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公開番号2025016812
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-02-05
出願番号2021204371
出願日2021-12-16
発明の名称免疫系の異常に関連する疾患、障害または症状を処置するための医薬組成物
出願人レグセル株式会社
代理人個人,個人,個人,個人,個人,個人
主分類A61K 38/17 20060101AFI20250129BHJP(医学または獣医学;衛生学)
要約【課題】安全な免疫制御法を提供すること。
【解決手段】創傷、または創傷を伴う疾患、障害もしくは症状を治療または予防するための、CTLA-4もしくはそれをコードする核酸、またはその機能的等価物、またはそれらの少なくとも1つを誘導する因子を含む医薬組成物。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
創傷、または創傷を伴う疾患、障害もしくは症状を治療または予防するための、ＣＴＬＡ－４もしくはそれをコードする核酸、またはその機能的等価物、またはそれらの少なくとも１つを誘導する因子を含む医薬組成物。
続きを表示（約 730 文字）【請求項２】
前記ＣＴＬＡ－４が分泌型ＣＴＬＡ－４、及び膜型ＣＴＬＡ－４からなる群より選択される少なくとも１つを含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記ＣＴＬＡ－４が分泌型ＣＴＬＡ－４を含む、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
局所的に投与される、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
全身投与される、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
抗生物質、抗真菌薬、または抗ウイルス薬と組み合わせて投与される、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
創傷、または創傷を伴う疾患、障害もしくは症状を治療または予防するための、ＣＴＬＡ－４と抗生物質とを含む組み合わせ物。
【請求項８】
疾患、障害または症状を治療または予防するための、分泌型ＣＴＬＡ－４もしくはそれをコードする核酸、またはその機能的等価物、またはそれらの少なくとも１つを誘導する因子を含む医薬組成物。
【請求項９】
前記機能的等価物が、ＣＴＬＡ－４遺伝子のＥｘｏｎ２にコードされるＭＹＰＰＰＹモチーフ領域を含むタンパク質またはペプチド、及び該タンパク質またはペプチドの二量体または多量体を含む、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記機能的等価物は、ＣＴＬＡ－４遺伝子のＥｘｏｎ１にコードされるシグナル配列が、同種または異種由来の他のシグナル配列に置換されて発現されたタンパク質を含む、請求項８または９に記載の医薬組成物。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本開示は、免疫系の異常に関連する疾患、障害または症状を処置するための医薬組成物に関する。
続きを表示（約 10,000 文字）【背景技術】
【０００２】
