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公開番号2025011161
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-01-23
出願番号2024172861,2023014335
出願日2024-10-02,2014-08-13
発明の名称プラスミノーゲン活性化因子阻害剤-1(PAI-1)に対する抗体及びその使用
出願人サノフイ,SANOFI
代理人個人,個人
主分類C07K 16/18 20060101AFI20250116BHJP(有機化学)
要約【課題】プラスミノーゲン活性化因子阻害剤1型(PAI-1)に特異的に結合する抗体、及び該抗体を投与することを含む、プラスミン生成を回復させる方法を提供する。
【解決手段】(a)重鎖フレームワーク領域及び重鎖可変領域、[重鎖可変領域は、特定の配列を含む重鎖CDR1領域、重鎖CDR2領域、重鎖CDR3領域を含む];並びに(b)軽鎖フレームワーク領域及び軽鎖可変領域、[軽鎖可変領域は、特定の配列を含む軽鎖CDR1領域、軽鎖CDR2領域、及び軽鎖CDR3領域を含む]を含む、PAI-1に特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体を提供する。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
（ａ）重鎖フレームワーク領域及び重鎖可変領域、［重鎖可変領域は、配列番号３４を含む重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号３３を含む重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号３２を含む重鎖ＣＤＲ３領域を含む］；並びに
（ｂ）軽鎖フレームワーク領域及び軽鎖可変領域、［軽鎖可変領域は、配列番号３７を含む軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号１４５を含む軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号３５を含む軽鎖ＣＤＲ３領域を含む］
を含む、ＰＡＩ－１に特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体。
続きを表示（約 3,300 文字）【請求項２】
（ａ）重鎖フレームワーク領域、及び配列番号８６を含む重鎖可変領域、並びに
（ｂ）軽鎖フレームワーク領域、及び配列番号９３を含む軽鎖可変領域
を含む、ＰＡＩ－１に特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体。
【請求項３】
（ａ）請求項２に記載の抗体の重鎖可変領域と少なくとも９５％同一である重鎖可変領域、及び／又は
（ｂ）請求項２に記載の抗体の軽鎖可変領域と少なくとも９５％同一である軽鎖可変領域
を含む、ＰＡＩ－１に特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体。
【請求項４】
請求項１に記載の抗体と本質的に同じエピトープに結合する、単離されたモノクローナル抗体。
【請求項５】
（ａ）重鎖フレームワーク領域及び重鎖可変領域、［重鎖可変領域は、配列番号３４を含む重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号３３を含む重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号３２を含む重鎖ＣＤＲ３領域を含む］；並びに
（ｂ）軽鎖フレームワーク領域及び軽鎖可変領域、［軽鎖可変領域は、配列番号３７を含む軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号３６を含む軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号３５を含む軽鎖ＣＤＲ３領域を含む］
を含む、ＰＡＩ－１に特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体。
【請求項６】
重鎖可変領域が配列番号６を含み、かつ軽鎖可変領域が配列番号７を含む、請求項５に記載の抗体。
【請求項７】
請求項５に記載の抗体と本質的に同じエピトープに結合する、単離されたモノクローナル抗体。
【請求項８】
（ａ）配列番号８２を含む重鎖可変領域を有する重鎖、若しくはその抗原結合フラグメント、及び配列番号９１を含む軽鎖可変領域を有する軽鎖、若しくはその抗原結合フラグメント；
（ｂ）配列番号８３を含む重鎖可変領域を有する重鎖、若しくはその抗原結合フラグメント、及び配列番号９２を含む軽鎖可変領域を有する軽鎖、若しくはその抗原結合フラグメント：
