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公開番号2025016444
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-02-04
出願番号2024166744,2020506859
出願日2024-09-25,2018-08-07
発明の名称コンフォメーションが安定化されたRSV融合前Fタンパク質
出願人カルダー・バイオサイエンシズ・インコーポレイテッド
代理人弁理士法人鈴榮特許綜合事務所
主分類C07K 14/08 20060101AFI20250128BHJP(有機化学)
要約【課題】RSVワクチン免疫原の候補である融合前のコンフォメーションで安定化されたRSV Fタンパク質を提供する。
【解決手段】本発明は、変異RSV F分子、たとえば、1つ以上のDT架橋の導入によって融合前のコンフォメーションで安定化され得るか、又は安定化されている変異RSV F分子を提供する。本発明はまた、かかる変異RSV F分子を作製する方法、かかる変異RSV F分子を含む組成物、並びに、たとえば、ワクチン接種方法、治療方法、及び抗体製造方法において、かかる変異RSV F分子を使用する方法を提供する。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
第４２８位のアミノ酸残基、又は配列番号１とアライメントして決定した場合に第４２８位の残基に相当するアミノ酸におけるチロシンへの点変異を含む変異ＲＳＶＦ分子。
続きを表示（約 890 文字）【請求項２】
第１８５位のアミノ酸残基、又は配列番号１とアライメントして決定した場合に第１８５位の残基に相当するアミノ酸におけるチロシンへの点変異をさらに含む、請求項１に記載の変異ＲＳＶＦ分子。
【請求項３】
第２２６位のアミノ酸残基、又は配列番号１とアライメントして決定した場合に第２２６位の残基に相当するアミノ酸におけるチロシンへの点変異をさらに含む、請求項１に記載の変異ＲＳＶＦ分子。
【請求項４】
（ａ）第１８５位のアミノ酸残基、又は配列番号１とアライメントして決定した場合に第１８５位の残基に相当するアミノ酸におけるチロシンへの点変異、及び（ｂ）第２２６位のアミノ酸残基、又は配列番号１とアライメントして決定した場合に第２２６位の残基に相当するアミノ酸におけるチロシンへの点変異をさらに含む、請求項１に記載の変異ＲＳＶＦ分子。
【請求項５】
膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の変異ＲＳＶＦ分子。
【請求項６】
前記分子が、膜貫通ドメイン又は細胞質ドメインを含まない、請求項１～４のいずれか一項に記載の変異ＲＳＶＦ分子。
【請求項７】
前記分子が、ＲＳＶＡ型又はＲＳＶＢ型分子である、請求項１～６のいずれか一項に記載の変異ＲＳＶＦ分子。
【請求項８】
前記分子が融合前特異的抗体に結合する、請求項１～７のいずれか一項に記載の変異ＲＳＶＦ分子。
【請求項９】
前記分子が抗原部位
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5
170
を認識する抗体に結合する、請求項１～８のいずれか一項に記載の変異ＲＳＶＦ分子。
【請求項１０】
前記分子が、Ｄ２５、５Ｃ４、ＡＭ２２、及びＡＭ１４からなる群から選択される抗体に結合する、請求項１～９のいずれか一項に記載の変異ＲＳＶＦ分子。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年８月７日に出願された米国特許仮出願第６２／５４２，２４７号、２０１８年２月１２日に出願された米国特許仮出願第６２／６２９，６８５号、２０１８年３月８日に出願された米国特許仮出願第６２／６４０，４６７号、および２０１８年５月２２日に出願された米国特許仮出願第６２／６７４，７９１号の優先権の利益を主張するものであり、これらの各々の内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
続きを表示（約 2,300 文字）【０００２】
配列表
本出願はＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０１８年８月３日に作成された前記ＡＳＣＩＩによる複製物は、Avatar_009_WO1_SL.txtという名称であり、サイズは452,739バイトである。
【０００３】
連邦政府による資金提供を受けた研究の記載
本発明は、アメリカ国立衛生研究所によって与えられた認可番号ＡＩ１１２１２４の下、政府支援を受けてなされた。本発明において政府はある一定の権利を有する。
【０００４】
参照による援用