細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ－４）は、免疫系において重要な負の制御分子である。恒常的なＣＴＬＡ－４の高発現は制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の特徴である。Ｔｒｅｇが有害な免疫応答を抑制し、免疫恒常性を維持するためにはＣＴＬＡ－４が必要である。また活性化エフェクターＴ細胞もＣＴＬＡ－４を発現し、免疫応答が過剰にならないようフィードバック機構が働いている。
【０００３】
ＣＴＬＡ－４には、共刺激分子であるＣＤ８０／８６に結合できる２つのスプライシングバリアントが存在することが知られ、１つは、エクソン３によってコードされる膜貫通ドメインを有し、細胞膜中に係留されるｍＣＴＬＡ－４である。もう１つは、分泌のためにエクソン３を持たないｓＣＴＬＡ－４である。しかしながら、ＣＴＬＡ－４に関するほとんどの研究では免疫恒常性における各ＣＴＬＡ－４バリアントの役割を区別していない。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、生体内における分泌型ＣＴＬＡ－４の作用の発見に基づき、ＣＴＬＡ－４やそれをコードする核酸、またはその機能的等価物、またはそれらの少なくとも１つを誘導する因子を含む医薬組成物が、免疫制御に関連することを見出した。
【０００５】
ＣＴＬＡ－４、特に分泌型ＣＴＬＡ－４を用いることで、炎症下でＭ２型マクロファージを誘導することができ、創傷治癒などを促進することができる。またＭ２型マクロファージは免疫を負に制御するサイトカインや分子を発現し、炎症を抑え、さらには組織の修復およびリモデリングを達成し得る。
【０００６】
したがって、本開示は以下を提供する。
（項目１）
創傷、または創傷を伴う疾患、障害もしくは症状を治療または予防するための、ＣＴＬＡ－４もしくはそれをコードする核酸、またはその機能的等価物、またはそれらの少なくとも１つを誘導する因子を含む医薬組成物。
（項目２）
前記ＣＴＬＡ－４が分泌型ＣＴＬＡ－４、及び膜型ＣＴＬＡ－４からなる群より選択される少なくとも１つを含む、項目１に記載の医薬組成物。
（項目３）
前記ＣＴＬＡ－４が分泌型ＣＴＬＡ－４を含む、上記項目のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目４）
局所的に投与される、上記項目のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目５）
全身投与される、上記項目のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目６）
抗生物質、抗真菌薬、または抗ウイルス薬と組み合わせて投与される、上記項目のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目７）
創傷、または創傷を伴う疾患、障害もしくは症状を治療または予防するための、ＣＴＬＡ－４と抗生物質とを含む組み合わせ物。
（項目Ｄ１）
疾患、障害または症状を治療または予防するための、分泌型ＣＴＬＡ－４もしくはそれをコードする核酸、またはその機能的等価物、またはそれらの少なくとも１つを誘導する因子を含む医薬組成物。
（項目Ｄ２）
前記機能的等価物が、ＣＴＬＡ－４遺伝子のＥｘｏｎ２にコードされるＭＹＰＰＰＹモチーフ領域を含むタンパク質またはペプチド、及び該タンパク質またはペプチドの二量体または多量体を含む、上記項目に記載の医薬組成物。
（項目Ｄ３）
