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公開番号2024079586
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-06-11
出願番号2023183540
出願日2023-10-25
発明の名称皮膚疾患モデル動物
出願人国立大学法人大阪大学,ロート製薬株式会社
代理人個人,個人,個人,個人
主分類A01K 67/027 20240101AFI20240604BHJP(農業;林業;畜産;狩猟;捕獲;漁業)
要約【課題】角化亢進に由来する皮膚疾患モデル動物を提供すること。
【解決手段】角化亢進に由来する皮膚疾患モデル動物(ヒトを除く)であって、前記皮膚疾患が、C14～C18脂肪酸及び/又はそのアルキルエステルを前記モデル動物の皮膚に塗布することにより誘発された皮膚疾患である、モデル動物。
【選択図】なし

特許請求の範囲【請求項１】
角化亢進に由来する皮膚疾患モデル動物（ヒトを除く）であって、
前記皮膚疾患が、Ｃ１４～Ｃ１８脂肪酸及び／又はそのアルキルエステルを前記モデル動物の皮膚に塗布することにより誘発された皮膚疾患である、モデル動物。
続きを表示（約 440 文字）【請求項２】
前記Ｃ１４～Ｃ１８脂肪酸がパルミチン酸である、請求項１に記載のモデル動物。
【請求項３】
前記アルキルエステルがエチルエステルである、請求項１に記載のモデル動物。
【請求項４】
前記角化亢進に由来する皮膚疾患が尋常性ざ瘡である、請求項１～３のいずれか一項に記載のモデル動物。
【請求項５】
Ｃ１４～Ｃ１８脂肪酸及び／又はそのアルキルエステルをモデル動物（ヒトを除く）の皮膚に塗布することを含む、角化亢進に由来する皮膚疾患モデル動物の作成方法。
【請求項６】
角化亢進に由来する皮膚疾患モデル動物（ヒトを除く）に対して物質を投与することを含む、角化亢進に由来する皮膚疾患に対する前記物質の予防効果又は治療効果の評価方法であって、前記モデル動物は、Ｃ１４～Ｃ１８脂肪酸及び／又はそのアルキルエステルを前記モデル動物の皮膚に塗布することにより皮膚疾患が誘発されたモデル動物である、評価方法。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本開示は、皮膚疾患モデル動物に関する。
続きを表示（約 5,600 文字）【背景技術】
【０００２】
角化亢進は、皮膚疾患の主要な要因の１つであり、角化亢進に由来する代表的な皮膚疾患としては、尋常性ざ瘡が挙げられる。角化亢進に由来する皮膚疾患への薬剤の有効性及び角化亢進を生じた場合における遺伝子の影響の評価等は、モデル動物を用いて行われることが一般的であり、たとえば尋常性ざ瘡の場合、アクネ菌をマウスに皮下注射して生じた炎症に対して行われた例が報告されている（非特許文献１～３）。しかし、菌そのものを皮下注射するというアプローチは、尋常性ざ瘡の生理的な発生機構とはかけ離れており、角化亢進に由来する皮膚疾患患者における皮膚疾患により近い状態の角化亢進に由来する皮膚疾患を再現する技術の開発が求められている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
KolarSL, Tsai CM, Torres J, Fan X, Li H, Liu GY. "Propionibacteriumacnes-induced immunopathology correlates with health and diseaseassociation." JCI Insight. 2019;4(5)
