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公開番号2025016505
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-02-04
出願番号2024177850,2021532041
出願日2024-10-10,2019-12-09
発明の名称ヒト化及び親和性成熟抗CEACAM1抗体
出願人ザブリガムアンドウィメンズホスピタル,インコーポレイティド
代理人個人,個人,個人,個人,個人,個人
主分類C07K 16/30 20060101AFI20250128BHJP(有機化学)
要約【課題】本明細書において、がん胎児性抗原関連細胞接着分子1(CEACAM1)への結合及び阻害に有用な組換え抗体及びその抗原結合断片を提供する。
【解決手段】また、T細胞抵抗性を低減するための、及びがんを治療するための、開示するCEACAM1抗体及びその抗原結合断片の使用方法も提供する。
【選択図】図36
特許請求の範囲【請求項１】
ＣＥＡＣＡＭ１に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体または抗原結合断片が、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み；
前記重鎖可変領域及び前記軽鎖可変領域のそれぞれが、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み；そして
ＣＤＲ１Ｈの配列が、配列Ｘ
1
ＨＸ
2
Ｘ
3
Ｓ（配列番号１）を含み；
Ｘ
1
が、Ａ、Ｄ、Ｎ、またはＳであり；
Ｘ
2
が、ＡまたはＧであり；そして
Ｘ
3
が、ＩまたはＭを含む、疎水性側鎖を有するアミノ酸であり；
ＣＤＲ２Ｈの配列が、配列ＴＩＳＳＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（配列番号２）を含み；
ＣＤＲ３Ｈの配列が、配列ＨＸ
4
Ｘ
5
ＤＹＸ
6
ＰＸ
7
ＷＦＡＸ
8
（配列番号３）を含み、
Ｘ
4
が、Ｄ、Ｇ、またはＰであり；
Ｘ
5
が、ＦまたはＰであり；
Ｘ
6
が、ＤまたはＦであり；
Ｘ
7
が、ＡまたはＹであり；そして
Ｘ
8
が、Ｌ、Ｈ、またはＦであり；
ＣＤＲ１Ｌの配列が、配列ＲＡＮＳＡＶＳＹＭＹ（配列番号４）を含み；
ＣＤＲ２Ｌの配列が、配列ＬＴＳＮＲＡＴ（配列番号５）を含み；そして
ＣＤＲ３Ｌの配列が、配列ＱＱＸ
9
Ｘ
10
Ｘ
11
Ｘ
12
ＰＸ
13
Ｔ（配列番号６）を含み；
Ｘ
9
が、ＷまたはＮであり；
Ｘ
10
が、ＳまたはＴであり；
Ｘ
11
が、Ａまたは、Ｓ、Ｎ、及びＴを含む、中性親水性側鎖を有するアミノ酸であり；
Ｘ
12
が、Ｌ、Ｆ、またはＮであり；そして
Ｘ
13
が、ＰまたはＦである、
抗体またはその抗原結合断片。
続きを表示（約 2,400 文字）【請求項２】
前記重鎖可変領域の配列が、配列ＧＸＸＸＸＸ
1
ＨＸ
2
Ｘ
3
Ｓ（配列番号４３）を含み；
Ｘが、任意のアミノ酸であり；
Ｘ
1
が、Ａ、Ｄ、Ｎ、またはＳであり；
Ｘ
2
が、ＡまたはＧであり；そして
Ｘ
3
が、ＩまたはＭを含む、疎水性側鎖を有するアミノ酸であり；そして
ＣＤＲ３Ｈの配列が、配列ＨＸ
4
Ｘ
5
ＤＹＦＰＸ
7
ＷＦＡＸ
8
（配列番号４４）を含み；
Ｘ
4
が、Ｄ、Ｇ、またはＰであり；
Ｘ
5
が、ＦまたはＰであり；
Ｘ
7
が、ＡまたはＹであり；そして
Ｘ
8
が、Ｌ、Ｈ、またはＦである、
請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３】
ＣＤＲ１Ｈの配列が、配列Ｘ
1
ＨＸ
2
Ｘ
3
Ｓ（配列番号１）を含み；
Ｘ
1
が、Ａ、Ｄ、Ｎ、またはＳであり；
Ｘ
2
が、ＡまたはＧであり；そして
Ｘ
3
が、ＩまたはＭを含む、疎水性側鎖を有するアミノ酸であり；
ＣＤＲ２Ｈの配列が、配列ＴＩＳＳＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（配列番号２）を含み；
ＣＤＲ３Ｈの配列が、配列ＨＸ
4
Ｘ
5
ＤＹＦＰＹＷＦＡＸ