前記機能的等価物は、ＣＴＬＡ－４遺伝子のＥｘｏｎ１にコードされるシグナル配列が、同種または異種由来の他のシグナル配列に置換されて発現されたタンパク質を含む、上記項目のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目Ｄ４）
局所的に投与される、上記項目のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目Ｄ５）
全身投与される、上記項目のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目Ｄ６）
抗生物質、抗真菌薬、または抗ウイルス薬と組み合わせて投与される、上記項目のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目Ａ１）
免疫系の異常に関連する疾患、障害または症状を治療または予防するための、分泌型ＣＴＬＡ－４もしくはそれをコードする核酸、またはその機能的等価物、またはそれらの少なくとも１つを誘導する因子を含む医薬組成物。
（項目Ａ２）
前記免疫系の異常に関連する疾患、障害または症状は、炎症を伴う免疫系疾患を含む、上記項目に記載の医薬組成物。
（項目Ａ３）
前記免疫系の異常に関連する疾患、障害または症状は、自己免疫疾患および／もしくはアレルギー、あるいはそれらに関連する疾患、障害または症状を含む、上記項目のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目Ａ４）
前記免疫系の異常に関連する疾患、障害または症状は、自己免疫疾患に関連する疾患、障害または症状を含む、上記項目のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目Ａ５）
前記免疫系の異常に関連する疾患、障害または症状は、アレルギーに関連する疾患、障害または症状を含む、上記項目のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目Ａ６）
前記機能的等価物は、ＣＴＬＡ－４遺伝子のＥｘｏｎ２にコードされるＭＹＰＰＰＹモチーフ領域を含むタンパク質またはペプチド、及び該タンパク質またはペプチドの二量体または多量体を含む、上記項目のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目Ａ７）
前記機能的等価物は、ＣＴＬＡ－４遺伝子のＥｘｏｎ１にコードされるシグナル配列が、同種または異種由来の他のシグナル配列に置換されて発現されたタンパク質を含む、上記項目のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目Ａ８）
局所的に投与される、上記項目のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目Ａ９）
全身投与される、上記項目のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目Ａ１０）
抗生物質、抗真菌薬、または抗ウイルス薬と組み合わせて投与される、上記項目のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目Ｂ１）
創傷、または創傷を伴う疾患、障害もしくは症状を治療または予防するための物質をスクリーニングする方法であって、
細胞を候補物質と接触させる工程と、
【０００７】
