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公開番号2024067465
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-05-17
出願番号2022177566
出願日2022-11-04
発明の名称腎細胞凝集体を含むプレート、それを用いた薬物動態検査用キット、毒性検査用キット及び創薬開発用キット
出願人日機装株式会社
代理人個人,個人
主分類C12N 5/071 20100101AFI20240510BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】複数サンプルの細胞凝集体を用いて薬物動態・毒性や薬効を評価する上で、これらの評価精度をより高める手段を提供することである。
【解決手段】複数のウェルを有するプレートであって、前記ウェルには、腎細胞の凝集体と液体とが収容されており、前記ウェルの開口部は、フィルムで被覆されており、前記ウェルの全容積に対する、前記凝集体と前記液体との合計体積の比が、所定比率であるプレートである。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
複数のウェルを有するプレートであって、
前記ウェルには、腎細胞の凝集体と液体とが収容されており、
前記ウェルの開口部は、被覆部材で覆われており、
前記ウェルの全容積に対する、前記凝集体と前記液体との合計体積の比は、３５％以上７５％以下である
ことを特徴とするプレート。
続きを表示（約 330 文字）【請求項２】
前記液体に対する、前記凝集体の比重が、１．００以上１．２０以下である、請求項１記載のプレート。
【請求項３】
前記被覆部材の水蒸気透過度が、５００ｇ／ｍ
２
／２４ｈｒ以上である、請求項１記載のプレート。
【請求項４】
前記凝集体と前記液体とを凍結させた、請求項１記載のプレート。
【請求項５】
請求項１～４のいずれか一項に記載されたプレートを含む薬物動態検査用キット。
【請求項６】
請求項１～４のいずれか一項に記載されたプレートを含む毒性検査用キット。
【請求項７】
請求項１～４のいずれか一項に記載されたプレートを含む創薬開発用キット。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、腎細胞凝集体を含むプレート、それを用いた薬物動態検査用キット、毒性検査用キット及び創薬開発用キットに関する。
続きを表示（約 2,500 文字）【背景技術】
【０００２】
生体に投与された薬剤は、生体内に吸収された後、腎臓において近位尿細管で血液から尿中に排出される。そのため、薬剤の腎毒性によりしばしば腎障害が引き起こされる。創薬研究においては、薬剤の作用を明らかにするために腎臓での薬物動態を調べることは非常に重要である。このことから、腎細胞を用いた薬物動態や毒性を評価可能な創薬支援デバイスの開発が望まれている。また、このような創薬支援デバイスは、腎臓に関する疾患（例えば、糖尿病、腎臓がん、高尿酸血症等）の治療薬開発にも有用である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
特開２０２１－１９１３０５
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ここで、薬物動態の確認や創薬に有用なものとして、腎細胞の細胞凝集体が提案されている（例えば、特許文献１）。そして、通常、試験対象の薬剤に対し、複数サンプルの細胞凝集体（典型的には、複数のウェルを有し、各ウェルに細胞凝集体が配されたプレート）を用いて薬物動態・毒性や薬効の確認と評価がなされる。本発明は、このような複数サンプルの細胞凝集体を用いて薬物動態・毒性や薬効を評価する上で、これらの評価精度をより高める手段を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の一形態は、
複数のウェルを有するプレートであって、
前記ウェルには、腎細胞の凝集体と液体とが収容されており、
前記ウェルの開口部は、被覆部材（例えば、フィルム、蓋等）で覆われており、
前記ウェルの全容積に対する、前記凝集体と前記液体との合計体積の比は、３５％以上７５％以下である
ことを特徴とするプレートである。
また、本発明の一形態は、前記液体に対する、前記凝集体の比重が、１．００以上１．２０以下である前記プレートであってもよい。
また、本発明の一形態は、前記被覆部材の水蒸気透過度が５００ｇ／ｍ
２
／２４ｈ以上である前記プレートであってもよい。
また、本発明の一形態は、前記凝集体と前記液体とを凍結させたものであってもよい。
また、本発明の一形態は、前記プレートを含む薬物動態検査用キットである。
また、本発明の一形態は、前記プレートを含む毒性検査用キットである。
また、本発明の一形態は、前記プレートを含む創薬開発用キットである。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、複数サンプルの細胞凝集体を用いて薬物動態・毒性や薬効を評価する上で、これらの評価精度をより高めることが可能な、複数のウェル内に腎細胞の凝集体が収納されているプレートを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
図１は、本形態に係るプレートの概略図である。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
＜＜腎細胞の凝集体を含むプレート＞＞
本形態に係るプレートは、複数のウェルを有している。そして、各ウェルには、液体と、該液体内に１個又は複数の腎細胞の凝集体と、が含まれている。更に、該複数のウェルは、それら開口部が被覆部材で覆われている。例えば、図１は、本形態の一例に係るウェルプレートを含む培養容器である。図１左（上下）に示すように、培養容器は、表面が被覆部材（図ではフィルム）で覆われたウェルプレート（図では、９６ウェル、Ｖ底を例示）と、ウェルプレート蓋と、を有している。また、後述するように、図１右に示すように、培地と凝集体とがウェルを満たさない程度にウェル内に収納されており、培地上面から被覆部材（図ではフィルム）までの間には気層が存在する。以下、各要素を詳述する。
【０００９】
＜腎細胞の凝集体＞
本形態において使用される腎細胞は、培養可能であればよく、その供給源を問わない。腎細胞は、哺乳類由来であることが好ましく、ヒト、サルなどの霊長類由来であることが好ましい。また、目的に応じて、正常腎臓由来であってもよく、疾患を有する腎臓由来であってもよい。腎細胞としては、例えば、上皮、皮質、近位尿細管、遠位尿細管、集合管、糸球体等を構成する細胞、具体的には、近位尿細管上皮細胞（ＲＰＴＥＣ）、メサンギウム細胞等が挙げられる。腎細胞は、初代細胞でもよく、ｉＰＳ細胞又はＥＳ細胞などの幹細胞由来の腎細胞でもよい。また、腎細胞は、不死化された腎細胞、株化細胞（ＨＫ－２細胞等）、他動物種由来の細胞（ＭＤＣＫ細胞、ＬＬＣ－ＰＫ１細胞、ＪＴＣ－１２細胞等）、特定のトランスポーター等のタンパク質を発現させるために腎細胞に遺伝子導入した強制発現細胞であってもよい。より具体的には、腎細胞としては、例えば腎臓から採取、単離したヒト近位尿細管上皮細胞、ヒト遠位尿細管上皮細胞及びヒト集合管上皮細胞、並びに、ヒトｉＰＳ細胞又はヒトＥＳ細胞から分化誘導された近位尿細管上皮細胞、遠位尿細管上皮細胞及び集合管上皮細胞が例示される。創薬研究に使用するためには、近位尿細管上皮細胞、特に、ヒト正常腎由来の近位尿細管上皮細胞が好ましい。
【００１０】
ここで、細胞の「凝集体」は、数個以上の細胞の塊状の集合体を指す。凝集塊、スフェロイドともいう。凝集体を構成する細胞の数は、例えば５個以上、２５個以上、５０個以上、好ましくは１００個以上、より好ましくは１２５個以上、更に好ましくは２００個、特に好ましくは５００個以上である。凝集体を構成する細胞の数は、例えば、４０００個以下、好ましくは１００００個以下、より好ましくは２０００個以下、１０００個以下である。凝集体を構成する細胞数がこのような範囲だと、培養液中でほぼ全ての細胞が生存を維持し、プレート内における複数の凝集体間でのより高い均質性が可能となる。
（【００１１】以降は省略されています）

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