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公開番号2024019717
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-02-09
出願番号2023222458,2020551498
出願日2023-12-28,2019-03-26
発明の名称細胞培養において産生される抗体の総非フコシル化グリコフォーム
出願人アムジェンインコーポレイテッド
代理人個人,個人
主分類C12P 21/08 20060101AFI20240202BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】細胞培養において産生される抗体の総非フコシル化グリコフォームの提供。
【解決手段】本明細書では、所望の、又は所定の、又は予め選択されたレベルの総非フコシル化(TAF)グリコフォームを含む抗体組成物を産生する方法が提供される。代表的な実施形態において、本方法は、所望されるTAFグリコフォームのレベルに応じて、本明細書に記載されるとおりの特定の濃度でフコース及び/又はグルコースを含む細胞培養培地中においてグリコシル化適格細胞を維持することを含む。グリコシル化タンパク質及びそのTAFグリコフォームを含む関連組成物も本明細書中で提供される。細胞培養培地もまた提供される。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
明細書に記載の発明。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年３月２６日に出願された米国仮特許出願第６２／６４８，３０８号に対する優先権を主張する。各出願の内容は、参照により本明細書に援用される。
続きを表示（約 2,700 文字）【０００２】
電子ファイルでの提出物の参照による援用
本明細書と同時に提出されたコンピューター可読のヌクレオチド／アミノ酸配列リストは、その全体が参照によって援用され、当該リストは、以下：２８，５４７バイトＡＳＣＩＩ（テキスト）ファイル、ファイル名「５２２４９Ａ＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」、２０１９年３月２６日作成、として識別される。
【背景技術】
【０００３】
グリコシル化は、例えば、タンパク質折り畳み、品質管理、分子輸送及び局在化、並びに細胞表面受容体相互作用を含む複数の細胞機能に関与するため、最も一般的で、また重要な翻訳後修飾の１つである。グリコシル化は、治療用糖タンパク質の生理活性、薬物動態、免疫原性、溶解度、及びインビボクリアランスに影響を与えるため、組換えタンパク質薬の治療効果に影響を及ぼす。Ｆｃグリコフォームプロファイルは、特に、抗体の臨床効果及び薬物動態に直接影響を及ぼすため、組換え抗体に関する重要な製品品質特性である。
【０００４】
高マンノース（ＨＭ）グリコフォーム含量は、ある種の治療用抗体の薬物動態特性に影響を及ぼすことが判明している（Ｇｏｅｔｚｅ，ｅｔａｌ．，（２０１１）Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ２１，９４９－５９；Ｙｕ，ｅｔａｌ．，（２０１２）ＭＡｂｓ４，４７５－８７）。ＨＭグリコフォームは、抗体の血清クリアランス速度に影響を与えるだけでなく、このようなグリコフォームは、非フコシル化（非フコ）グリコフォームに加えて、抗体エフェクター機能又は抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）としても知られる抗体介在性の標的細胞死滅にも影響し得る。
【０００５】
多くの要因がグリカン構造、したがってタンパク質（糖タンパク質）の最終的なグリコシル化形態（グリコフォーム）に影響を与える。例えば、抗体を発現する細胞株、細胞培養培地、フィード培地組成、及び細胞培養中の供給のタイミングは、タンパク質のグリコフォームの産生に影響し得る。
研究グループにより、抗体の特定のグリコフォームのレベルに影響を与えるための多くの方法が示唆されている一方で、治療用抗体の組換え産生中に総非フコシル化（ＴＡＦ）グリコフォームのレベルを操作し、調節するための単純且つ効率的な方法が生物学的製剤産業において依然として必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
Ｇｏｅｔｚｅ，ｅｔａｌ．，（２０１１）Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ２１，９４９－５９
Ｙｕ，ｅｔａｌ．，（２０１２）ＭＡｂｓ４，４７５－８７
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
最初に記載されるのは、組換えグリコシル化タンパク質（例えば、抗体又は抗体結合タンパク質）を産生する細胞を含む細胞培養培地におけるフコース及び／又はグルコースの濃度が、産生される組換えグリコシル化タンパク質のＴＡＦグリコフォームのレベルに影響を与えることを実証するデータである。組換えグリコシル化タンパク質（例えば、抗体又は抗体結合タンパク質）のＴＡＦグリコフォームのレベルにおける比較的大きい変化は、組換えグリコシル化タンパク質（例えば、抗体又は抗体結合タンパク質）を産生する細胞を含む細胞培養培地中のフコースの濃度を操作することによって実現され得るが、ＴＡＦグリコフォームレベルにおける比較的小さい変化は、本明細書に記載されるとおりの細胞培養培地中のグルコースの濃度を変化させることによって実現され得る。また、データは、細胞培養培地のグルコース濃度が、高マンノースグリカン及び非フコシル化グリカンのレベルに影響を及ぼす一方で、細胞培養培地のフコース濃度は、非フコシル化グリカンのレベルに影響を及ぼすが、高マンノースグリカンレベルに影響を及ぼさないことを実証している。化学式においてただ１つの酸素原子が異なるこれらの糖の各々がＴＡＦグリコフォームレベルに対して差次的効果をもたらすという発見は、予想されなかった。特定の理論に束縛されることなく、本明細書で教示されるとおりの濃度でフコース及び／又はグルコースを含む細胞培養培地において組換えグリコシル化タンパク質（例えば、抗体又は抗体結合タンパク質）を産生する細胞を維持することは、所望の又は既定の又は事前に選択されたレベルのＴＡＦグリコフォーム（例えば、高マンノースグリカン及び非フコシル化グリカン）を有する組換えグリコシル化タンパク質（例えば、抗体又は抗体結合タンパク質）組成物の産生を可能にする。したがって、本開示は、所望の又は既定の又は事前に選択されたレベルのＴＡＦグリコフォームを含む組換えグリコシル化タンパク質組成物（例えば、抗体組成物又は抗体結合タンパク質組成物）を産生する方法に関する。
【０００８】
本開示は、組換えグリコシル化タンパク質組成物（例えば、抗体組成物又は抗体結合タンパク質組成物）を産生する方法を提供する。代表的な実施形態において、本方法は、所望されるＴＡＦグリコフォームのレベルに応じて、本明細書に記載されるとおりの特定の濃度でフコース及び／又はグルコースを含む細胞培養培地中においてグリコシル化適格細胞を維持することを含む。
【０００９】
代表的な実施形態において、組換えグリコシル化タンパク質組成物（例えば、抗体組成物又は抗体結合タンパク質組成物）中のＴＡＦグリコフォームのレベルは、約１０％又はそれ未満であり、代表的な態様において、本方法は、フコースを含む細胞培養培地中でグリコシル化適格細胞を維持することを含み、フコースは、約０．１７ｇ／Ｌと約１．０ｇ／Ｌの間の濃度で培養培地中に存在する。
【００１０】
代表的な実施形態において、組換えグリコシル化タンパク質組成物（例えば、抗体組成物又は抗体結合タンパク質組成物）中のＴＡＦグリコフォームのレベルは、約１０％又はそれ未満であり、代表的な態様において、本方法は、フコースを含む細胞培養培地中でグリコシル化適格細胞を維持することを含み、フコースは、約０．１ｇ／Ｌと約１．０ｇ／Ｌの間の濃度で培養培地中に存在し、且つグリコシル化適格細胞は、デノボ経路又はサルベージ経路の酵素の活性を変えるように遺伝的に改変されない。
（【００１１】以降は省略されています）

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