本開示において、上記の１つまたは複数の特徴は、明示された組み合わせに加え、さらに組み合わせて提供され得ることが意図される。なお、本開示のさらなる実施形態および利点は、必要に応じて以下の詳細な説明を読んで理解すれば、当業者に認識される。
【０００８】
なお、上記した以外の本開示の特徴及び顕著な作用・効果は、以下の発明の実施形態の項及び図面を参照することで、当業者にとって明確となる。
【発明の効果】
【０００９】
本開示は、創傷、または創傷を伴う疾患、障害もしくは症状を治療または予防するための、ＣＴＬＡ－４もしくはそれをコードする核酸、またはその機能的等価物、またはそれらの少なくとも１つを誘導する因子を含む医薬組成物を提供することができる。本開示の医薬組成物は、免疫制御に関わるため、免疫系の異常に関連する疾患の治療とともに、自己免疫疾患などで破壊された組織の修復やリモデリングも期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
８週齢野生型Ｂａｌｂ／ｃマウスのナイーブもしくはエフェクターＣＤ４＋Ｔ細胞におけるｓＣＴＬＡ－４およびｍＣＴＬＡ－４ｍＲＮＡ発現。
ヒトエフェクターＴｒｅｇにおけるｓＣＴＬＡ－４の増加。ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ２５＋細胞（ナイーブＴｒｅｇ）、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ－ＣＤ２５
ｈｉｇｈ
＋細胞（エフェクターＴｒｅｇ：ＣＤ２５
ｈｉｇｈ
の＜１％）およびＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ－ＣＤ２５
ｉｎｔ
＋細胞（Ｆｏｘｐ３＋非Ｔｒｅｇ）におけるヒトｓＣＴＬＡ－４のｍＲＮＡ発現を測定した。
ＯＶＡ／ＣＦＡで免疫したＤＥＲＥＧＤＯ１１．１０マウスから免疫後０、７、１４および２１日目に単離したＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋（ＧＦＰ＋）細胞におけるｓＣＴＬＡ－４およびｍＣＴＬＡ－４のｍＲＮＡ発現。
慢性創傷マウスから単離したＴｒｅｇにおけるｓＣＴＬＡ－４の増加。群飼中の喧嘩により偶発的に負傷したＤＥＲＥＧ雄マウスの体表リンパ節から単離したＦｏｘｐ３＋（ＧＦＰ＋）ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるｓＣＴＬＡ－４およびｍＣＴＬＡ－４のｍＲＮＡ発現を測定した。
Ｓ＋Ｍ－マウスにおけるＣＴＬＡ－４遺伝子座の模式図。エクソン３の前側のスプライシングアクセプター部位（８６ｂｐ）を欠失させたベクターを設計した。ＥＳ細胞にエレクトロポレーションを行って相同組換えを誘導し、キメラマウスを作製した後、そのマウスをＦＬＰ１リコンビナーゼ遺伝子を有するＦＬＰｅＲマウスと交配させ、ｎｅｏカセットを欠失させた。その子孫がＳ＋Ｍ－ノックインマウスである。ｓＣＴＬＡ－４（Ｓ）＋ｍＣＴＬＡ－４（Ｍ）＋野生型マウス、Ｓ＋Ｍ－マウスおよびＳ－Ｍ－マウスのＣＴＬＡ－４遺伝子座の模式図も示した。
ＰＭＡ／イオノマイシン／モネンシンで４時間刺激した後のＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＣＴＬＡ－４およびＦｏｘｐ３の共染色。
Ｓ＋Ｍ－マウスにおける血中循環ＣＴＬＡ－４タンパク質の増加。
