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公開番号2025020172
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-02-12
出願番号2024184072,2021518965
出願日2024-10-18,2019-10-09
発明の名称CD137を標的とする抗体およびその使用方法
出願人ヌマブセラピューティクスアクチェンゲゼルシャフト
代理人個人,個人,個人,個人,個人
主分類C07K 16/28 20060101AFI20250204BHJP(有機化学)
要約【課題】本発明は、ヒトCD137に特異的に結合する単離抗体、ならびにその医薬組成物およびその使用方法に関する。
【解決手段】本発明はさらに、前記抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸、前記核酸を含むベクター、前記核酸または前記ベクターを含む宿主細胞、および前記抗体を産生する方法に関する。
【選択図】図3
特許請求の範囲【請求項１】
それぞれ配列番号：１、２、および３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、それぞれ配列番号：１６、および１８の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するＬＣＤＲ１、およびＬＣＤＲ３配列、および配列番号：１７の配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するＬＣＤＲ２配列を含む、ヒトＣＤ１３７に対する結合特異性を有する単離抗体。
続きを表示（約 2,100 文字）【請求項２】
それぞれ配列番号：１、２、および３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３配列、およびそれぞれ配列番号：１６、１７、および１８のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記抗体は、配列番号：１３、１４、および１５、好ましくは配列番号：１３および１５、より好ましくは配列番号：１３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および配列番号：２５、２６、および２７、好ましくは配列番号：２５および２７、より好ましくは配列番号：２５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項４】
（ａ）配列番号：１３のＶＨ配列および配列番号：２５のＶＬ配列；（ｂ）配列番号：１４のＶＨ配列および配列番号：２６のＶＬ配列；または（ｃ）配列番号：１５のＶＨ配列および配列番号：２７のＶＬ配列を含む、請求項３に記載の抗体。
【請求項５】
特に競合ＥＬＩＳＡによって測定されるように、前記抗体はＣＤ１３７とそのリガンドＣＤ１３７Ｌとの間の相互作用を阻害しない、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項６】
前記抗体は、
（ｉ）表面プラズモン共鳴によって測定されるように、５０ｎＭ未満、特に１０ｎＭ未満、より具体的には５ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）でヒトＣＤ１３７に結合する；
（ｉｉ）任意選択で、表面プラズモン共鳴によって測定されるように、５０ｎＭ未満、特に１０ｎＭ未満、より具体的には５ｎＭ未満のＫＤでカニクイザルＣＤ１３７に結合する；
（ｉｉｉ）任意選択で、特にＳＰＲによって測定されるように、ヒトＣＤ４０に結合せず、および／またはヒトＯＸ４０に結合しない；
（ｉｖ）ｓｃＦｖフォーマットの場合、示差走査蛍光測定によって決定される、少なくとも５０℃、たとえば、少なくとも５５℃、好ましくは少なくとも６０℃、より好ましくは少なくとも６４℃の融解温度（Ｔｍ）を有し、特にここで前記抗体は、ｐＨ６．４の５０ｍＭのリン酸－クエン酸緩衝液、１５０ｍＭＮａＣｌ中で製剤化される；
（ｖ）ｓｃＦｖフォーマットの場合、本発明の抗体が１０ｍｇ／ｍｌの開始濃度にあり、特にここで本発明の抗体はｐＨ６．４の１５０ｍＭＮａＣｌを含む５０ｍＭのリン酸－クエン酸緩衝液中で製剤化される場合、４℃で少なくとも２週間、特に少なくとも４週間保存した後、７％未満、たとえば６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、好ましくは２％未満のモノマー含有量の損失を有する；および／または
