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公開番号2025013347
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-01-24
出願番号2024174419,2021163064
出願日2024-10-03,2016-02-16
発明の名称核酸製品及びその投与方法
出願人ファクターバイオサイエンスインコーポレイテッド
代理人個人,個人,個人,個人
主分類A61K 48/00 20060101AFI20250117BHJP(医学または獣医学;衛生学)
要約【課題】核酸製品及びその投与方法に関する。
【解決手段】本発明は部分的に、核酸、例えば、タンパク質をコードする核酸、核酸を含む治療薬及び化粧品、細胞、組織、器官、及び患者に核酸を送達するための方法と、細胞をトランスフェクション、遺伝子編集、及びリプログラミングするための核酸、方法、キット、及び器具を用いてタンパク質を発現させるように細胞を誘導するための方法、これらの方法、キット、及び器具を用いて生成される細胞、生体、治療薬及び化粧品に関する。
【選択図】図39
特許請求の範囲【請求項１】
哺乳類対象中の細胞集団において目的タンパク質を発現させるための方法であって、
前記目的タンパク質をコードするＲＮＡの有効用量を含む組成物を前記哺乳類対象に投与することを含み、
前記ＲＮＡは、実質的な細胞毒性を回避する非標準ヌクレオチドの組み合わせを含有し、
前記有効用量は、約１００ｎｇ～約２０００ｎｇであり、及び
前記組成物は、皮内投与される、前記方法。
続きを表示（約 1,700 文字）【請求項２】
前記目的タンパク質が、ＩＬ２、ＩＬ１５、ＩＬ１６、及びＩＬ２２から任意に選択されるインターロイキン、またはその変異体もしくは突然変異体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記目的タンパク質が、ＬＩＦ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１５、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２３、ＢＤＮＦ、ＳＥＲＰＩＮＢ１、カスパーゼ－１、ＢＭＰ２、及びＢＭＰ６から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記非標準ヌクレオチドが、ピリミジンの２Ｃ、４Ｃ、及び５Ｃ位から選択される、またはプリンの６Ｃ、７Ｎ、及び８Ｃ位から選択される位置で１つ以上の置換を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記非標準ヌクレオチドが、任意に、前記非標準ヌクレオチドの少なくとも５０％、または少なくとも６０％、または少なくとも７０％、または少なくとも８０％、または少なくとも９０％、または１００％の量で、５－ヒドロキシシチジン、５－メチルシチジン、５－ヒドロキシメチルシチジン、５－カルボキシシチジン、５－ホルミルシチジン、５－メトキシシチジン、プソイドウリジン、５－ヒドロキシウリジン、５－メチルウリジン、５－ヒドロキシメチルウリジン、５－カルボキシウリジン、５－ホルミルウリジン、５－メトキシウリジン、５－ヒドロキシプソイドウリジン、５－メチルプソイドウリジン、５－ヒドロキシメチルプソイドウリジン、５－カルボキシプソイドウリジン、５－ホルミルプソイドウリジン、及び５－メトキシプソイドウリジンのうちの１つ以上を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
シチジン残基の少なくとも約５０％が、非標準ヌクレオチドであり、５－ヒドロキシシチジン、５－メチルシチジン、５－ヒドロキシメチルシチジン、５－カルボキシシチジン、５－ホルミルシチジン、及び５－メトキシシチジンから選択される、先行請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
シチジン残基の少なくとも約７５％または少なくとも約９０％が、非標準ヌクレオチドであり、前記非標準ヌクレオチドが、５－ヒドロキシシチジン、５－メチルシチジン、５－ヒドロキシメチルシチジン、５－カルボキシシチジン、５－ホルミルシチジン、及び５－メトキシシチジンから選択される、先行請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
ウリジンの少なくとも約２０％、またはウリジン残基の少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約９０％が、非標準ヌクレオチドであり、前記非標準ヌクレオチドが、プソイドウリジン、５－ヒドロキシウリジン、５－メチルウリジン、５－ヒドロキシメチルウリジン、５－カルボキシウリジン、５－ホルミルウリジン、５－メトキシウリジン、５－ヒドロキシプソイドウリジン、５－メチルプソイドウリジン、５－ヒドロキシメチルプソイドウリジン、５－カルボキシプソイドウリジン、５－ホルミルプソイドウリジン、及び５－メトキシプソイドウリジンから
