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公開番号2025024032
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-02-19
出願番号2024195157,2023099006
出願日2024-11-07,2014-07-31
発明の名称増殖分化因子15(GDF-15)の構築物
出願人アムジエン・インコーポレーテツド
代理人弁理士法人川口國際特許事務所
主分類C07K 19/00 20060101AFI20250212BHJP(有機化学)
要約【課題】GDF15及びその変異体を含む構築物を提供する。
【解決手段】GDF15領域とFcドメインとを含む融合タンパク質が提供される。種々の実施形態では、GDF15及びその変異体を含む構築物は代謝性障害の治療または改善に使用することができる。種々の実施形態では、代謝性の疾患または障害は、2型糖尿病、肥満、脂肪異常症、高いグルコースレベル、高いインスリンレベル及び糖尿病性腎症である。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
ＧＤＦ１５領域とＦｃドメインとを含む融合タンパク質。
続きを表示（約 1,400 文字）【請求項２】
前記Ｆｃドメインが、配列番号１６、２２、２８、２９、３３、３５、３８、４８、８５、９１、１０６、１３２、１４１、１４８、１５５、１６２、１６９、１７６、１８３、１９２、１９９、２０６、２１３、２２０、２２７、２３３、２３６、２６８、２７５、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１及び３０２から成る群から選択される配列を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３】
前記ＧＤＦ１５領域が配列番号４、８、１２、２５、５２及び５５から成る群から選択される配列を含む、請求項２に記載の融合タンパク質。
【請求項４】
前記ＧＤＦ１５領域と前記Ｆｃドメインがポリペプチドリンカーによって連結される、請求項２に記載の融合タンパク質。
【請求項５】
前記ポリペプチドリンカーが配列番号１８、３０、３４、４０、５８、６１、６４、６９、７２、７５、７８、１１３、１１６、１１９、１２２、１２５、１２８から成る群から選択される、請求項４に記載の融合タンパク質。
【請求項６】
前記融合タンパク質が、配列番号４６、２４、２７、３２、３７、２０、４２、５０、５４、５７、６０、６３、６６、６８、７１、７４、７７、８２、８４、８８、９３、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０８、１３４、１３７、１３９、１４３、１４６、１５０、１５３、２６９、２７２、２７６、２７９、１５７、１６０、１６４、１６７、１７１、１７４、１７８、１８１、１８５、１８８、１９４、１９７、２０１、２０４、２０８、２１１、２１５、２１８、２２２、２２５、２２９、２３２、２３３、２３８及び２４０から成る群から選択される配列を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項７】
前記融合タンパク質が２以上のＦｃドメインを含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項８】
（ｉ）ＧＤＦ１５領域と第１のＦｃドメインとを含む第１のポリペプチド鎖と、（ｉｉ）第２のＦｃドメインを含む第２のポリペプチド鎖とを含む二量体。
【請求項９】
前記第１のＦｃドメインが、配列番号１６、２２、２８、２９、３３、３５、３８、４８、８５、９１、１０６、１３２、１４１、１４８、１５５、１６２、１６９、１７６、１８３、１９２、１９９、２０６、２１３、２２０、２２７、２３３、２３６、２６８、２７５、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１及び３０２から成る群から選択される配列を含む、請求項８に記載の二量体。
【請求項１０】
第２のＦｃドメインが、配列番号１６、２２、２８、２９、３３、３５、３８、４８、８５、９１、１０６、１３２、１４１、１４８、１５５、１６２、１６９、１７６、１８３、１９２、１９９、２０６、２１３、２２０、２２７、２３３、２３６、２６８、２７５、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１及び３０２から成る群から選択される配列を含む、請求項９に記載の二量体。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式にて電子的に提出されている、その全体が参照によって本明細書に組み入れられる配列表を含有する。当該ＡＳＣＩＩコピーは２０１４年７月２９日に作成され、Ａ－１８５０－ＷＯ－ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔと名付けられ、６３０，２００バイトのサイズである。
続きを表示（約 3,800 文字）【０００２】
本開示は、ＧＤＦ１５領域を含むポリペプチドを含む単量体及び多量体に関する。
【背景技術】
【０００３】