（ｖｉ）ｓｃＦｖフォーマットの場合、本発明の抗体が１０ｍｇ／ｍｌの開始濃度にあり、特にここで本発明の抗体はｐＨ６．４の１５０ｍＭＮａＣｌを含む５０ｍＭのリン酸－クエン酸緩衝液中で製剤化される場合、５回の連続した凍結融解サイクル後、５％未満、好ましくは３％未満、より好ましくは１％未満のモノマー含有量の損失を有する、
請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項７】
前記単離抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＡｂ、ＳＴＡＢ、およびアンキリンベースのドメイン、フィノマー（ｆｙｎｏｍｅｒ）、アビマー（ａｖｉｍｅｒ）、アンチカリン（ａｎｔｉｃａｌｉｎ）、フィブロネクチン、および抗体の定常領域に組み込まれている結合部位（たとえば、Ｆ－ｓｔａｒのＭｏｄｕｌａｒＡｎｔｉｂｏｄｙＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を含むが、これらに限定されない代替スキャフォールドベースの結合ドメイン、好ましくはＦｖ、またはｓｃＦｖからなる群から選択される、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項８】
前記ｓｃＦｖは、配列番号：２９、配列番号：３０、および配列番号：３１、好ましくは配列番号：２９および配列番号：３１、より好ましくは配列番号：２９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項７に記載の抗体。
【請求項９】
前記抗体は、ＣＤ１３７のアミノ酸残基Ａｓｎ４２が結合について重要な残基でないという条件で、ヒトＣＤ１３７細胞外ドメインに、ＣＤ１３７の細胞外ドメインの遠位部分、特にシステインリッチドメインＣＲＤ１および／またはＣＲＤ２内、より具体的には配列番号：３２のアミノ酸残基２４～８６内に位置するエピトープでヒトＣＤ１３７細胞外ドメインに結合する、単離抗体。
【請求項１０】
前記抗体は、残基Ａｒｇ４１、Ｇｌｎ４３、Ｃｙｓ４５、Ｐｒｏ４９、Ｓｅｒ５２、およびＳｅｒ８０を含む、実施例１３に従って決定される一組の重要な残基によって特徴付けられるエピトープでヒトＣＤ１３７細胞外ドメインに結合する、請求項９に記載の単離抗体。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する単離抗体、および医薬組成物、ならびにその使用方法に関する。本発明はさらに、上記抗体をコードする核酸、上記核酸を含むベクター、上記核酸または上記ベクターを含む宿主細胞、および上記抗体を産生する方法に関する。
続きを表示（約 4,500 文字）【背景技術】
【０００２】
腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）は、細胞外ドメインのシステインリッチな偽反復（ｐｓｅｕｄｏｒｅｐｅａｔ）を介して腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）に結合する能力を特徴とする受容体のタンパク質スーパーファミリーである（Ｌｏｃｋｓｌｅｙｅｔａｌ．，２００１，Ｃｅｌｌ．１０４：４８７－５０１）。現在、２７のＴＮＦファミリーメンバーが特定されている。ＴＮＦＲＳＦメンバーおよびそのリガンドは主に免疫細胞で発現し、Ｔ細胞性免疫応答において免疫調節物質の役割を果たしている。ＴＮＦＲＳＦメンバーは、樹状細胞の生存およびＴ細胞のプライミング能力の強化、エフェクターＴ細胞の最適な生成、最適な抗体応答、および炎症反応の増幅において役割を果たす。
【０００３】
ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、ＴＮＦ受容体スーパーファミリー９、ＴＮＦＲＳＦ９）は、ＴＮＦＲスーパーファミリーの表面糖タンパク質である。これは、誘導性の共刺激Ｔ細胞受容体である。ＣＤ１３７の発現は活性化に依存し、活性化ＮＫ細胞およびＮＫＴ細胞、制御性Ｔ細胞、濾胞ＤＣを含む樹状細胞（ＤＣ）、刺激されたマスト細胞、分化中の骨髄細胞、単球、好中球、好酸球（Ｗａｎｇｅｔａｌ，ＩｍｍｕｎｏｌＲｅｖ．２２９（１）：１９２－２１５（２００９））、および活性化Ｂ細胞（Ｚｈａｎｇｅｔａｌ，ＪＩｍｍｕｎｏｌ．１８４（２）：７８７－７９５（２０１０））を含む免疫細胞の幅広いサブセットを網羅している。さらに、ＣＤ１３７の発現は、腫瘍血管系（ＢｒｏｉｌＫｅｔａｌ．，ＡｍＪＣｌｉｎＰａｔｈｏｌ．１１５（４）：５４３－５４９（２００１）；Ｓｅａｍａｎｅｔａｌ，ＣａｎｃｅｒＣｅｌｌ１１（６）：５３９－５５４（２００７））およびアテローム性動脈硬化症の内皮（Ｏｌｏｆｓｓｏｎｅｔａｌ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ１１７（１０）：１２９２１３０１（２００８））でも実証されている。