選択される、先行請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
ウリジン残基の少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約９０％が、非標準ヌクレオチドであり、前記非標準ヌクレオチドが、プソイドウリジン、５－ヒドロキシウリジン、５－メチルウリジン、５－ヒドロキシメチルウリジン、５－カルボキシウリジン、５－ホルミルウリジン、５－メトキシウリジン、５－ヒドロキシプソイドウリジン、５－メチルプソイドウリジン、５－ヒドロキシメチルプソイドウリジン、５－カルボキシプソイドウリジン、５－ホルミルプソイドウリジン、及び５－メトキシプソイドウリジンから選択される、先行請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
グアニン残基の少なくとも約１０％が、非標準ヌクレオチドであり、前記非標準ヌクレオチドが、任意に、７－デアザグアノシンである、先行請求項のいずれかに記載の方法。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
優先権
本出願は、全内容が全体として参照により本明細書に組み込まれる、２０１５年２月１３日に出願された米国特許出願第６２／１１６，２３２号、２０１５年７月２２日に出願された同第６２／１９５，４６２号、２０１５年１０月１６日に出願された同第６２／２４２，３８３号、２０１５年１０月２３日に出願された同第６２／２４５，７２６号、及び２０１６年２月１日に出願された同第６２／２８９，６１７号の優先権の利益を主張する。
続きを表示（約 3,500 文字）【０００２】
発明の分野
本発明は部分的に、核酸を生成及び細胞、組織、器官、及び患者に送達するための方法、組成物、及び製品と、細胞、組織、器官、及び患者においてタンパク質を発現させるための方法と、並びにこれらの方法、組成物、及び製品を用いて生成される細胞、治療薬、及び化粧品に関する。
【０００３】
電子的に提出されたテキストファイルの記載
本明細書と共に電子的に提出されたテキストファイルの内容は、全体が参照により本明細書に組み込まれる。配列表のコンピュータ可読フォーマットコピー（ファイル名：ＦＡＢ－００９ＰＣ＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ．ｔｘｔ、記録日：２０１６年２月１６日、ファイルサイズ：２．３ＭＢ）。
【背景技術】
【０００４】
合成ＲＮＡ及び核酸治療薬
リボ核酸（ＲＮＡ）は、原核細胞及び真核細胞の両方に遍在し、そこで、メッセンジャーＲＮＡの形態で遺伝情報をコードし、トランスファーＲＮＡの形態でアミノ酸を結合及び輸送し、リボソームＲＮＡの形態でアミノ酸をタンパク質に組み立て、マイクロＲＮＡ及び長い非コードＲＮＡの形態で遺伝子発現制御を含む多数の他の機能を行う。ＲＮＡは、直接的な化学合成及びインビトロ転写を含む方法により、合成的に生成することができ、治療的使用のために患者に投与することができる。しかしながら、以前に記載されている合成ＲＮＡ分子は、ヒト細胞において不安定であり、強力な先天性免疫応答を誘発する。加えて、患者、器官、組織、及びインビボの細胞に、核酸を効率的に非ウイルス的送達するための方法は、以前に記載されていない。既存の合成ＲＮＡ技術及び核酸の送達のための方法の多くの欠点により、それらの技術及び方法が、治療的または美容的使用にとって望ましくないものになる。
【０００５】
細胞リプログラミング及び細胞ベースの治療法
細胞は、それらを、特定の細胞外キューに曝露させることにより、及び／または特定のタンパク質、マイクロＲＮＡなどの異所性発現によりリプログラミングすることができる。いくつかのリプログラミング方法が以前に記載されているが、異所性発現に依存するほとんどのものは、変異の危険を伴う可能性がある外来ＤＮＡの導入を必要とする。リプログラミングタンパク質の直接送達に基づく、ＤＮＡフリーのリプログラミング方法が報告されている。しかしながら、これらの方法は、商業的使用には、あまりにも非効率的で信頼できない。加えて、ＲＮＡベースのリプログラミング方法が記載されている（例えば、Ａｎｇｅｌ．ＭＩＴＴｈｅｓｉｓ．２００８．１－５６、Ａｎｇｅｌｅｔａｌ．ＰＬｏＳＯＮＥ．２０１０．５，１０７、Ｗａｒｒｅｎｅｔａｌ．ＣｅｌｌＳｔｅｍＣｅｌｌ．２０１０．７，６１８－６３０、Ａｎｇｅｌ．ＭＩＴＴｈｅｓｉｓ．２０１１．１－８９、及びＬｅｅｅｔａｌ．Ｃｅｌｌ．２０１２．１５１，５４７－５
５８（これらの全ての内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。しかしながら、既存のＲＮＡベースのリプログラミング方法は、成熟細胞に実施される場合、時間がかかり、信頼できず、非効率的であり、（著しい費用及びエラーの可能性をもたらす）多くのトランスフェクションを必要とし、限られた数の細胞型のみをリプログラミングすることができ、限られた数の細胞型にしかリプログラミングすることができず、免疫抑制剤の使用を必要とし、血液由来ＨＳＡ及びヒト線維芽細胞フィーダーを含む複数のヒト由来構成成分の使用を必要とする。以前に開示されたＲＮＡベースのリプログラミング方法の多くの欠点により、それらの方法が、研究、治療的、または美容的使用にとって望ましくないものになっている。