Ｓ＋Ｍ－マウスのＣＴＬＡ＿４ｍＲＮＡではｅｘｏｎ３がスキップされる。３週齢マウスの脾臓細胞およびリンパ球におけるＣＤ４＋Ｔ細胞のｓＣＴＬＡ－４（ｅｘｏｎ２－４ジャンクションを挟んだプライマーを用いた）およびｍＣＴＬＡ－４（ｅｘｏｎ３－４またはｅｘｏｎ２－３ジャンクションを挟んだプライマーを用いた）のＲＮＡ発現を測定した。
３週齢の雄Ｓ＋Ｍ＋マウス、Ｓ＋Ｍ－マウスおよびＳ－Ｍ－マウス、ならびにそれらのマウスの体重。
Ｓ＋Ｍ－マウスおよびＳ－Ｍ－マウスの脾臓およびリンパ節の肥大。
抗ｄｓＤＮＡＩｇＧ抗体（抗核抗体）の血清中濃度。
抗胃壁細胞ＩｇＧ抗体の血清中濃度。
Ｓ＋Ｍ－マウス、Ｓ－Ｍ－マウス、Ｓ－Ｍ＋マウスおよびＳ＋Ｍ＋マウスの生存曲線。Ｓ＋Ｍ－マウスとＳ－Ｍ－マウスとの間の統計的有意性をログランク検定によって得た（Ｐ＜０．０００１）。
脾臓ＣＤ１１ｂ＋細胞、ＣＤ１１ｃ＋細胞、Ｂ２２０＋細胞におけるＣＤ８０＋サブセットもしくはＣＤ８６＋サブセットの割合。
単離した脾臓ＣＤ１１ｂ＋細胞におけるＩＬ－４、ＩＬ－６およびＩＬ－１０のｍＲＮＡ発現。
Ｆ４／８０＋ＣＤ１１ｂ＋腹腔マクロファージを２４時間培養した上清中のＩＬ－１０濃度。
ＩＬ－１０の血清中濃度。
Ｆ４／８０＋ＣＤ１１ｂ＋腹腔マクロファージのＲＮＡ－ｓｅｑ。全転写物解析による多次元スケーリングプロット（ＰＣｏＡ）を示した。
生物学的プロセスに関する遺伝子オントロジー（ＧＯ）解析（１）。図に示したマウスから単離したＭφ群比較において最も濃縮されたＧＯタームの上位セットを示す。
生物学的プロセスに関する遺伝子オントロジー（ＧＯ）解析（２）。図に示したマウスから単離したＭφ群比較において最も濃縮されたＧＯタームの上位セットを示す。
生物学的プロセスに関する遺伝子オントロジー（ＧＯ）解析（３）。図に示したマウスから単離したＭφ群比較において最も濃縮されたＧＯタームの上位セットを示す。
野生型Ｓ＋Ｍ＋マウス腹腔マクロファージの遺伝子発現量を基準としたＳ＋Ｍ－マウスおよびＳ－Ｍ－マウスの腹腔マクロファージの遺伝子発現量比（Ｌｏｇｆｏｌｄｃｈａｎｇｅ）のヒートマップ。Ｓ＋Ｍ－対Ｓ－Ｍ－で、有意差Ｐ＜０．００１の発現変化を示す遺伝子リストを示した。
腹腔マクロファージにおけるＭ１／Ｍ２関連遺伝子の相対的なＦＰＫＭ値を、色分けしたマトリックスによって示す。
マクロファージにおいてＩＬ－４およびＩＬ－１３によって誘導される典型的な遺伝子の発現比較。
ＩＬ－５およびＩＬ－４の血清中濃度。
ＰＭＡ／イオノマイシン／モネンシンで５時間刺激したＦｏｘｐ３－ＣＤ４＋血球中のＩＬ－５産生細胞の割合。
ＰＭＡ／イオノマイシン／モネンシンで５時間刺激したＦｏｘｐ３－ＣＤ４＋血球中のＩＬ－４産生細胞の割合。
ＣＤ４５＋血球中の好酸球の割合。
脾臓に浸潤した好酸球のＳｉｇｌｅｃ－Ｆ発現。
脾臓から単離した好酸球におけるＩＬ－４のｍＲＮＡ発現。
エオタキシン（ＣＣＬ１１）およびＣＣＬ２２の血清中濃度。
腹腔マクロファージにおけるＣＣＬ２４発現レベル。
Ｓ＋Ｍ－マウスの肺胞マクロファージにおけるＣＤ２０６発現の増加。
ＩＬ－４およびＩＬ－１０で２４時間培養したＳ－Ｍ－マウスの脾臓マクロファージのＣＤ８０ＭＦＩおよびＣＤ２０６ＭＦＩ。
Ｓ＋Ｍ－マウスでは、血清ＩＬ－３３は増加していなかった。
Ｓ＋Ｍ－マウスでは、血清ＴＳＬＰは増加していなかった。
Ｓ＋Ｍ－マウスの血液において、自然リンパ球（ＩＬＣ）は増加していなかった。
Ｓ＋Ｍ－マウスの腸間膜において、自然リンパ球（ＩＬＣ）は増加していなかった。
Ｓ＋Ｍ－マウスのＣＤ４５＋血球において、好塩基球およびｃ－Ｋｉｔ＋細胞は増加していなかった。