8
（配列番号７）を含み；
ＣＤＲ３ＨのＸ
4
が、Ｄ、Ｇ、またはＰであり；
ＣＤＲ３ＨのＸ
5
が、ＦまたはＰであり；そして
ＣＤＲ３ＨのＸ
8
が、Ｌ、Ｈ、またはＦであり；
ＣＤＲ１Ｌの配列が、配列ＲＡＮＳＡＶＳＹＭＹ（配列番号４）を含み；
ＣＤＲ２Ｌの配列が、配列ＬＴＳＮＲＡＴ（配列番号５）を含み；そして
ＣＤＲ３Ｌの配列が、配列ＱＱＸ
9
ＳＳＸ
12
ＰＸ
13
Ｔ（配列番号８）を含み；
Ｘ
9
が、ＷまたはＮであり；
Ｘ
12
が、Ｌ、Ｆ、またはＮであり；そして
Ｘ
13
が、ＰまたはＦである、
請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４】
ＣＤＲ１Ｈの配列が、配列ＳＨＧＭＳ（配列番号９）を含み；
ＣＤＲ２Ｈの配列が、配列ＴＩＳＳＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（配列番号２）を含み；
ＣＤＲ３Ｈの配列が、配列ＨＤＦＤＹＦＰＹＷＦＡＨ（配列番号１０）を含み；
ＣＤＲ１Ｌの配列が、配列ＲＡＮＳＡＶＳＹＭＹ（配列番号４）を含み；
ＣＤＲ２Ｌの配列が、配列ＬＴＳＮＲＡＴ（配列番号５）を含み；そして
ＣＤＲ３Ｌの配列が、配列ＱＱＷＳＳＮＰＰＴ（配列番号１１）を含む、
請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５】
ＣＤＲ１Ｈの配列が、配列ＳＨＧＭＳ（配列番号９）を含み；
ＣＤＲ２Ｈの配列が、配列ＴＩＳＳＧＧＴＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ（配列番号２）を含み；
ＣＤＲ３Ｈの配列が、配列ＨＤＦＤＹＦＰＹＷＦＡＨ（配列番号１０）を含み；
ＣＤＲ１Ｌの配列が、配列ＲＡＮＳＡＶＳＹＭＹ（配列番号４）を含み；
ＣＤＲ２Ｌの配列が、配列ＬＴＳＮＲＡＴ（配列番号５）を含み；そして
ＣＤＲ３Ｌの配列が、配列ＱＱＷＴＳＮＰＰＴ（配列番号１２）を含む、
請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６】
ＣＥＡＣＡＭ１に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体または抗原結合断片が、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み；
前記重鎖可変領域の配列が、配列番号１３の重鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも９０％同一である配列を含み；そして
前記軽鎖可変領域の配列が、配列番号１４、配列番号１５、及び配列番号１６からなる群から選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも９０％同一である配列を含む、
抗体またはその抗原結合断片。
【請求項７】
前記重鎖可変領域の配列が、配列番号１３の重鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも９５％同一である配列を含み；そして
前記軽鎖可変領域の配列が、配列番号１４、配列番号１５、及び配列番号１６からなる群から選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列と少なくとも９５％同一である配列を含む、
請求項６に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項８】
前記重鎖可変領域の配列が、配列番号１３を含み；そして
前記軽鎖可変領域の配列が、配列番号１４、配列番号１５、及び配列番号１６からなる群から選択される配列を有する、
請求項７に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９】
前記重鎖可変領域の配列が、配列番号１３を含み；そして
前記軽鎖可変領域の配列が、配列番号１４を含む、
請求項８に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１０】
