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公開番号2024056807
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-04-23
出願番号2024017718,2021195231
出願日2024-02-08,2017-01-26
発明の名称一本鎖オリゴヌクレオチド
出願人日産化学株式会社
代理人弁理士法人津国
主分類C12N 15/113 20100101AFI20240416BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】高効率に標的遺伝子を制御し、容易に製造できる一本鎖オリゴヌクレオチドの提供。
【解決手段】式X-L-Yで表され、XとYとが第一ヌクレオチド配列部分と第二ヌクレオチド配列部分とでハイブリダイズする一本鎖オリゴヌクレオチド。Xは、7～100個のヌクレオチドからなり、少なくとも1個の修飾ヌクレオチドを含み、第二オリゴヌクレオチドとのハイブリダイズを可能とし、RNaseHによって認識される少なくとも4個の連続するヌクレオチドを含む第一ヌクレオチド配列を有する。Yは、4～100個のヌクレオチドからなり、第一オリゴヌクレオチドとのハイブリダイズを可能とし、少なくとも1個のリボヌクレオチドを含む第二ヌクレオチド配列を有する。ヌクレオチド配列X及びYの少なくとも一方が、標的RNAとのハイブリダイズを可能とするアンチセンス配列を有する。Lは、生理的条件で分解される第三オリゴヌクレオチドに由来する基。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
式
Ｘ－Ｌ－Ｙ
（式中、Ｘは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択され、糖部、塩基部及びリン酸部の少なくとも１つが修飾されたヌクレオチドの少なくとも１個を含む７～１００個のヌクレオチドからなる第一オリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｙは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド及び糖部修飾ヌクレオチドから独立して選択され、４～１００個のヌクレオチドからなる第二オリゴヌクレオチドに由来する基であり、
Ｌは、その両端で前記第一オリゴヌクレオチド及び第二オリゴヌクレオチドとそれぞれ共有結合し、生理的条件で分解される第三オリゴヌクレオチドに由来する基であり、
前記第一オリゴヌクレオチドはヌクレオチド配列Ｘを有し、前記第二オリゴヌクレオチドはヌクレオチド配列Ｙを有し、
前記ヌクレオチド配列Ｘは、第二オリゴヌクレオチドの少なくとも一部とのハイブリダイズを可能とし、ＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む第一ヌクレオチド配列を含み、
前記ヌクレオチド配列Ｙは第一オリゴヌクレオチドの少なくとも一部とのハイブリダイズを可能とし、少なくとも１個のリボヌクレオチドを含む第二ヌクレオチド配列を含み、
前記ヌクレオチド配列Ｘ及びヌクレオチド配列Ｙの少なくとも一方が、標的ＲＮＡとのハイブリダイズを可能にする少なくとも１つのアンチセンス配列を含み、
前記アンチセンス配列を２以上有する場合、それぞれのアンチセンス配列部分がハイブリダイズする標的ＲＮＡは同一でも異なっていてもよい。）
で表され、ＸとＹとが第一ヌクレオチド配列部分と第二ヌクレオチド配列部分とでハイブリダイズする一本鎖オリゴヌクレオチド。
続きを表示（約 860 文字）【請求項２】
Ｘが、少なくとも１個の糖部修飾ヌクレオチドを含み、前記第一ヌクレオチド配列が、前記アンチセンス配列であり、前記標的ＲＮＡとハイブリダイズした際にＲＮａｓｅＨによって認識される少なくとも４個の連続するヌクレオチドを含む配列である、請求項１に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項３】
Ｘが３’側でＬに結合し、Ｙが５’側でＬに結合する、請求項１又は２に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項４】
Ｘが５’側でＬに結合し、Ｙが３’側でＬに結合する、請求項１又は２に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項５】
第三オリゴヌクレオチドに含まれるヌクレオチドが、ホスホジエステル結合で互いに連結されている、請求項１から４のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項６】
第三オリゴヌクレオチドが、ＤＮＡ又はＲＮＡである、請求項１から５のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項７】
第一オリゴヌクレオチドは、第一ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側の少なくとも一方に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、請求項１から６のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項８】