AnHJ, Lee WR, Kim KH, et al. "Inhibitory effects of bee venom onPropionibacterium acnes-induced inflammatory skin disease in an animal model."Int J Mol Med. 2014;34(5):1341-1348
NguyenCT, Sah SK, Zouboulis CC, Kim TY. "Inhibitory effects of superoxidedismutase 3 on Propionibacterium acnes-induced skin inflammation." SciRep. 2018;8(1):4024
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本開示は、角化亢進に由来する皮膚疾患モデル動物及びその作成方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、Ｃ１４～Ｃ１８脂肪酸及び／又はそのアルキルエステルを動物の皮膚に塗布すると、コメドが形成され、角化亢進に由来する皮膚疾患モデル動物として利用可能であることを見出し、本開示を完成させた。
【０００６】
本開示は、以下の［１］～［１８］に関する。
［１］角化亢進に由来する皮膚疾患モデル動物（ヒトを除く）であって、上記皮膚疾患が、Ｃ１４～Ｃ１８脂肪酸及び／又はそのアルキルエステルを上記モデル動物の皮膚に塗布することにより誘発された皮膚疾患である、モデル動物。
［２］Ｃ１４～Ｃ１８脂肪酸及び／又はそのアルキルエステルをモデル動物（ヒトを除く）の皮膚に塗布することを含む、角化亢進に由来する皮膚疾患モデル動物の作成方法。
［３］角化亢進に由来する皮膚疾患モデル動物（ヒトを除く）に対して物質又は組成物を投与することを含む、角化亢進に由来する皮膚疾患に対する上記物質又は組成物の予防効果又は治療効果の評価方法であって、上記モデル動物は、Ｃ１４～Ｃ１８脂肪酸及び／又はそのアルキルエステルを上記モデル動物の皮膚に塗布することにより皮膚疾患が誘発されたモデル動物である、評価方法。
［４］角化亢進に由来する皮膚疾患モデル動物（ヒトを除く）に対して物質又は組成物を投与することを含む、角化亢進に由来する皮膚疾患の予防効果又は治療効果を有する物質又は組成物のスクリーニング方法であって、上記モデル動物は、Ｃ１４～Ｃ１８脂肪酸及び／又はそのアルキルエステルを上記モデル動物の皮膚に塗布することにより皮膚疾患が誘発されたモデル動物である、スクリーニング方法。
［５］上記皮膚疾患の予防効果又は治療効果を有する物質を含む組成物又は上記組成物が、薬剤、洗浄剤又は食品として用いるためのものである、［３］又は［４］に記載の方法。
［６］Ｃ１４～Ｃ１８脂肪酸及び／又はそのアルキルエステルを動物（ヒトを除く）の皮膚に塗布することを含む、動物（ヒトを除く）におけるミエロイド系細胞の浸潤の誘導方法。
［７］上記Ｃ１４～Ｃ１８脂肪酸に含まれる炭素－炭素二重結合の数が０以上１以下である、［１］～［６］のいずれか一つに記載のモデル動物又は方法。
［８］上記Ｃ１４～Ｃ１８脂肪酸が飽和脂肪酸である、［１］～［６］のいずれか一つに記載のモデル動物又は方法。
［９］上記Ｃ１４～Ｃ１８脂肪酸がパルミチン酸である、［１］～［６］のいずれか一つに記載のモデル動物又は方法。
［１０］上記アルキルエステルがＣ１～Ｃ３アルキルエステルである、［１］～［９］のいずれか一つに記載のモデル動物又は方法。
［１１］上記アルキルエステルがイソプロピルエステル又はエチルエステルである、［１］～［９］のいずれか一つに記載のモデル動物又は方法。
［１２］上記アルキルエステルがエチルエステルである、［１］～［９］のいずれか一つに記載のモデル動物又は方法。