増殖分化因子１５（ＧＤＦ１５）はＴＧＦβスーパーファミリーの分岐したメンバーである。それはまた、マクロファージ阻害サイトカイン１（ＭＩＣ１）（Ｂｏｏｔｃｏｖ，ＭＲ，１９９７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９４：１１５１４－９）、胎盤骨形態形成因子（ＰＬＡＢ）（Ｈｒｏｍａｓ，Ｒ，１９９７，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１３５４：４０－４）、胎盤形質転換成長因子β（ＰＴＧＦＢ）（Ｌａｗｔｏｎ，ＬＮ，１９９７，Ｇｅｎｅ．２０３：１７－２６）、前立腺由来因子（ＰＤＦ）（Ｐａｒａｌｋａｒ，ＶＭ，１９９８，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：１３７６０－７）及び非ステロイド性抗炎症薬活性化遺伝子（ＮＡＧ－１）（Ｂａｅｋ，ＳＪ，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：３３３８４－９２）とも呼ばれる。
【０００４】
ヒトのＧＤＦ１５遺伝子は第１９染色体ｐ１３．２－１３．１に位置し、ラットのＧＤＦ１５遺伝子は第１６染色体に位置し、マウスのＧＤＦ１５遺伝子は第８染色体に位置する。ＧＤＦ１５のオープンリーディングフレームは２つのエクソンにまたがる（Ｂｏｔｔｎｅｒ，Ｍ，１９９９，Ｇｅｎｅ．２３７：１０５－１１及びＮＣＢＩ）。成熟ＧＤＦ１５ペプチドは他のファミリーメンバーと低い相同性を共有する（Ｋａｔｏｈ，Ｍ，２００６，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．１７：９５１－５．）。
【０００５】
ＧＤＦ１５は、二塩基性切断部位で切断されてカルボキシ末端の成熟ペプチドを解放する大きな前駆体タンパク質として合成される。マウス及びラットのＧＤＦ１５プレプロペプチドは双方とも３０３アミノ酸を含有する。ヒトの完全長前駆体は３０８アミノ酸を含有する。齧歯類の成熟ペプチドはＲＧＲＲ（配列番号１）の切断部位でのプロセッシングの後、１１５アミノ酸を含有する。ヒトの成熟ペプチドはＲＧＲＲＲＡＲ（配列番号２）の切断部位でのプロセッシングの後、１１２アミノ酸を含有する。ヒトの成熟ＧＤＦ１５ペプチドはラット及びマウスの成熟ＧＤＦ１５ペプチドと６６．１％及び６８．１％の配列類似性を共有する（Ｂｏｔｔｎｅｒ，Ｍ，１９９９，Ｇｅｎｅ．２３７：１０５－１１；Ｂａｕｓｋｉｎ，ＡＲ，２０００，ＥＭＢＯＪ．１９：２２１２－２０；ＮＣＢＩ）。成熟ＧＤＦ１５ペプチドにはグリコシル化部位がない。
【０００６】
成熟ＧＤＦ１５ペプチドは、ＴＧＦβスーパーファミリーのメンバーに典型的であるシステインノットモチーフ（３つの鎖内ジスルフィド結合を有する）の形成と単一の鎖間ジスルフィド結合に必要とされる７つの保存されたシステイン残基を含有する。成熟ＧＤＦ１５ペプチドはさらに、４番目の鎖内ジスルフィド結合を形成する２つの追加のシステイン残基を含有する。生物学的に活性のあるＧＤＦ１５は１つの鎖間ジスルフィド結合によって共有結合する成熟ペプチドの２５ＫＤのホモ二量体である。
【０００７】
ＧＤＦ１５の循環レベルは、複数の病理学的な及び生理的な状態で、最も顕著には妊娠（Ｍｏｏｒｅ，ＡＧ，２０００．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．８５：４７８１－４７８８）、β－サラセミア（Ｔａｎｎｏ，Ｔ，２００７，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１３：１０９６－１０１；Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ，ＭＢ，２００８，Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．８８：１０２６－３１）及び先天性赤血球異形成貧血（Ｔａｍａｒｙ，Ｈ，２００８，Ｂｌｏｏｄ．１１２：５２４１－４）において上昇することが報告されている。ＧＤＦ１５は文献報告では複数の生物活性に関連付けられている。ＧＤＦ１５のノックアウト及びトランスジェニックマウスの研究は、ＧＤＦ１５が虚血／再潅流誘導性のまたは過重負担誘導性の心臓傷害に対して保護的であり得る（ＫｅｍｐｆＴ，２００６，Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．９８：３５１－６０；Ｘｕ，Ｊ，２００６，Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．９８：３４２－５０）、加齢関連性の運動ニューロン及び感覚ニューロンの喪失に対して保護的であり得る（Ｓｔｒｅｌａｕ，Ｊ，２００９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２９：１３６４０－８）、腎臓における代謝性アシドーシスに対して軽度に保護的であり得る、及び癌患者において悪液質の原因となり得る（Ｊｏｈｎｅｎ，Ｈ，２００７，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１１：１３３３－４０）ことを示唆した。多数のグループも細胞のアポトーシス及び増殖におけるＧＤＦ１５の役割を研究し、異なる細胞培養及び異種移植モデルを用いて議論の余地がある結果を報告している。トランスジェニックマウスにおける研究は、ＧＤＦ１５が腸及び肺における発癌性物質またはＡｐｃの変異が誘導した腫瘍に対して保護的であることを示した（Ｂａｅｋ，ＳＪ，２００６，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．１３１：１５５３－６０；Ｃｅｋａｎｏｖａ，Ｍ，２００９，ＣａｎｃｅｒＰｒｅｖ．Ｒｅｓ．２：４５０－８）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