前記重鎖可変領域の配列が、配列番号１３を含み；そして
前記軽鎖可変領域の配列が、配列番号１５を含む、
請求項８に記載の抗体またはその抗原結合断片。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に、分子生物学及び医学の分野に関する。より具体的には、本発明は、ＣＥＡＣＡＭ１に結合するモノクローナル抗体及び抗原結合断片、及びその治療組成物、ならびにＣＥＡＣＡＭ１との同種親和性及びヘテロ親和性の相互作用を阻害することを含むそのような抗体の使用方法、ならびにがん及び感染症の治療方法を提供する。
続きを表示（約 2,700 文字）【０００２】
連邦政府が後援する研究または開発に関する声明
本発明は、国立衛生研究所によって授与されたＮＩＨＤＫ５１３６２の下で政府の支援を受けてなされた。政府は本発明において一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
がん胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ１）は、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）ファミリーメンバーの免疫グロブリン（Ｉｇ）様膜貫通型糖タンパク質である。ＣＥＡＣＡＭファミリーのメンバーは、細胞間認識に関与し、組織構造の形成や血管新生からインスリン恒常性やＴ細胞増殖の調節に至るまでの細胞プロセスを調節する。
【０００４】
分化及び組織の三次元構造の配置、血管新生、アポトーシス、腫瘍抑制、転移、ならびに自然免疫応答及び獲得免疫応答の調節における役割を含む、様々な細胞活動がＣＥＡＣＡＭ１タンパク質に起因している。さらに、腫瘍細胞、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、特定のマクロファージなど、いくつかの細胞型が、ＣＥＡＣＡＭ１を発現している。
【０００５】
例えば、メラノーマ、結腸直腸癌、胃癌、膵臓癌、膀胱癌、及び甲状腺癌などの様々ながんにおいて、ＣＥＡＣＡＭ１の高発現が生じ、それは、腫瘍の進行の悪化、転移、及び臨床的予後不良に関連している。例えば、ＣＥＡＣＡＭ１の高発現を伴う非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）は、高い微小血管密度、遠隔転移、ならびに全生存期間中央値及び無増悪生存期間中央値の低下を示す。ＣＥＡＣＡＭ１の発現は、膵臓腺癌の遠隔転移とも強く相関していた。腫瘍でのＣＥＡＣＡＭ１の発現は、ＣＥＡＣＡＭ１を介したＴ細胞とＮＫ細胞の阻害を促進する。その結果、ＣＥＡＣＡＭ１活性を阻害することにより、腫瘍細胞の転移及びがん幹細胞ニッチ形成を阻害することができる。
【０００６】
ＣＥＡＣＡＭ１は、特定の免疫系細胞でも発現しており、免疫抑制及び免疫細胞の枯渇に関与している。例えば、胃、肺、メラノーマ、結腸直腸癌及び神経膠腫の、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）及び他の腫瘍浸潤免疫細胞におけるＣＥＡＣＡＭ１の高発現は、予後不良と関連している。Ｔ細胞では、ＣＥＡＣＡＭ１の発現は、休止（ナイーブ）Ｔ細胞からはほとんど除外されるが、このタンパク質は活性化Ｔ細胞において高レベルに発現する。ＣＥＡＣＡＭ１－Ｌは、ほとんどのＴ細胞で発現する主要なアイソフォームであり、Ｔ細胞の活性化を下方制御し、Ｔ細胞の機能を抑制する抑制性受容体として機能する。そのため、Ｔ細胞上のＣＥＡＣＡＭ１を阻害することにより、Ｔ細胞活性を回復させ、抗腫瘍応答を増加させることができる。
【０００７】
ＣＥＡＣＡＭ１は、自然免疫に関与するリンパ球であるＮＫ細胞上でさらに発現し、ウイルス感染の早期制御と腫瘍の免疫監視に関与する。ＮＫ細胞が主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩを発現する細胞に遭遇すると、これらの細胞に対する免疫応答は、受容体とリガンドの相互作用を介した阻害シグナルによって妨げられる。しかしながら、ウイルス感染細胞やがん細胞など、ＭＨＣクラスＩが下方制御されている細胞に遭遇すると、ＮＫ細胞は阻害シグナルの欠如によって活性化され、「疾患」細胞では、ＮＫ細胞媒介殺傷が生じやすくなる。ＣＥＡＣＡＭ１がＮＫ細胞とメラノーマ細胞の両方の表面に存在する場合、ＣＥＡＣＡＭ１：ＣＥＡＣＡＭ１の相互作用により、ＭＨＣクラスＩの発現とは無関係に、ＮＫ媒介殺傷が阻害される。このように、この同種親和性ＣＥＡＣＡＭ１相互作用の破壊は、ＮＫ媒介免疫応答の回復に有効であり得る。