［１３］上記Ｃ１４～Ｃ１８脂肪酸がパルミチン酸であり、上記アルキルエステルがエチルエステルである、［１］～［６］のいずれか一つに記載のモデル動物又は方法。
［１４］上記Ｃ１４～Ｃ１８脂肪酸及び／又はそのアルキルエステルがパルミチン酸エチルである、［１］～［６］のいずれか一つに記載のモデル動物又は方法。
［１５］上記皮膚疾患が炎症性の皮膚疾患である、［１］～［５］及び［７］～［１４］のいずれか一つに記載のモデル動物又は方法。
［１６］上記角化亢進に由来する皮膚疾患が尋常性ざ瘡である、［１］～［５］及び［７］～［１５］のいずれか一つに記載のモデル動物又は方法。
［１７］上記尋常性ざ瘡における毛包の表皮に対して垂直方向の断面積が４７００μｍ
２
以上である、［１６］に記載のモデル動物又は方法。
［１８］上記Ｃ１４～Ｃ１８脂肪酸及び／又はそのアルキルエステルが、２～９ｗｔ％の溶液として、１日あたり１回、５～５０μＬで１～４日間塗布される、［１］～［１７］のいずれか一つに記載のモデル動物又は方法。
［１９］上記Ｃ１４～Ｃ１８脂肪酸及び／又はそのアルキルエステルが、３～８ｗｔ％のエタノール溶液として、１日あたり１回、１０～３０μＬで２日間塗布される、［１］～［１７］のいずれか一つに記載のモデル動物又は方法。
［２０］上記モデル動物がモデルマウスである、［１］～［５］及び［７］～［１９］のいずれか一つに記載のモデル動物又は方法。
［２１］上記角化亢進に由来する皮膚疾患が耳に形成される、［１］～［５］及び［７］～［２０］に記載のモデル動物又は方法。
［２２］上記モデル動物における上記Ｃ１４～Ｃ１８脂肪酸及び／又はそのアルキルエステルの塗布箇所において、ミエロイド系細胞の浸潤が生じている、［１］～［２１］に記載のモデル動物又は方法。
［２３］［３］～［２２］のいずれか一つに記載の評価方法によって評価された、又は［４］～［２２］のいずれか一つに記載のスクリーニング方法によって選別された、上記皮膚疾患の予防効果又は治療効果を有する物質を有効量含む、組成物。
［２４］医薬組成物、外用組成物又は食品組成物である、［２３］に記載の組成物。
［２５］皮膚上のＣ１４～Ｃ１８脂肪酸及び／又はそのアルキルエステルの総量を指標として、角化亢進に由来する皮膚疾患への将来的な罹患又はその症状悪化の可能性を判定又は評価する方法。
［２６］皮膚上のＣ１４～Ｃ１８脂肪酸及び／又はそのアルキルエステルの総量を指標とすることを含む、物質又は組成物の、角化亢進に由来する皮膚疾患の治療、改善、緩和又は予防作用の判定又は評価方法。
［２７］皮膚上のＣ１４～Ｃ１８脂肪酸及び／又はそのアルキルエステルの総量を指標とすることを含む、角化亢進に由来する皮膚疾患の治療、改善、緩和又は予防用の物質又は組成物のスクリーニング方法。
［２８］皮膚上のＣ１４～Ｃ１８脂肪酸及び／又はそのアルキルエステルを含む、角化亢進に由来する皮膚疾患の将来的な罹患や症状の悪化の原因物質のモデル組成物。
［２９］皮膚上のＣ１４～Ｃ１８脂肪酸及び／又はそのアルキルエステルを含む組成物であって、角化亢進に由来する皮膚疾患の将来的な罹患や症状悪化の可能性を判定又は評価する指標として用いられる、角化亢進に由来する皮膚疾患の将来的な罹患や症状悪化の可能性の判定又は評価用指標剤。
【発明の効果】
【０００７】
本開示によれば、角化亢進に由来する皮膚疾患患者における皮膚疾患に近い状態の角化亢進に由来する皮膚疾患を発症したモデル動物、及びその作成方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
実施例１において、尋常性ざ瘡患者及び健常者から採取した皮脂中に含まれる各脂肪酸の含有量を示す図である。
実施例２において、モデルマウスから採取した組織を用いて作成したヘマトキシリン・エオジン染色切片の画像を示す図である。