ＣＤ８０／８６ブロッキング抗体の存在下におけるＴｈ２およびＴｈ１の分化。抗ＣＤ８０ｍＡｂおよび抗ＣＤ８６ｍＡｂを用いて、ナイーブＴ細胞を抗ＣＤ３ｍＡｂおよびＴ細胞枯渇脾臓細胞（主に抗原提示細胞）でＴｈ２条件もしくはＴｈ１条件で３日間刺激した後、ＰＭＡ／イオノマイシン／モネンシンで５時間刺激し、Ｔｈ２もしくはＴｈ１の分化の割合を調べた。
Ｔｈ２またはＴｈ１の分化の割合を、ＣＤ８０またはＣＤ８６をブロックしない条件を１００％として算出した。
ｓＣＴＬＡ－４組換えタンパク質の存在下におけるＴｈ２およびＴｈ１の分化。ｓＣＴＬＡ－４ＷＴ（野生型）、ｓＣＴＬＡ－４Ｙ１３９Ａ（変異型）またはＣＴＬＡ－４Ｉｇを用いて、ナイーブＴ細胞を抗ＣＤ３ｍＡｂおよびＴ細胞枯渇脾臓細胞（主に抗原提示細胞）で３日間刺激した後、ＰＭＡ／イオノマイシン／モネンシンで５時間刺激し、Ｔｈ２もしくはＴｈ１の分化の割合を調べた。
Ｔｈ２細胞またはＴｈ１細胞の分化の割合を、ＣＴＬＡ－４Ｙ１３９Ａ（陰性対照）を用いた条件を１００％として算出した。
ｓＣＴＬＡ－４ＷＴおよびＣＴＬＡ－４ＩｇによるＴｈ１分化に対する抑制効果の用量反応曲線。Ｔｈ１の分化の割合を、ＣＴＬＡ－４Ｙ１３９Ａ（陰性対照）を用いた条件を１００％として算出した。ｓＣＴＬＡ－４Ｙ１３９Ａと比較して、＊はＰ＜０．０５を示し、＊＊＊はＰ＜０．００１を示し、＊＊＊＊はＰ＜０．０００１を示す。
ｓＣＴＬＡ－４ＷＴおよびＣＴＬＡ－４ＩｇによるＴｈ２分化に対する抑制効果の用量反応曲線。Ｔｈ２の分化の割合を、ＣＴＬＡ－４Ｙ１３９Ａ（陰性対照）を用いた条件を１００％として算出した。ｓＣＴＬＡ－４Ｙ１３９Ａと比較して、＊はＰ＜０．０５を示し、＊＊＊はＰ＜０．００１を示し、＊＊＊＊はＰ＜０．０００１を示す。
ｓＣＴＬＡ－４ＷＴ（５μｇ／ｍＬ）、ｓＣＴＬＡ－４Ｙ１３９Ａ（５μｇ／ｍＬ）、ＣＴＬＡ－４Ｉｇ（５μｇ／ｍＬ）またはＩＬ－４（１０ｎｇ／ｍＬ）で２４時間培養した後のＲＡＷ２６４．７細胞におけるＣＤ２０６、Ａｒｇ１およびｉＮＯＳのｍＲＮＡ発現。
図に示す各リンパ節由来のＣＤ４＋Ｔ細胞におけるｓＣＴＬＡ－４およびｍＣＴＬＡ－４のｍＲＮＡ発現。
Ｓ＋Ｍ－マウス、Ｓ－Ｍ－マウスおよびＳ＋Ｍ＋マウスの大腸。
大腸の長さ。
大腸のヘマトキシリン・エオジン染色。
腸間膜リンパ節のＦｏｘｐ３－ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＩＦＮγ産生細胞およびＩＬ－１７Ａ産生細胞。
大腸から単離したＣＤ４５＋Ｓｉｇｌｅｃ－Ｆ－Ｌｙ６Ｇ－ＣＤ１１ｂ＋Ｆ４／８０＋マクロファージにおけるＣＤ２０６、Ｆｉｚｚ１、ｉＮＯＳおよびＩＬ－６のｍＲＮＡ発現。
ｓＣＴＬＡ－４による大腸炎の抑制。６週齢の複合免疫不全マウス（Ｃ．Ｂ１７／Ｉｃｒ－ｓｃｉｄ）に、ＣＤ４５．１コンジェニックマウスから単離したＣＤ４５ＲＢ
ｈｉｇｈ
ナイーブＴ細胞を単独（黒丸）または３週齢のＤＥＲＥＧＳ＋Ｍ－（白丸）、ＤＥＲＥＧＳ－Ｍ－（白三角形）もしくはＤＥＲＥＧＳ＋Ｍ＋マウス（白四角形）から単離したＦｏｘｐ３＋（ＧＦＰ＋）ＣＤ４＋Ｔｒｅｇとともに静脈内投与した。細胞養子移入の日（Ｄａｙ０）の体重を１００％として算出した。
図５Ｇに記載したように養子細胞移入したＣ．Ｂ１７／Ｉｃｒ－ｓｃｉｄマウスの８週間後の大腸ヘマトキシリン・エオジン染色切片。
大腸炎を組織学的にスコア化した。データにはクラスカル・ウォリス検定およびＤｕｎｎの多重比較検定を適用した。
