
薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が２から８個の範囲である請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
薬物－リンカー構造の１抗体あたりの平均結合数が３から８個の範囲である請求項１に記載の製造方法。
【請求項４】
抗ＴＲＯＰ２抗体が、配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１、配列番号２４に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２、及び配列番号２５に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３を含む重鎖、並びに、配列番号２６に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１、配列番号２７に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２、及び配列番号２８に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３を含む軽鎖、を含む、請求項１－３のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項５】
抗ＴＲＯＰ２抗体が、
配列番号１２においてアミノ酸番号２０乃至１４０に記載のアミノ酸配列からなる重鎖の可変領域及び配列番号１８においてアミノ酸番号２１乃至１２９に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖の可変領域、
配列番号１４においてアミノ酸番号２０乃至１４０に記載のアミノ酸配列からなる重鎖の可変領域及び配列番号１８においてアミノ酸番号２１乃至１２９に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖の可変領域、
配列番号１４においてアミノ酸番号２０乃至１４０に記載のアミノ酸配列からなる重鎖の可変領域及び配列番号２０においてアミノ酸番号２１乃至１２９に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖の可変領域、並びに、
配列番号１６においてアミノ酸番号２０乃至１４０に記載のアミノ酸配列からなる重鎖の可変領域及び配列番号２２においてアミノ酸番号２１乃至１２９に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖の可変領域、
からなる群から選択される重鎖の可変領域及び軽鎖の可変領域を含む、請求項１－３のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項６】
抗ＴＲＯＰ２抗体が、
配列番号１２においてアミノ酸番号２０乃至４７０に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号１８においてアミノ酸番号２１乃至２３４に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖、
配列番号１４においてアミノ酸番号２０乃至４７０に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号１８においてアミノ酸番号２１乃至２３４に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖、
配列番号１４においてアミノ酸番号２０乃至４７０に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号２０においてアミノ酸番号２１乃至２３４に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖、並びに、
配列番号１６においてアミノ酸番号２０乃至４７０に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号２２においてアミノ酸番号２１乃至２３４に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖、
からなる群から選択される重鎖及び軽鎖を含む、請求項１－３のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項７】
抗ＴＲＯＰ２抗体が、配列番号１２においてアミノ酸番号２０乃至１４０に記載のアミノ酸配列からなる重鎖の可変領域及び配列番号１８においてアミノ酸番号２１乃至１２９に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖の可変領域を含む、請求項５に記載の製造方法。
【請求項８】