（ｃ）配列番号８４を含む重鎖可変領域を有する重鎖、若しくはその抗原結合フラグメント、及び配列番号９３を含む軽鎖可変領域を有する軽鎖、若しくはその抗原結合フラグメント；
（ｄ）配列番号８５を含む重鎖可変領域を有する重鎖、若しくはその抗原結合フラグメント、及び配列番号９１を含む軽鎖可変領域を有する軽鎖、若しくはその抗原結合フラグメント；
（ｅ）配列番号８５を含む重鎖可変領域を有する重鎖、若しくはその抗原結合フラグ
メント、及び配列番号９３を含む軽鎖可変領域を有する軽鎖、若しくはその抗原結合フラグメント；
（ｆ）配列番号８６を含む重鎖可変領域を有する重鎖、若しくはその抗原結合フラグメント、及び配列番号９４を含む軽鎖可変領域を有する軽鎖、若しくはその抗原結合フラグメント；
（ｇ）配列番号８７を含む重鎖可変領域を有する重鎖、若しくはその抗原結合フラグメント、及び配列番号９５を含む軽鎖可変領域を有する軽鎖、若しくはその抗原結合フラグメント；
（ｈ）配列番号８８を含む重鎖可変領域を有する重鎖、若しくはその抗原結合フラグメント、及び配列番号９６を含む軽鎖可変領域を有する軽鎖、若しくはその抗原結合フラグメント；
（ｉ）配列番号８９を含む重鎖可変領域を有する重鎖、若しくはその抗原結合フラグメント、及び配列番号９７を含む軽鎖可変領域を有する軽鎖、若しくはその抗原結合フラグメント；
（ｊ）配列番号９０を含む重鎖可変領域を有する重鎖、若しくはその抗原結合フラグメント、及び配列番号９８を含む軽鎖可変領域を有する軽鎖、若しくはその抗原結合フラグメント；
（１）配列番号８６を含む重鎖可変領域を有する重鎖、若しくはその抗原結合フラグメント、及び配列番号９５を含む軽鎖可変領域を有する軽鎖、若しくはその抗原結合フラグメント；
（ｍ）配列番号８９を含む重鎖可変領域を有する重鎖、若しくはその抗原結合フラグメント、及び配列番号９３を含む軽鎖可変領域を有する軽鎖、若しくはその抗原結合フラグメント；又は
（ｎ）配列番号８９を含む重鎖可変領域を有する重鎖、若しくはその抗原結合フラグメント、及び配列番号９５を含む軽鎖可変領域を有する軽鎖、若しくはその抗原結合フラグメント
を含む、ヒトＰＡＩ－１に特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体。
【請求項９】
（ａ）配列番号２２を含む重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２１を含む重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２０を含む重鎖ＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域；並びに配列番号２５を含む軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号２４を含む軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２３を含む軽鎖ＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号２８を含む重鎖ＣＤ１領域、配列番号２７を含む重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２６を含む重鎖ＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域；並びに配列番号３１を含む軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号３０を含む軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号２９を含む軽鎖ＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号４０を含む重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号３９を含む重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号３８を含む重鎖ＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域；並びに配列番号４３を含む軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号４２を含む軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号４１を含む軽鎖ＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域、