ｓＣＴＬＡ－４による腫瘍免疫の抑制。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、野生型ｓＣＴＬＡ－４（ｓＣＴＬＡ－４ＷＴ）、Ｙ１３９Ａ変異体ｓＣＴＬＡ－４（ｓＣＴＬＡ－４Ｙ１３９Ａ）またはＣＴＬＡ－４Ｉｇを産生するＢ１６Ｆ１０黒色腫細胞を皮下投与した。腫瘍の長辺と短辺を１日おきに測定した。腫瘍の面積を、２つの直径を用いて算出した。濃い太字で示した線は、点線で示した個々の腫瘍（ｎ数は凡例に示してある）の平均増殖曲線を示す。ｓＣＴＬＡ－４ＷＴＢ１６Ｆ１０とｓＣＴＬＡ－４Ｙ１３９ＡＢ１６Ｆ１０との間の統計的有意性を、接種後６日目、８日目、１１日目、１３日目および１５日目において示した（＊はＰ＜０．０００５を示す）。
ｓＣＴＬＡ－４による腫瘍免疫の抑制はＴ細胞への作用である。ヌードマウスに、野生型ｓＣＴＬＡ－４（ｓＣＴＬＡ－４ＷＴ）、Ｙ１３９Ａ変異体ｓＣＴＬＡ－４（ｓＣＴＬＡ－４Ｙ１３９Ａ）またはＣＴＬＡ－４Ｉｇを産生するＢ１６Ｆ１０黒色腫細胞を皮下投与した。腫瘍の長辺と短辺を１日おきに測定した。腫瘍の面積を、２つの直径を用いて算出した。濃い太字で示した線は、点線で示した個々の腫瘍（ｎ＝５）の平均増殖曲線を示す。
接種後１２日目の腫瘍の細胞抽出物中のＩＦＮγの濃度。データにはクラスカル・ウォリス検定およびその後のＤｕｎｎの検定を適用した。
ｓＣＴＬＡ－４による腫瘍Ｍ２マクロファージ分化の促進。接種後１２日目のＢ１６Ｆ１０黒色腫浸潤マクロファージにおけるＣＤ２０６発現。
Ｓ－Ｍ＋マウスにおける大腸菌人工染色体（ＢＡＣ）ＣＴＬＡ－４遺伝子座の模式図。ＢＡＣベクター（ＲＰ２３－１４６Ｊ１７）を改変し、ｅｘｏｎ３とｅｘｏｎ４の間のイントロンを欠失させた。ＢＡＣトランスジェニックマウスをＳ－Ｍ－マウスと交配させ、Ｓ－Ｍ＋マウスを作製した。
Ｓ－Ｍ＋マウスおよびＳ＋Ｍ＋マウスのＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＣＴＬＡ－４およびＦｏｘｐ３の共染色。
６週齢Ｓ－Ｍ＋マウスのＣＤ４＋Ｔ細胞においてｓＣＴＬＡ－４は発現していないが、ｍＣＴＬＡ－４は発現する。
８、１６および２４週齢マウスの脾臓（Ｓｐ）またはリンパ節（Ｌｎ）のＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＣＤ４４およびＣＤ６２Ｌの共染色。代表的なフローサイトメトリーのデータは、２４週齢マウスのＣＤ８＋Ｔ細胞を示す。
２４週齢マウスの脾臓またはリンパ節のＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＣＤ４４およびＣＤ６２Ｌの共染色。
３０週齢雌Ｓ－Ｍ＋マウスおよび野生型対照（Ｓ＋Ｍ＋）マウス。
脾臓および末梢リンパ節の代表的な画像。
脾臓（Ｓｐ）、腸間膜または体表リンパ節（Ｌｎ）における細胞総数。
Ｓ－Ｍ＋マウスおよび対照（Ｓ＋Ｍ＋）マウスの脂肪組織（それぞれｎ＝１０）および肺（それぞれｎ＝６）のヘマトキシリン・エオジン染色の代表切片。
抗ｄｓＤＮＡＩｇＧ抗体（抗核抗体）、抗胃壁細胞ＩｇＧ抗体、ＩＬ－６およびＴＮＦ－αの血清中濃度。データにはマン・ホイットニー検定を適用した。
ＣＤ１１ｂ＋Ｆ４／８０＋腹腔マクロファージにおけるｉＮＯＳ（Ｎｏｓ２）およびＩＬ－６のｍＲＮＡ発現。
脾臓、腸間膜リンパ節、または体表リンパ節のＣＤ８＋Ｔ細胞をＰＭＡ／イオノマイシン／モネンシンで５時間刺激後、ＩＦＮγおよびＥｏｍｅｓを共染色した。
脾臓、腸間膜リンパ節、または体表リンパ節のＣＤ４＋Ｔ細胞をＰＭＡ／イオノマイシン／モネンシンで５時間刺激後、ＩＦＮγおよびＩＬ－１７Ａを共染色した。