【０００８】
マクロファージのサブセットでのＣＥＡＣＡＭ１の発現は、腫瘍微小環境の線維症とさらに関連している。ＣＥＡＣＡＭ１は、血管内皮などの腫瘍微小環境内の他の間質細胞も調節する。したがって、ＣＥＡＣＡＭ１とその結合パートナーとの相互作用を阻害することにより、さらに線維症と血管新生を阻害することができる。
【０００９】
ＣＥＡＣＡＭ１はまた、同種親和性（ＣＥＡＣＡＭ１：ＣＥＡＣＡＭ１）及びヘテロ親和性相互作用（例えば、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡＣＡＭ８、Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンドメイン含有３（ＴＩＭ－３）タンパク質、ＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉアドヘシンＨｏｐＱ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ／ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ混濁タンパク質（ＯＰＡ）、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ種、Ｏｐａ様タンパク質ＯｌｐＡ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ外膜タンパク質（ＯＭＰ）Ｐ１、ＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓａｅｇｙｐｔｉｕｓＯＭＰＰ１、Ｃａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ、Ｈ５Ｎ１などのインフルエンザウイルスとの）に関与するＩｇＶ様Ｎドメイン含有ＣＥＡＣＡＭ１細胞外部分を介して細胞間接着も媒介する。ＴＩＭ－３は、活性化Ｔ細胞、樹状細胞及びマクロファージのサブセット、ならびにＮＫ細胞で発現するＴｈ１特異的細胞表面タンパク質として同定された。ＴＩＭ－３は、耐性に関与している活性化誘導阻害分子であり、慢性ウイルス感染症及びがんにおいてＴ細胞の枯渇を誘導することが示されている。活性化Ｔ細胞においても発現するＣＥＡＣＡＭ１は、ＴＩＭ－３と相互作用することが示されており、この相互作用はＴＩＭ－３を介したＴ細胞の阻害に重要である。
【００１０】
上に示したように、ＣＥＡＣＡＭ１は、ヒト粘膜に関連する様々なグラム陰性細菌性病原体、及びＣａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓなどの真菌性病原体に対する粘膜細胞の頂端膜上の細胞受容体としても機能する。例えば、Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａ、Ｈ．ａｅｇｙｐｔｉｕｓ及び病原性Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ株は、十分に特徴付けられたＣＥＡＣＡＭ１結合アドヘシンを有する。細菌アドヘシンとＣＥＡＣＡＭ１との結合により、上皮細胞への細菌のエンドサイトーシス及びインタクトな上皮層を介した微生物のトランスサイトーシスが引き起こされ、微生物が、粘膜コロニー形成中にＣＥＡＣＡＭ１を利用することができるようになる。さらに、ＣＥＡＣＡＭ１は、インフルエンザウイルスＨ５Ｎ１及びＷｕｃｈｅｒｉａｂａｎｃｒｏｆｔｉなどの雑種線虫の感染に関与している。
【発明の概要】
（【００１１】以降は省略されています）

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