抗ＴＲＯＰ２抗体が、配列番号１２においてアミノ酸番号２０乃至４７０に記載のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号１８においてアミノ酸番号２１乃至２３４に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、請求項６に記載の製造方法。
【請求項９】
抗ＴＲＯＰ２抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、請求項６に記載の製造方法。
【請求項１０】
抗ＴＲＯＰ２抗体の重鎖カルボキシル末端のリシン残基が欠失している、請求項８に記載の製造方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗ＴＲＯＰ２抗体と抗腫瘍性薬物とをリンカー構造部分を介して結合させた
、抗腫瘍薬として有用な抗体－薬物コンジュゲートに関する。
続きを表示（約 4,200 文字）【背景技術】
【０００２】
癌細胞表面に発現し、かつ細胞に内在化できる抗原に結合する抗体に、細胞毒性を有す
る薬物を結合させた抗体－薬物コンジュゲート（Antibody-Drug Conjugate；ADC）は、癌
細胞に選択的に薬物を送達できることによって、癌細胞内に薬物を蓄積させ、癌細胞を死
滅させることが期待できる（非特許文献１～３参照）。ADCとして例えば、抗CD33抗体に
カリチアマイシンを結合させたMylotarg（登録商標；ゲムツズマブオゾガマイシン）が急
性骨髄性白血病の治療薬として認可されている。また、抗CD30抗体にオーリスタチンＥを
結合させたAdcetris（登録商標；ブレンツキシマブベドティン）がホジキンリンパ腫と未
分化大細胞リンパ腫の治療薬として最近認可された（非特許文献４参照）。これまでに認
可されたADCに含有される薬物は、DNA又はチューブリンを標的としている。
【０００３】
抗腫瘍性の低分子化合物としてトポイソメラーゼＩを阻害して抗腫瘍作用を発現する化
合物であるカンプトテシン誘導体が知られている。その中で下式
【０００４】
TIFF
2025038022000001.tif
57
70
【０００５】
で示される抗腫瘍性化合物（エキサテカン、化学名：(1S,9S)-1-アミノ-9-エチル-5-フル
オロ-2,3-ジヒドロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-1H,12H-ベンゾ[de]ピラノ[3',4':6,7]インド
リジノ[1,2-b]キノリン-10,13(9H,15H)-ジオン）は、水溶性のカンプトテシン誘導体であ
る（特許文献１、２）。この化合物は、現在臨床で用いられているイリノテカンとは異な
り、抗腫瘍効果の発現には酵素による活性化を必要としない。また、イリノテカンの薬効
本体であるSN-38や、同じく臨床で用いられているトポテカンよりもトポイソメラーゼＩ
阻害活性が強く、invitroで種々の癌細胞に対して、より強い殺細胞活性を有している。
特にP-glycoproteinの発現によってSN-38等に耐性を示す癌細胞に対しても効果を示した
。また、マウスのヒト腫瘍皮下移植モデルでも強い抗腫瘍効果を示し、臨床試験が行われ
たものの上市には至っていない（非特許文献５～１０参照）。エキサテカンがADCとして
有効に作用するかについては明らかではなかった。
【０００６】
DE-310は、生分解性のカルボキシメチルデキストランポリアルコールポリマーにエキサ
テカンを、GGFGペプチドスペーサーを介して結合させた複合体である（特許文献３）。エ
キサテカンを高分子プロドラッグ化することによって、高い血中滞留性を保持させ、さら
に腫瘍新生血管の透過性の亢進と腫瘍組織滞留性を利用して、受動的に腫瘍部位への指向
性を高めたものである。DE-310は、酵素によるペプチドスペーサーの切断によって、活性
本体であるエキサテカン、及びグリシンがアミノ基に結合しているエキサテカンが持続的
に遊離され、その結果薬物動態が改善される。非臨床試験における種々の腫瘍の評価モデ
ルにおいて、DE-310は、ここに含まれるエキサテカンの総量がエキサテカン単剤の投与時
よりも減少しているのにも拘らず、単剤の投与時よりもより高い有効性を示した。DE-310
に関しては臨床試験が実施されて有効例も確認され、活性本体が正常組織よりも腫瘍に集
積することが確認されたとの報告がある一方、ヒトにおける腫瘍へのDE-310及び活性本体
の集積は正常組織への集積と大差なく、ヒトでは受動的なターゲティングは見られなかっ
たとの報告もある（非特許文献１１～１４参照）。結果としてDE-310も上市には至らず、
エキサテカンがこの様なターゲティングを指向した薬物として有効に機能するかについて
は明らかではなかった。
【０００７】
DE-310の関連化合物として、-NH-(CH
2
)
4
-C(=O)-で示される構造部分を-GGFG-スペーサ
ーとエキサテカンの間に挿入し、-GGFG-NH-(CH
2
)
4
-C(=O)-をスペーサー構造とする複合体