【０００６】
遺伝子編集
いくつかの自然発生タンパク質は、特定のＤＮＡ配列を認識することができるＤＮＡ結合ドメイン、例えば、ジンクフィンガー（ＺＦ）及び転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）を含有する。これらのＤＮＡ結合ドメイン及びＦｏｋＩエンドヌクレアーゼの切断ドメインのうちの１つ以上を含有する融合タンパク質を、細胞内のＤＮＡの所望の領域に、二本鎖切断を形成するために用いることができる（例えば、米国特許出願公開第ＵＳ２０１２／００６４６２０号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１１／０２３９３１５号、米国特許第８，４７０，９７３号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１３／０２１７１１９号、米国特許第８，４２０，７８２号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１１／０３０１０７３号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１１／０１４５９４０号、米国特許第８，４５０，４７１号、米国特許第８，４４０，４３１号、米国特許第８，４４０，４３２号、及び米国特許出願公開第２０１３／０１２２５８１号（これら全ての内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。他の遺伝子編集タンパク質としては、規則的な間隔をもってクラスター化された短鎖回文反復（ＣＲＩＳＰＲ）関連タンパク質が挙げられる。しかしながら、細胞を遺伝子編集するための現在の方法は、非効率的であり、制御されない突然変異誘発の危険を伴い、それらの方法が、研究、治療的、及び美容的使用にとって望ましくないものとなっている。体細胞のＤＮＡフリーの遺伝子編集のための方法は、以前に検討されておらず、体細胞の同時または順次の遺伝子編集及びリプログラミングのための方法もまた、検討されていない。加えて、患者において（即ち、インビボで）、細胞を直接遺伝子編集するための方法は、以前に検討されておらず、そのような方法の開発は、ＤＮＡ結合ドメインの乏しい結合にある程度起因する、許容可能な標的の欠如、非効率的な送達、遺伝子編集タンパク質／タンパク質（複数）の非効率的な発現、発現された遺伝子編集タンパク質／タンパク質（複数）による非効率的な遺伝子編集と、ＦｏｋＩ切断ドメインの無向二量体形成及びＤＮＡ結合ドメインの乏しい特異性にある程度起因する、過剰なオフターゲット効果と、並びに他の要因により制限されている。最終的に、抗菌、抗ウイルス、及び抗癌治療における遺伝子編集の使用は、以前に検討されていない。
【０００７】
したがって、核酸を生成及び細胞、組織、器官、及び患者に送達するための改善された方法及び組成物に対するニーズが依然としてある。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は部分的には、細胞、組織、器官、及び患者に核酸を送達するための、組成物、方法、物品、及び器具、タンパク質を発現させるように細胞を誘導するための方法、これらの組成物、方法、物品、及び器具を作成するための、方法、物品、及び器具、並びにこれらの組成物、方法、物品、及び器具を用いて作成される細胞、生体、化粧品、及び治療薬を含む組成物及び物品を提供する。以前に報告された方法とは異なり、本発明のある特定の実施形態は、ヒトにおける著しくかつ長続きするタンパク質発現を達成するために少量の核酸を提供する。
【０００９】
種々の態様では、本発明は、ヒト対象における核酸薬物の安全かつ有効な用量、及び投
与パラメータの驚くべき発見に基づいている。いくつかの態様では、有効用量の核酸薬物を、それを必要とするヒト対象に投与することを含む、核酸薬物を送達するための方法を提供する。種々の実施形態では、核酸薬物は、１つ以上の非標準ヌクレオチド（別名「修飾ＲＮＡ」）を含むＲＮＡを含む。他の実施形態では、有効用量は、ヒト対象における核酸薬物によりコードされるタンパク質の量を実質的に増加させる、及び／またはヒト対象における免疫応答を実質的に回避させるのに十分な量であり、該免疫応答は、任意に、先天性免疫系によって仲介される。
【００１０】
いくつかの態様では、哺乳類対象中の細胞集団において目的タンパク質を発現させるための方法であって、目的タンパク質をコードするＲＮＡの有効用量を含む非ウイルス性トランスフェクション組成物を前記細胞に投与することを含み、トランスフェクション組成物が、実質的な細胞毒性なしで、前記細胞中で前記タンパク質を少なくとも約６時間～約５日間発現させることができる量で投与される、方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、実質的な細胞毒性を回避する１つ以上の非標準ヌクレオチドを含有する。
（【００１１】以降は省略されています）

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