Ｂｏｏｔｃｏｖ，ＭＲ，１９９７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９４：１１５１４－９
Ｈｒｏｍａｓ，Ｒ，１９９７，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１３５４：４０－４
Ｌａｗｔｏｎ，ＬＮ，１９９７，Ｇｅｎｅ．２０３：１７－２６
Ｐａｒａｌｋａｒ，ＶＭ，１９９８，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：１３７６０－７
Ｂａｅｋ，ＳＪ，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：３３３８４－９２
Ｂｏｔｔｎｅｒ，Ｍ，１９９９，Ｇｅｎｅ．２３７：１０５－１１及びＮＣＢＩ
Ｋａｔｏｈ，Ｍ，２００６，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．１７：９５１－５．）。
Ｂａｕｓｋｉｎ，ＡＲ，２０００，ＥＭＢＯＪ．１９：２２１２－２０
Ｍｏｏｒｅ，ＡＧ，２０００．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．８５：４７８１－４７８８
Ｔａｎｎｏ，Ｔ，２００７，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１３：１０９６－１０１
Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ，ＭＢ，２００８，Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．８８：１０２６－３１
Ｔａｍａｒｙ，Ｈ，２００８，Ｂｌｏｏｄ．１１２：５２４１－４
ＫｅｍｐｆＴ，２００６，Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．９８：３５１－６０
Ｘｕ，Ｊ，２００６，Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．９８：３４２－５０
Ｓｔｒｅｌａｕ，Ｊ，２００９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２９：１３６４０－８
Ｊｏｈｎｅｎ，Ｈ，２００７，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１１：１３３３－４０
Ｂａｅｋ，ＳＪ，２００６，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．１３１：１５５３－６０
Ｃｅｋａｎｏｖａ，Ｍ，２００９，ＣａｎｃｅｒＰｒｅｖ．Ｒｅｓ．２：４５０－８
【発明の概要】
【０００９】
本明細書で提供されるのは、ＧＤＦ１５ポリペプチドまたはＧＤＦ１５変異体ポリペプチドとＦｃドメインとを含む融合タンパク質である。
【００１０】
一実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１６、２２、２８、２９、３３、３５、３８、４８、８５、９１、１０６、１３２、１４１、１４８、１５５、１６２、１６９、１７６、１８３、１９２、１９９、２０６、２１３、２２０、２２７、２３３、２３６、２６８、２７５、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１及び３０２から成る群から選択される配列を含む。別の実施形態では、ＧＤＦ１５ポリペプチドまたはＧＤＦ１５変異体ポリペプチドは配列番号４、８、１２、２５、５２及び５５から成る群から選択される配列を含む。別の実施形態では、融合タンパク質はさらにポリペプチドリンカーをさらに含む。一実施形態では、ポリペプチドリンカーは、配列番号１８、３０、３４、４０、５８、６１、６４、６９、７２、７５、７８、１１３、１１６、１１９、１２２、１２５、１２８から成る群から選択される配列を含む。一実施形態では、融合タンパク質は２以上のＦｃドメインを含む。一実施形態では、融合タンパク質は２以上のポリペプチドリンカーを含む。一実施形態では、融合タンパク質は配列番号４６、２４、２７、３２、３７、２０、４２、５０、５４、５７、６０、６３、６６、６８、７１、７４、７７、８２、８４、８８、９３、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０８、１３４、１３７、１３９、１４３、１４６、１５０、１５３、２６９、２７２、２７６、２７９、１５７、１６０、１６４、１６７、１７１、１７４、１７８、１８１、１８５、１８８、１９４、１９７、２０１、２０４、２０８、２１１、２１５、２１８、２２２、２２５、２２９、２３２、２３３、２３８及び２４０から成る群から選択される配列を含む。
（【００１１】以降は省略されています）

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