（ｄ）配列番号４６を含む重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号４５を含む重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号４４を含む重鎖ＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域；並びに配列番号４９を含む軽鎖ＣＤ１領域、配列番号４８を含む軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号４７を含む軽鎖ＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域、
（ｅ）配列番号５２を含む重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号５１を含む重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号５０を含む重鎖ＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域；並びに配列番号５５を含む軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号５４を含む軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号５３を含む軽鎖ＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域、
（ｉ）配列番号５８を含む重鎖ＣＤ１領域、配列番号５７を含む重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号５６を含む重鎖ＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域；並びに配列番号６１を含
む軽鎖ＣＤ１領域、配列番号６０を含む軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号５９を含む軽鎖ＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域、
（ｇ）配列番号６４を含む重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号６３を含む重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号６２を含む重鎖ＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域；並びに配列番号６７を含む軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号６６を含む軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号６５を含む軽鎖ＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域、
（ｈ）配列番号７０を含む重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号６９を含む重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号６８を含む重鎖ＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域；並びに配列番号７３を含む軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号７２を含む軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号７１を含む軽鎖ＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域；又は
（ｉ）配列番号７６を含む重鎖ＣＤＲ１領域、配列番号７５を含む重鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号７４を含む重鎖ＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域；並びに配列番号７９を含む軽鎖ＣＤＲ１領域、配列番号７８を含む軽鎖ＣＤＲ２領域、及び配列番号７７を含む軽鎖ＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域
を含む、ＰＡＩ－１に特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体。
【請求項１０】
請求項８又は請求項９に記載のヒト化モノクローナル抗体と本質的に同じＰＡＩ－１上のエピトープに結合する、ＰＡＩ－１に特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国仮出願第61/865,451号（2013年8月13日出願）、及び欧州特許出願第14305757.8号（2014年5月22日出願）（これらはそれら全体として参照により本明細書に加入される）に対する優先権を主張する。