実施例２において、モデルマウスにおける毛包の、表皮に対して垂直方向の断面積を測定した結果を示す図である。
実施例２において、マウスから採取した組織に含まれる、炎症マーカー（ａ）Ｉｌ－１α（ｂ）Ｉｌ－１β（ｃ）Ｔｎｆ及び（ｄ）Ｄｅｆｂ４を定量した結果を示す図である。
実施例２において、マウスから採取した組織に含まれる、炎症マーカー（ａ）Ｄｅｆｂ１４（ｂ）Ｓ１００ａ８（ｃ）Ｓ１００ａ９及び（ｄ）Ｔｓｌｐを定量した結果を示す図である。
実施例２において、マウスから採取した組織に含まれる、過角化マーカー（ａ）Ｋｒｔ１６（ｂ）Ｋｌｋ６及び（ｃ）Ｋｒｔ１７を定量した結果を示す図である。
実施例３において、モデルマウスから採取した組織を用いて作成したヘマトキシリン・エオジン染色切片の画像を示す図である。
実施例３において、モデルマウスにおける毛包の、表皮に対して垂直方向の断面積を測定した結果を示す図である。
実施例３において、マウスから採取した組織に含まれる、炎症マーカーＣｘｃｌ２を定量した結果を示す図である。
実施例４において、モデルマウスから採取した組織を用いて作成したヘマトキシリン・エオジン染色切片の画像を示す図である。
実施例４において、マウスから採取した組織に含まれる、炎症マーカー（ａ）Ｃｘｃｌ２並びに過角化マーカー（ｂ）Ｋｒｔ１６及び（ｃ）Ｋｌｋ６を定量した結果を示す図である。
実施例５において、パルミチン酸エチル又はステアリン酸エチルを塗布したマウスから採取した組織における、上昇が見られた遺伝子を示す図である。
実施例６において、パルミチン酸エチル又はステアリン酸エチルを塗布したマウスから採取した組織に含まれる細胞における、好中球及びマクロファージのマーカーの発現量を示す図である。
実施例６において、パルミチン酸エチル又はステアリン酸エチルを塗布したマウスから採取した組織における、好中球及びマクロファージの存在量を示す図である。
実施例７において、好中球、単球、マクロファージを分類したゲーティングの方法（左図）、及びパルミチン酸エチルの塗布直後、６時間後、１２時間後、２４時間後及び４８時間（２回塗布）後におけるフローサイトメトリーの結果（右図）を示す図である。
実施例７において、ＣＤ４５
＋
細胞、マクロファージ、単球、好中球に分類された細胞の数を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本開示において、「脂肪酸」との記載は、カルボキシ基を１個もつ鎖式化合物，すなわち鎖状モノカルボン酸を意味する。本開示において、「飽和脂肪酸」との記載は、分子内の炭素－炭素結合がすべて単結合である脂肪酸、すなわち鎖状飽和モノカルボン酸を意味する。本開示において、「不飽和脂肪酸」との記載は、飽和脂肪酸ではない脂肪酸、すなわち分子内に炭素－炭素二重結合又は炭素－炭素三重結合を１つ以上有する脂肪酸を指す。
【００１０】
本開示において、「脂肪酸名［数値Ａ］：［数値Ｂ］」又は「脂肪酸名（［数値Ａ］：［数値Ｂ］）」との記載は、該脂肪酸に含まれる炭素数がＡであること、及び、該脂肪酸に含まれる炭素－炭素二重結合の数がＢであり、かつそれ以外の炭素－炭素結合は全て単結合であることを意味する。すなわち、例えば炭素数が１６の飽和脂肪酸であるパルミチン酸は、「パルミチン酸１６：０」及び「パルミチン酸（１６：０）」と表すことができ、また炭素数が１８で分子内に炭素－炭素二重結合を１つ有する不飽和脂肪酸であるオレイン酸は、「オレイン酸１８：１」及び「オレイン酸（１８：１）」と表すことができる。
（【００１１】以降は省略されています）

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