も知られているが（特許文献４）、同複合体の抗腫瘍効果については全く知られていない
。
【０００８】
ヒトＴＲＯＰ２（ＴＡＣＳＴＤ２：ｔｕｍｏｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｃａｌｃｉｕ
ｍｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ２，ＧＡ７３３－１，ＥＧＰ－１，Ｍ１Ｓ１
；以下、ｈＴＲＯＰ２と表記する）は、３２３アミノ酸残基からなる１回膜貫通型の１型
細胞膜蛋白質である。以前より、ヒト栄養膜細胞（ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｓ）と癌細胞
に共通する、免疫抵抗性に関与する細胞膜蛋白質の存在（非特許文献１５）が示唆されて
いたが、ヒト絨毛癌細胞株の細胞膜蛋白質に対するモノクローナル抗体（１６２－２５．
３，１６２－４６．２）により認識される抗原分子が特定され、ヒト栄養膜細胞に発現す
る分子の一つとしてＴＲＯＰ２と命名された（非特許文献１６）。後に同じ分子が他の研
究者によって発見され、胃癌細胞株を免疫して得られたマウスモノクローナル抗体ＧＡ７
３３によって認識される腫瘍抗原ＧＡ７３３－１（非特許文献１７）、非小細胞肺癌細胞
免疫によって得られたマウスモノクローナル抗体ＲＳ７－３Ｇ１１により認識される上皮
糖蛋白質（ＥＧＰ－１；非特許文献１８）とも呼ばれたが、１９９５年にＴＲＯＰ２遺伝
子がクローニングされ、これらが同一の分子であることが確認された（非特許文献１９）
。ｈＴＲＯＰ２のＤＮＡ配列及びアミノ酸配列は公的データベース上に公開されており、
例えばＮＭ＿００２３５３，ＮＰ＿００２３４４（ＮＣＢＩ）等のアクセッション番号に
より参照可能である。
ｈＴＲＯＰ２遺伝子は約５０％の相同性を持つヒトＴｒｏｐ－１（ＥｐＣＡＭ，ＥＧＰ
－２，ＴＡＣＳＴＤ１）と共にＴＡＣＳＴＤ遺伝子ファミリーを構成している（非特許文
献２１）。ｈＴＲＯＰ２蛋白質は、Ｎ末端２６アミノ酸残基から成るシグナル配列、２４
８アミノ酸残基から成る細胞外ドメイン、２３アミノ酸残基から成る細胞膜貫通ドメイン
、２６アミノ酸残基から成る細胞内ドメインで構成されている。細胞外ドメインには４つ
のＮ結合型糖鎖付加部位があり、見かけ上の分子量は理論計算値３５キロダルトンより１
０キロダルトン前後増加することが知られている（非特許文献１９）。
これまでｈＴＲＯＰ２の生理学的リガンドは同定されておらず、分子機能は明らかにさ
れていないが、腫瘍細胞においてカルシウムシグナルを伝達することが示され（非特許文
献２０）、またＣａ
2+
依存性キナーゼであるプロテインキナーゼＣにより細胞内セリン３
０３残基がリン酸化されること（非特許文献１８）や、細胞内ドメインにＰＩＰ
2
結合配
列を有することから、腫瘍細胞におけるシグナル伝達機能が示唆されている（非特許文献
２２）。
臨床検体を用いた免疫組織化学解析により、ｈＴＲＯＰ２は種々の上皮細胞癌種におい
て過剰発現していること、かつ、正常組織においてはいくつかの組織の上皮細胞での発現
に限られ、その発現量も腫瘍組織と比較して低いことが示されている（非特許文献２３～
２７）。またｈＴｒｏｐ２の発現は大腸癌（非特許文献２３）、胃癌（非特許文献２４）
、膵臓癌（非特許文献２５）、口腔癌（非特許文献２６）、グリオーマ（非特許文献２７
）において予後不良と相関することも報告されている。
さらに大腸癌細胞を用いたモデルから、ｈＴＲＯＰ２の発現が腫瘍細胞の足場非依存的
細胞増殖及び免疫不全マウスでの腫瘍形成に関与していることが報告されている（非特許
文献２８）。
【０００９】
この様な癌との関連性を示唆する情報から、これまでに複数の抗ｈＴＲＯＰ２抗体が樹
立され、その抗腫瘍効果が検討されている。この中にはコンジュゲート化されていない抗
体単独でヌードマウス異種移植モデルにおける抗腫瘍活性を示すもの（特許文献５～８）
の他、抗体と抗細胞薬剤とのADCとして抗腫瘍活性を示すもの（特許文献９～１２）等が
開示されている。しかしながら、それらの活性の強さや適用範囲はまだ十分ではなく、ｈ
ＴＲＯＰ２を治療標的とする未充足医療ニーズが存在している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
特開平５－５９０６１号公報
特開平８－３３７５８４号公報
国際公開第１９９７/４６２６０号
国際公開第２０００/２５８２５号
国際公開第２００８/１４４８９１号
国際公開第２０１１/１４５７４４号
国際公開第２０１１/１５５５７９号
国際公開第２０１３/０７７４５８号
国際公開第２００３/０７４５６６号
国際公開第２０１１/０６８８４５号
国際公開第２０１３/０６８９４６号
米国特許第７９９９０８３号明細書
【非特許文献】
（【００１１】以降は省略されています）

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