ｓＣＴＬＡ－４は創傷治癒に重要な役割を果たす。６ｍｍの生検パンチを用いて１２週齢のＳ－Ｍ＋マウスおよびＳ＋Ｍ＋マウスの背部の皮膚に１匹あたり２箇所創傷した（それぞれｎ＝８のマウスを用いた）。創傷後１日目（ｄ１）、３日目（ｄ３）、５日目（ｄ５）の各マウス背部の２箇所の創傷面積（ｍｍ
２
）の平均値を画像から測定した。
ｓＣＴＬＡ－４は創傷後の再上皮化プロセスに重要な役割を果たす。５日目（ｄ５）の創傷皮膚切片においてＫ１４＋表皮基底角化細胞（緑色）とＤＡＰＩ（青色）を免疫蛍光染色で可視化した。創傷治癒において傷端から創傷下に遊走したＫ１４＋表皮角化細胞が増殖し傷をふさいだ長さ（Ｅｐｉｔｏｎｇｕｅｌｅｎｇｔｈ）によって、再上皮化を定量した。矢印は、再上皮化の徴候をまだ示していない時点（１日目）の傷端を示す。
３０週齢マウスを用いた創傷治癒の外部観察。６ｍｍの生検パンチを用いて３０週齢のＳ－Ｍ＋マウス（自己免疫の病態を示す）およびＳ＋Ｍ＋マウスの背部の皮膚に１匹あたり２箇所創傷した（それぞれｎ＝８）。創傷後１日目（ｄ１）、３日目（ｄ３）、５日目（ｄ５）の各マウス背部の２箇所の創傷面積（ｍｍ
２
）の平均値を画像から測定した。
３０週齢マウスを用いた再上皮化プロセスの定量。５日目（ｄ５）の創傷皮膚切片においてＫ１４＋表皮基底角化細胞（緑色）とＤＡＰＩ（青色）を免疫蛍光染色で可視化し、Ｅｐｉｔｏｎｇｕｅｌｅｎｇｔｈによって再上皮化を定量した。矢印は、再上皮化の徴候をまだ示していない時点（１日目）の傷端を示す。
ＩＦＮγ産生Ｔ細胞による炎症で創傷治癒が遅延する。１２週齢Ｓ－Ｍ＋マウスを用いた図６Ｎと３０週齢Ｓ－Ｍ＋マウス（１型自己免疫の病態を示す）を用いた図６Ｐの創傷治癒の程度を比較した。
３０週齢マウスにおけるＩｇＥの血清中濃度。データにはマン・ホイットニー検定を適用した。
Ｓ－Ｍ＋マウスのパイエル板および腸間膜リンパ節において、濾胞性ヘルパーＴ細胞（Ｔｆｈ：Ｂｃｌ－６＋ＣＸＣＲ５＋Ｆｏｘｐ３－ＣＤ４４＋ＣＤ４＋Ｂ２２０－（図７Ｂ）、もしくはＰＤ－１＋ＣＸＣＲ５＋Ｆｏｘｐ３－ＣＤ４４＋ＣＤ４＋Ｂ２２０－）が増加していた（図７Ｃ）。
Ｓ－Ｍ＋マウスのパイエル板および腸間膜リンパ節において、濾胞性ヘルパーＴ細胞（Ｔｆｈ：Ｂｃｌ－６＋ＣＸＣＲ５＋Ｆｏｘｐ３－ＣＤ４４＋ＣＤ４＋Ｂ２２０－（図７Ｂ）、もしくはＰＤ－１＋ＣＸＣＲ５＋Ｆｏｘｐ３－ＣＤ４４＋ＣＤ４＋Ｂ２２０－）が増加していた（図７Ｃ）。
ｓＣＴＬＡ－４は、健康なマウスにおいてアレルギー病態の進行を抑制する。肺におけるＯＶＡ誘発性喘息実験は図に示したスキームで行った。まだ自己免疫病態を示していない健康な８週齢のＳ－Ｍ＋においてアレルギー反応性ＧＡＴＡ３＋Ｔｈ２の有意な増加が見られた。
自己免疫病態を示していない健康な８週齢のＳ－Ｍ＋においてアレルギー反応性ＧＡＴＡ３＋Ｔｈ２の有意な増加が見られた。
肺ＣＤ１１ｃ－Ｉ－Ａ／Ｉ－Ｅ－ＣＤ２４＋Ｓｉｇｌｅｃ－Ｆ＋好酸球の割合。
肺胞マクロファージ（ＣＤ１１ｃ＋Ｓｉｇｌｅｃ－Ｆ＋ＣＤ１１ｂ
ｉｎｔ
ＣＤ６４＋）におけるＣＤ２０６とＣＤ７１の共染色。各々の発現を蛍光強度の中央値で定量した（図７Ｈ、Ｉ）。
ＣＤ２０６の発現を蛍光強度の中央値で定量した。
ＣＤ７１の発現を蛍光強度の中央値で定量した。
ｓＣＴＬＡ－４はアレルギーによる組織へのリンパ球の浸潤を抑制する。肺組織のヘマトキシリン・エオジン染色を示した。
【発明を実施するための形態】
（【００１１】以降は省略されています）

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