続きを表示（約 4,500 文字）【背景技術】
【０００２】
背景
プラスミノーゲン活性化因子阻害剤-1型(PAI-1)は、プラスミン生成に関与する鍵とな
るセリンプロテアーゼである組織型プラスミノーゲン活性化因子(tPA)及びウロキナーゼ
型プラスミノーゲン活性化因子(uPA)の主要阻害剤である。PAI-1は、血管コンパートメントにおけるプラスミノーゲン活性化を阻害することにより線維素溶解を調節する。線維素溶解は、凝固カスケードの活性化により形成されるフィブリン血栓を分解するための緊密に協調したプロセスである。凝固/線維素溶解バランスの調節不全は、出血又は血栓性疾
患のような異常な止血事象をもたらす。PAI-1はまた、受容体に結合したプラスミノーゲ
ンがウロキナーゼ受容体(uPAR)に結合したウロキナーゼにより主に活性化される細胞周囲コンパートメント（血管内及び組織の）におけるプラスミノーゲン活性化の鍵となる調節因子である。細胞周囲タンパク質分解を阻害することにより、PAI-1は、細胞外マトリッ
クス(ECM)分解、増殖因子活性化及びECMからの放出、マトリックスメタロプロテイナーゼ(MMP)活性化並びに細胞アポトーシスのような多数の細胞昨日を調節する。近年、PAI-1のプロテアーゼ非依存性効果が、(ビトロネクチン、ヘパリン、グリコサミノグリカンのよ
うな)補因子、uPAR-ウロキナーゼ複合体又は細胞受容体(LRP:低密度リポタンパク質受容
体関連タンパク質)又は接着/脱接着、遊走、増殖及び細胞内生物活性のような細胞機能に影響を及ぼすインテグリンとのその相互作用により同定された。これらの細胞機構及び抗線維素溶解効果により、PAI-1の病原性の役割が、腫瘍成長及び転移、線維症、急性心筋
梗塞並びにアテローム性動脈硬化症、肥満及び糖尿病のような代謝障害において確立されてきた。
【０００３】
ヒトSERPINE1(PAI-1)遺伝子は、第７染色体に局在化し、８つのイントロン及び９つの
エクソンからなり、そして12,169bのサイズを有する(非特許文献１)。PAI-1は、SERPIN(
セリンプロテアーゼ阻害剤)スーパーファミリーからの約50kDa(379アミノ酸)の単鎖糖タ
ンパク質であり、これは活性コンホメーションで合成されるがビトロネクチン(Vn)が存在しない場合は自発的に潜在性になる。PAI-1の主要補因子であるビトロネクチンは、表面
上に露出された約２０個のアミノ酸である反応性中心ループ（RCL)を有する活性コンホメーションを安定化させる。PAI-1の２つの主要な標的(tPA及びuPA)の阻害の機構は自殺阻
害である。PAI-1のRCL領域は、ベイトペプチド結合(R346-M347、P1-P’1とも呼ばれる)を有し、これはこのセリンプロテアーゼについての切断部位を有する。tPA又はuPAとのミカエリス複合体を最初に形成し、次いで触媒三残基はベイトペプチド結合と反応してアシル-酵素複合体を形成し、これがP1-P’1ペプチド結合の切断後に強いコンホメーション変化を誘導する。コンホメーション変化は、プロテアーゼはアシル酵素としてPAI-1と共有結
合したまま、切断されたRCLのβ-ストランドへの挿入を生じる。非生理的環境下で、このアシル-酵素複合体の加水分解は、切断されたPAI-1及び遊離活性プロテアーゼの放出を誘導し得る(非特許文献２)。
【０００４】
PAI-1は、非常に変動するレベル(nM範囲)でかつt-PA又はuPA濃度よりも過剰に血中で循環する。PAI-1は構造的柔軟性を示し、そして３つのコンホメーションのうちの１つで見
出され得る:(1) 潜在(latent）コンホメーション、(2)活性コンホメーション、又は(3)基質コンホメーション(図1を参照のこと)。PAI-1は、潜在性移行（latency transition）を1.5～3倍減少させるビトロネクチンとの非共有結合複合体(Kd約1nM)として主に見出され
る。ビトロネクチンに対する潜在的か、切断されたか又は複合体化したPAI-1の親和性は
有意に減少される。マトリックス結合ビトロネクチンもまた、PAI-1とともに細胞周囲の
空間に局在化する。内皮細胞、単球、マクロファージ及び血管平滑筋細胞はこのPAI-1を
合成し、次いでこれが血小板(α顆粒で)により潜在形態で大量に貯蔵され得る。PAI-1は
、溶液中でtPA及びuPAの速く特異的な阻害剤(二次速度定数10
6
～10
7
M
-1
s
-1
を有する）で
あるが、フィブリン又はそれらの細胞受容体のいずれかに結合したプロテアーゼに対して不活性である。トロンビン、プラスミン、活性化プロテインCのような他のプロテアーゼ
もまたPAI-1により阻害されるが効率はより低い。
【０００５】
ヒトPAI-1のいくつかの3D構造が、1992年に最初の１つが記載されてから(非特許文献３)、潜在コンホメーションで解析されている。これらの3D構造としては、基質でのPAI-1の変異体形態(非特許文献４)、安定化された活性コンホメーション(非特許文献５)、ビトロネクチン-ソマトメジンBドメインに複合体化したPAI(非特許文献６)又はRCLループからの阻害ペンタペプチドと複合体化したPAI(非特許文献７)が挙げられる。より最近には、潜