【０００４】
ＴＮＦファミリーの分子であるＣＤ１３７リガンド（ＣＤ１３７Ｌ、４－１ＢＢＬ、またはｔｎｆｓｆ９）は、ＣＤ１３７について知られている細胞間天然リガンドである（Ａｌｄｅｒｓｏｎ，Ｍ．Ｒ．，ｅｔａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２２１９－２２２７（１９９４）；ＰｏｌｌｏｋＫ．，ｅｔａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：３６７－３７４（１９９４）；Ｇｏｏｄｗｉｎ，Ｒ．Ｇ．，ｅｔａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：２６３１－２６４１（１９９３））。ＣＤ１３７のリガンドはホモ三量体を形成し、ＣＤ１３７を介したシグナル伝達は、細胞表面の連結分子から進行し、三量体化されたリガンドによって架橋される（Ｗｏｎ，Ｅ．Ｙ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８５：９２０２－９２１０（２０１０））。ＣＤ１３７の高次クラスタリングは、シグナル伝達を仲介するために必要であることが示唆された。ＣＤ１３７は、細胞質尾部でアダプターＴＲＡＦ－２およびＴＲＡＦ－１と結合し、共免疫沈降を引き起こす。これは、Ｔ細胞でのＣＤ１３７の活性化により増強される（Ｓａｏｕｌｌｉ，Ｋ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７：１８４９－１８６２（１９９８）；Ｓａｂｂａｇｈ，Ｌ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８０：８０９３－８１０１（２００８））。ＣＤ１３７によるＴＲＡＦ－１およびＴＲＡＦ－２の動員により、ＮＦ－ｋＢ、ならびにＥＲＫ、ＪＮＫ、およびｐ３８ＭＡＰキナーゼを含むマイトジェン活性化タンパク質（ＭＡＰ）キナーゼカスケードが下流で活性化される。ＮＦ－ｋＢの活性化は、Ｂｃｌ－２ファミリーの生存促進性のメンバー（ｐｒｏ－ｓｕｒｖｉｖａｌｍｅｍｂｅｒ）であるＢｆｌ－１およびＢｃｌ－ＸＬの上方制御につながる。アポトーシス促進タンパク質Ｂｉｍは、ＴＲＡＦ－１およびＥＲＫ依存的に下方制御される（Ｓａｂｂａｇｈｅｔａｌ．，ＪＩｍｍｕｎｏｌ．１８０（１２）：８０９３－８１０１（２００８））。ＣＤ１３７の主な作用は、２つ以上のＴＲＡＦ－２分子を互いに分子的に近接させて配置することであることが示唆されている（Ｓａｎｃｈｅｚ-Ｐａｕｌｅｔｅ，Ａ．Ｒ．，ｅｔａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ４６（３）：５１３－５２２（２０１６））。これに基づいて、ＣＤ１３７シグナル伝達を駆動する主な要因は、原形質膜のマイクロパッチ内のＴＲＡＦ－２で組み立てられたＣＤ１３７部分の相対密度であると仮定された（Ｓａｎｃｈｅｚ－Ｐａｕｌｅｔｅ，Ａ．Ｒ．，ｅｔａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ４６（３）：５１３－５２２（２０１６））。全体として、ＣＤ１３７シグナル伝達は多量体化によって促進され、ＣＤ１３７分子の架橋がＣＤ１３７共刺激活性の重要な要因であることが提示された。
【０００５】
ＣＤ１３７はＴ細胞を共刺激して、確立された腫瘍の根絶、初代ＣＤ８
＋
Ｔ細胞（ｐｒｉｍａｒｙＣＤ８
＋
Ｔｃｅｌｌ）応答の拡大、抗原特異的ＣＤ８
＋
Ｔ細胞のメモリープールの強化、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）合成の誘導等のエフェクター機能を行う。ＣＤ８
＋
Ｔ細胞の機能および生存におけるＣＤ１３７刺激の重要な役割は、ＣＤ１３７／ＣＤ１３７Ｌ相互作用の操作を通じて腫瘍の治療に利用できる可能性がある。実際、マウスにおけるｉｎｖｉｖｏ有効性研究は、抗ＣＤ１３７抗体による治療が複数の腫瘍モデルにおいて腫瘍退縮をもたらしたことを示した。たとえば、アゴニスト抗マウスＣＤ１３７抗体は、Ｐ８１５マスト細胞腫腫瘍、および低免疫原性腫瘍モデルＡｇ１０４に対する免疫応答を誘導することが実証された（Ｉ．Ｍｅｌｅｒｏｅｔａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，３（６）：６８２－５（１９９７））。単独療法および併用療法の両方の予防的および治療的設定におけるＣＤ１３７アゴニストｍＡｂの有効性、ならびに抗腫瘍保護Ｔ細胞メモリー応答がいくつかの研究で報告されている（Ｌｙｎｃｈｅｔａｌ．，ＩｍｍｕｎｏｌＲｅｖ．２２２：２７７－２８６（２００８））。ＣＤ１３７アゴニストは、さまざまな自己免疫モデルにおける自己免疫反応も阻害する（Ｖｉｎａｙｅｔａｌ，ＪＭｏｌＭｅｄ８４（９）：７２６－７３６（２００６））。