第一オリゴヌクレオチドは、第一ヌクレオチド配列部分の５’側及び３’側に隣接して結合する糖部修飾ヌクレオチドを含む、請求項１から７のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項９】
第一オリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエート結合を含む、請求項１から８のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項１０】
第一ヌクレオチド配列が、少なくとも１個のデオキシリボヌクレオチドを含む４～２０個のヌクレオチドからなる配列である、請求項１から９のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、一本鎖オリゴヌクレオチドに関する。
続きを表示（約 1,700 文字）【背景技術】
【０００２】
アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）は、標的遺伝子のｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ前駆体又はリボソームＲＮＡ、転移ＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ等のｎｃＲＮＡ（ノンコーディングＲＮＡ）に対して相補的なオリゴヌクレオチドであり、約８～３０塩基からなる１本鎖のＤＮＡ、ＲＮＡ及び／又はそれらの構造類似体である。ＡＳＯは、該アンチセンスオリゴヌクレオチドが標的とするｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ前駆体、又はｎｃＲＮＡと二本鎖を形成することによりｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ前駆体又はｎｃＲＮＡの働きを抑制する。
【０００３】
しかし、ＡＳＯは、生体内のヌクレアーゼにより分解されやすく、また標的細胞への取り込み効率が低いため、実用化は難しい。これら２つの大きな問題点を克服するために、有効成分であるオリゴヌクレオチド自体の化学修飾と、オリゴヌクレオチドを標的細胞内へ送達させるドラッグデリバリーシステム（ＤＤＳ）の研究が長年行われている。
【０００４】
ＡＳＯ自体の化学修飾の例としては、リン酸部分が修飾されているＳ－オリゴ（ホスホロチオエート）、糖部分が修飾されている２’，４’－ＢＮＡ（ｂｒｉｄｇｅｄｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄ）／ＬＮＡ（ｌｏｃｋｅｄｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄ）（特許文献１～５参照）等が知られている。
【０００５】
ＤＤＳの例としては、カチオン性リポソームや高分子ミセル等のキャリアを利用する方法等が知られている。また、特許文献６にはアシアロ糖タンパク質受容体と相互作用を有する糖誘導体であるＧａｌＮａｃ（Ｎ－アセチルガラクトサミン）誘導体がリンカーを介して結合しているＡＳＯが記載されており、該ＡＳＯを投与すると、肝臓での標的遺伝子の発現が抑制されたことが記載されている。
【０００６】
特許文献７及び非特許文献１には、ＡＳＯと相補的なＲＮＡオリゴヌクレオチドを含む二本鎖オリゴヌクレオチド（ＨＤＯ）にトコフェロール（Ｔｏｃ）を結合させることにより、マウスにおいて、ＡＳＯと比較して、効率よく肝臓に送達、集積され、肝臓での標的遺伝子の発現が抑制されたことが記載されている。特許文献８には、ＨＤＯにＧａｌＮａｃ誘導体がリンカーを介して結合しているＡＳＯが記載されており、該アンチセンスオリゴヌクレオチドを皮下投与すると、トコフェロール（Ｔｏｃ）修飾体より効率的に発現が抑制されたことが記載されている。
【０００７】
特許文献９には、ＤＮＡとＲＮＡの二本鎖オリゴヌクレオチドユニットのＲＮＡ鎖末端にＡＳＯが結合したオリゴヌクレオチド（ＨＣＤＯ）が、ＡＳＯと比較して効率よく標的ＲＮＡを抑制することが記載されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
ネイチャーコミュニケーションズ、６巻、アーティクルナンバー７９６９（２０１５年）
【特許文献】
【０００９】
国際公開第９８／３９３５２号
国際公開第２００５／０２１５７０号
国際公開第２００３／０６８７９５号
国際公開第２０１１／０５２４３６号
国際公開第２０１１／１５６２０２号
国際公開第２０１４／１７９６２０号
国際公開第２０１３／０８９２８３号
国際公開第２０１５／１０５０８３号
国際公開第２０１４／１９２３１０号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
医薬品として臨床現場にてヒトを含む哺乳動物に適応する場合においては、効率的に標的遺伝子の発現を制御できる新たなる核酸医薬品が望まれていた。また、二本鎖オリゴヌクレオチド（例えば、前記ＨＤＯ、ＨＣＤＯ）を製造する場合、アンチセンス鎖と相補的なＲＮＡ鎖を別々に合成した上で、最後にこれらの鎖をハイブリダイズする工程が必要となる。さらに動物や細胞に投与する際には、一本鎖への解離を抑制した状態とする必要があり、その取扱い条件の設定にも労力を要する場合が想定される。
（【００１１】以降は省略されています）

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