在コンホメーションのマウスPAI-1構造が、Dewildeら(非特許文献８)により解明され、そしてRCL位置におけるヒトPAI-1との差異、ゲート領域及びα-ヘリックスAの位置を明らかにした。PAI-1における構造/機能の関係は、この多機能セルピンの様々な活性に関与するドメインの位置を特定するために６００より多い変異体タンパク質を使用することにより調べられた(非特許文献９による概説)。
【０００６】
PAI-1は、肝細胞、脂肪細胞、メサンギウム細胞、線維芽細胞、筋線維芽細胞、及び上
皮細胞を含むほとんど全ての細胞型により合成され得るので、その発現は、生理的（例えば、血漿PAI-1レベルの概日変動)及び病理的条件(例えば、肥満、代謝症候群、インスリ
ン抵抗性、感染、炎症性疾患、癌)下で大いに変動する。PAI-1は急性期タンパク質と考えられている。PAI-1 mRNA発現の転写調節は、いくつかのサイトカイン及び成長因子(例え
ば、TGFβ、TNFα、EGF、FGF、インスリン、アンギオテンシンII及びIV)、ホルモン(例えば、アルドステロン、グルココルチコイド、PMA、高グルコース)並びにストレス因子(例
えば、低酸素、反応性酸素種、リポ多糖類)により誘導される。
【０００７】
さらに、PAI-1遺伝子のプロモーター（位置-６７５）における多型は発現レベルに影響を及ぼす。4G対立遺伝子はPAI-1レベルを増加させ、そして4G/4G変異体(集団の約25%において発生する)は、5G/5G(25%発生及び4G/5G 50%発生)と比較して血漿PAI-1レベルの約２
５％の増加を誘導する。4G/4G多型は、心筋梗塞(非特許文献１０)、特定の型の肺線維症(特発性間質性肺炎)(非特許文献１１)に関連付けられており、そして4G/4G遺伝子型ドナー群は、間質性線維症及び尿細管萎縮に起因する移植腎喪失についての独立した危険因子である(非特許文献１２)。
【０００８】
いくつかの病原性の役割が、動脈血栓症及び静脈血栓症、急性心筋梗塞、及びアテローム性動脈硬化症のような血栓性疾患においてPAI-1に起因すると考えられてきた。インス
リン抵抗性症候群及び肥満のような代謝障害へのその関与はよく認識されている。PAI-1
はいくつかの器官の線維化促進（profibrotic）因子としても知られており、線維性組織
において過剰発現されることが示されている(すなわち、肝臓、肺、腎臓、心臓、腹部癒
着、皮膚:瘢痕又は強皮症)(非特許文献１３により概説される)。PAI-1ノックアウト(KO)
マウスは、肝臓(胆管結紮又は生体異物)、腎臓(一側尿管閉塞モデル(UUO))、肺(ブレオマイシン吸入)のような様々なモデルにおいて線維症から保護されるが(非特許文献１４;非
特許文献１５;非特許文献１６)、一方で心臓においてこの欠失は誘導された線維症から保護されるが(非特許文献１７)、年齢依存性心選択的線維症になりやすい(非特許文献１８)
。siRNAによるPAI-1発現の下方調節(非特許文献１９)又は化学化合物による阻害(非特許
文献２０;非特許文献２１)は、肺線維症を減少させると報告されたが、一方で野生型のPAI-1過剰発現(非特許文献２２)又はビトロネクチン結合のみを保持するがtPA阻害剤機能を保持しないPAI-1変異体は肺線維症を増悪させる(非特許文献２３)。
【０００９】
胆管結紮(BDL)肝線維症は、PAI-1を中和する抗体により減弱されるが(特許文献１)、一方でsiRNAにより下方調節はBDL及び生体異物誘導肝線維症を減弱させる(非特許文献２４)。PAI-1 KOマウスは、BDLにおいて胆汁うっ滞性誘導肝損傷及び線維症から(非特許文献２５;非特許文献２６;非特許文献２７)、そしてアンジオテンシンII誘導肝線維症(非特許文献２８)から保護された。
【００１０】
PAI-1 KOマウスは、UUOモデル(非特許文献２９)において、糖尿病性腎症において(非特許文献３０)及びアンジオテンシンII誘導腎症において(非特許文献３１;概説については
、非特許文献３２及び非特許文献３３を参照のこと)腎線維症から保護される。対照的に
、PAI-1過剰発現マウスは、より重症の線維症及びUUO後の増加したマクロファージ動員を示す(非特許文献３４;非特許文献３５)。非阻害性（Non-inhibitory）PAI-1変異体(PAI-1
R)は、ラットにおける実験的糸球体腎炎(thy1)において、尿タンパク質発現及び糸球体
マトリックス蓄積を減少させることにより線維症の発生からマウスを保護することが示された(非特許文献３６)。PAI-1をブロックするペプチドは、コラーゲン3、4及びフィブロ
ネクチン蓄積をUUOマウスにおいて阻害する(非特許文献３７)。
【先行技術文献】
【特許文献】
（【００１１】以降は省略されています）

関連特許