【０００６】
現在臨床段階にある２つの抗ＣＤ１３７抗体は、完全ヒト化ＩｇＧ４ｍＡｂであるウレルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ－ＭｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂ）、および完全ヒトＩｇＧ２ｍＡｂであるウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６、Ｐｆｉｚｅｒ）である（ＣｈｅｓｔｅｒＣ．，ｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒＯｃｔ；６５（１０）：１２４３－８（２０１６））。ＣＤ１３７に作用する治療用抗体の利用は非常に有望な治療戦略であるが、抗ＣＤ１３７アゴニスト抗体の有効性の低さ、毒性の高さ、有害事象などの困難と結びついている。ＣＤ１３７アゴニスト抗体は、免疫系および臓器機能の変化を引き起こし、毒性のリスクを高めることが示された。ナイーブマウスおよび担がんマウスにおける高用量のＣＤ１３７アゴニスト抗体は、肝臓へのＴ細胞浸潤、および肝臓の炎症と一致するアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼおよびアラニンアミノトランスフェラーゼの上昇を誘発することが報告されている（ＮｉｕＬ，ｅｔａｌ．ＪＩｍｍｕｎｏｌ１７８（７）：４１９４－４２１３（２００７）；ＤｕｂｒｏｔＪ，ｅｔａｌ．，ＩｎｔＪＣａｎｃｅｒ１２８（１）：１０５－１１８（２０１１））。ＣＤ１３７アゴニスト抗体のヒト治療的使用に関する最初の臨床研究でも、肝酵素の上昇および肝炎の発生率の増加が示された（Sznol M., et al., J Clin Oncol 26(115S):3007 (2008); Ascierto PA, et al., Semin Oncol 37(5):508-516 (2010); Chester C., et al., Cancer Immunol Immunother Oct;65(10):1243-8 (2016)）。致命的となる可能性のある肝炎は、以前に治療されたステージＩＩＩ／ＩＶメラノーマのＢｒｉｓｔｏｌ－ＭｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂ（ＢＭＳ）フェーズＩＩ抗ＣＤ１３７試験、全国臨床試験（ＮＣＴ）００６１２６６４で観察された。この試験および他のいくつかの試験（NCT00803374, NCT00309023, NCT00461110, NCT00351325）は、有害事象のために終了した（Chester C., et al., Cancer Immunol Immunother Oct;65(10):1243-8 (2016)）。このような有害事象は、おそらくＴ細胞の全身的な過剰刺激が原因である。
【０００７】
したがって、当分野では、一般的な抗増殖薬の固有の副作用なしに、特に現在利用可能なＣＤ１３７抗体に匹敵するより低い毒性を有する、より高い効力を有する改善された治療用抗ヒトＣＤ１３７抗体を生成する必要がある。
【発明の概要】
【０００８】
本発明の目的は、ヒトＣＤ１３７タンパク質に特異的に結合し、治療に使用するための有益な特性、たとえば改善された親和性、有効性、安全性、ならびに改善された溶解性、開発性（ｄｅｖｅｌｏｐａｂｉｌｉｔｙ）、および安定性等の改善された生物物理学的特性を有する抗体を提供することである。特に、他の細胞表面分子から直接および独立していないＣＤ１３７抗体は、結合時にＣＤ１３７シグナル伝達を引き起こす。
【０００９】
一つの実施形態では、本発明は、新規のＣＤ１３７抗体に関する。
【００１０】
一つの実施形態では、本発明は、本発明の単離抗体、および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物に関する。
（【００１１】以降は省略されています）

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