参照による援用を許容する法的範囲のみを目的として、本明細書で引用されるすべての文献の内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００５】
米国では、毎年４００～５００万人の小児がＲＳウイルス（ＲＳＶ）に感染し、乳幼児の入院の最も大きな原因となっている（約１５０，０００人の入院者数）。全世界では１歳未満の乳幼児における死者の６．７％をＲＳＶが占め、マラリアに次いで第２位である。加えて、高齢および免疫不全の対象をはじめとした他の高リスク群にも深刻な脅威となっており、米国において概算で１８０，０００人の入院者数と１２，０００人の死者数をさらに生み出している。ＲＳＶに対する現行のフロントライン治療は存在せず、現在認可されているＲＳＶに対する唯一の予防的治療は、認可済みのモノクローナル抗体シナジス（登録商標）（パリビズマブ）の受動的投与であり、これはＲＳＶ融合（Ｆ）タンパク質を認識し、重症疾患の発生率を約５０％減少させる。シナジス（登録商標）による予防は高コストであるため、その使用は未熟児および先天性心疾患を有する生後２４ヶ月未満の乳幼児にのみ限定される。総説としては、Costelloら, “Targeting RSV with Vaccines and Small Molecule Drugs, Infectious Disorders,” Drug Targets, 2012, vol. 12, no. 2.を参照されたい。より有効で、理想的には費用対効果のより高いＲＳＶワクチンの開発は、莫大な価値があるものと思われる。
【０００６】
ＲＳＶＦタンパク質は、ＲＳＶエンベロープ糖タンパク質である。自然界では、ＲＳＶＦタンパク質は、「Ｆ０」で表記される単一の前駆体ポリペプチドとして翻訳される。Ｆ０前駆体ポリペプチドは一般に長さが５７４アミノ酸であり、そのうち第１～２５位のアミノ酸がシグナルペプチドを構成する。前駆体ポリペプチドＦ０は前駆体三量体を形成し、これは細胞プロテアーゼによりタンパク質分解で切断されて、Ｐｅｐ２７ポリペプチド、Ｆ１ポリペプチド、およびＦ２ポリペプチドを生じる。Ｆ２ポリペプチドは、典型的に、Ｆ０前駆体の第２６～１０９位のアミノ酸残基を含む。Ｆ１ポリペプチドは、典型的に、Ｆ０前駆体の第１３７～５７４位のアミノ酸残基を含む。Ｆ１ポリペプチドとＦ２ポリペプチドとがジスルフィド結合によって連結されて、ＲＳＶＦ「プロトマー」と呼ばれるヘテロ二量体を形成する。かかるプロトマー３つが、ＲＳＶＦ分子の成熟三量体型形態を形成する。
【０００７】
ＲＳＶＦタンパク質は、ＲＳＶに対する防御に関係する強力な中和抗体を誘導することが知られている。近年、ＲＳＶＦタンパク質三量体の融合前のコンフォメーション（以下、「融合前Ｆ」または「ｐｒｅ－Ｆ」という場合がある）が、ヒト血清中における中和活性の最も大きな決定因子であることが示されている。これまでに単離された最も強力な中和抗体（ｎＡｂ）もまた、融合前のコンフォメーションにのみ特異的に結合する。しかし、可溶型ｐｒｅ－Ｆは非常に不安定で、融合後のコンフォメーションに容易に移行するため、ワクチン用免疫原としてのその有用性が限定されている。
【０００８】
融合前のコンフォメーションで安定化されたＲＳＶＦタンパク質は、ＲＳＶワクチン免疫原の候補で、非常に価値がある可能性がある。
【０００９】
ＲＳＶＦタンパク質（強力な中和ＡｂであるＤ２５に結合したもの）のその融合前のコンフォメーションにおける結晶構造は、McLellanら, 2013, Science, 340, p. 1113-1117に記載されており、その内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００１０】
ＲＳＶＦをそのｐｒｅ－Ｆコンフォメーションで安定化しようとする目的で、いくつかの異なる手法が開発されている。たとえば、これまでにMarshallらは、ＲＳＶＦタンパク質のある特定の位置における、「チロシンへの」点変異およびジチロシン（ＤＴ）架橋を導入することを記載している。国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０４８０８６を参照されたい。他の手法は、ＲＳＶＦタンパク質のある特定の位置における、「システインへの」変異、ジスルフィド結合、および／または空洞充填アミノ酸置換を導入することを含んでいる。米国特許第９７３８６８９号明細書、米国特許第９９５００５８号明細書、またはMcLellanら(2013) Science 342: 592-598を参照されたい。
【発明の概要】
（【００１１】以降は省略されています）

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