特許ウォッチ

公開番号2025026135
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-02-21
出願番号2023131525
出願日2023-08-10
発明の名称5’キャップ構造を有するRNAの分離剤
出願人国立研究開発法人産業技術総合研究所
代理人個人,個人,個人,個人,個人,個人,個人,個人
主分類C07H 21/02 20060101AFI20250214BHJP(有機化学)
要約【課題】5’キャップ構造を有するRNAを安価に効率よく分離することができる、5’キャップ構造を有するRNAの分離剤等を提供すること。
【解決手段】式(I)
A-L-R¹ (I)
(式中、Aは、反応性官能基を有する分離担体残基を表し、Lは、リンカーを表し、R¹は、7-メチルグアノシンの7-メチルグアニン部分と反応して保護基を形成する基を表す)で表される化合物を含有する、末端が7-メチルグアニル酸残基である5’キャップ構造を有するRNAの分離剤等を提供する。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
式（Ｉ）
Ａ－Ｌ－Ｒ
１
（Ｉ）
（式中、Ａは、反応性官能基を有する分離担体残基を表し、Ｌは、リンカーを表し、Ｒ
１
は、７－メチルグアノシンの７－メチルグアニン部分と反応して保護基を形成する基を表す）で表される化合物を含有する、末端が７－メチルグアニル酸残基である５’キャップ構造を有するＲＮＡの分離剤。
続きを表示（約 1,200 文字）【請求項２】
Ｒ
１
が－Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ（＝Ｏ）Ｈである、請求項１に記載の分離剤。
【請求項３】
ＡにおけるＬとの結合部分の基が－Ｃ（＝Ｏ）－であり、Ｌが式（ＩＩ）
JPEG
2025026135000016.jpg
38
96
（式中、Ｒ
２
は、水素またはメチルを表し、Ｒ
３
およびＲ
４
は、同一または異なって水素、低級アルキル、低級アルコキシまたはハロゲンを表し、ｎは、１～１０の整数を表し、ｎが２以上のとき、各Ｒ
２
は、同一でも異なっていてもよい）で表される基である、請求項２に記載の分離剤。
【請求項４】
Ｒ
２
、Ｒ
３
およびＲ
４
が水素であり、ｎが４である、請求項３に記載の分離剤。
【請求項５】
分離担体が、磁性を有するビーズ状分離担体、ガラスのビーズ状分離担体、またはラテックスのビーズ状分離担体である、請求項１～４のいずれか一項に記載の分離剤。
【請求項６】
分離担体が、磁性を有するビーズ状分離担体である、請求項１～４のいずれか一項に記載の分離剤。
【請求項７】
ＲＮＡがｍＲＮＡである、請求項１～４のいずれか一項に記載の分離剤。
【請求項８】
式（Ｉａ）
JPEG
2025026135000017.jpg
46
105
（式中、Ａ’は、Ａ’が結合する－ＮＨ－との結合部分の基が－Ｃ（＝Ｏ）－である分離担体残基を表し、Ｒ
２
は、水素またはメチルを表し、Ｒ
３
およびＲ
４
は、同一または異なって水素、低級アルキル、低級アルコキシまたはハロゲンを表し、ｎは、１～１０の整数を表す）で表される化合物。
【請求項９】
Ｒ
２
、Ｒ
３
およびＲ
４
が水素であり、ｎが４である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
式（Ｖ）
JPEG
2025026135000018.jpg
35
143
（式中、Ａは、反応性官能基を有する分離担体残基を表し、Ｌは、リンカーを表し、Ｒ
５
は、水素またはメチルを表し、Ｒ
6
は、水素または式（ＩＶ）
JPEG
2025026135000019.jpg
40
87
（式中、Ｒ
７
は、Ｒ
５
が水素のとき水素を表し、Ｒ
５
がメチルのとき水素またはメチルを表す）を表す）で表される化合物。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、５’キャップ構造を有するＲＮＡの分離剤等に関する。
続きを表示（約 1,700 文字）【背景技術】
【０００２】
ｍＲＮＡは、５’末端に７－メチルグアノシン由来の５’キャップ構造を有する。例えばｍＲＮＡワクチン等を製造する際には、この５’キャップ構造を有するｍＲＮＡと５’キャップ構造を有さないｍＲＮＡとを分離することが望ましい。
【０００３】
５’キャップ構造を有するｍＲＮＡと５’キャップ構造を有さないｍＲＮＡとを含む混合物から５’キャップ構造を有するｍＲＮＡを分離する方法としては、例えば、キャップ形成されていないＲＮＡのみをＲＮＡポリフォスファターゼで消化し、キャップ形成されているＲＮＡを単離する方法（特許文献１等）、レポーター部分（例えば、ビオチン）を有するジヌクレオチドをキャップされたＲＮＡに結合させ、さらに当該レポーター部分を基質に結合させた後、得られた生成物をキャップされていないＲＮＡから分離する工程を含む方法（特許文献２）等が知られているが、これらの方法では、高価なジヌクレオチドの使用を必要とする、精製効率が満足できるものではないといった課題がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
特開２０１１－５２１６２６号公報
国際公開第２００９／０５８９１１号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、５’キャップ構造を有するＲＮＡを安価に効率よく分離することができる、５’キャップ構造を有するＲＮＡの分離剤等を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、上記課題に対して鋭意検討した結果、反応性官能基を有する分離担体にリンカーを介してオキサリル基を有する化合物をＲＮＡの５’キャップ構造に結合させることにより、５’キャップ構造を有するＲＮＡを容易に分離することができることを見出し、かかる知見に基づいてさらに研究を進めることによって、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、以下のとおりである。
【０００７】
［１］式（Ｉ）
Ａ－Ｌ－Ｒ
１
（Ｉ）
（式中、Ａは、反応性官能基を有する分離担体残基を表し、Ｌは、リンカーを表し、Ｒ
１
は、７－メチルグアノシンの７－メチルグアニン部分と反応して保護基を形成する基を表す）で表される化合物を含有する、５’キャップ構造を有するＲＮＡの分離剤。
［２］Ｒ
１
が－Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ（＝Ｏ）Ｈである、上記［１］に記載の分離剤。
［３］ＡにおけるＬとの結合部分の基が－Ｃ（＝Ｏ）－であり、Ｌが式（ＩＩ）
【０００８】
JPEG
2025026135000001.jpg
38
96
【０００９】
（式中、Ｒ
２
は、水素またはメチルを表し、Ｒ
３
およびＲ
４
は、同一または異なって水素、低級アルキル、低級アルコキシまたはハロゲンを表し、ｎは、１～１０の整数を表し、ｎが２以上のとき、各Ｒ
２
は、同一でも異なっていてもよい）で表される基である、上記［１］または［２］に記載の分離剤。
［４］Ｒ
２
、Ｒ
３
およびＲ
４
が水素であり、ｎが４である、上記［３］に記載の分離剤。
［５］分離担体が、磁性を有するビーズ状分離担体、ガラスのビーズ状分離担体、またはラテックスのビーズ状分離担体である、上記［１］～［４］のいずれかに記載の分離剤。
［６］分離担体が、磁性を有するビーズ状分離担体である、上記［１］～［４］のいずれかに記載の分離剤。
［７］ＲＮＡがｍＲＮＡである、上記［１］～［６］のいずれかに記載の分離剤。
［８］式（Ｉａ）
【００１０】
JPEG
2025026135000002.jpg
46
105
（【００１１】以降は省略されています）

関連特許