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公開番号2025093922
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-06-24
出願番号2025023029,2021545402
出願日2025-02-17,2020-02-04
発明の名称CLN6ポリヌクレオチドのアデノ随伴ウイルス送達
出願人リサーチ・インスティチュート・アット・ネーションワイド・チルドレンズ・ホスピタル
代理人園田・小林弁理士法人
主分類C12N 7/01 20060101AFI20250617BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】神経セロイドリポフスチン症またはCLN6-バッテン病のCLN6遺伝子治療のためのrAAV、ならびにrAAVの使用方法を提供する。
【解決手段】CLN6ポリペプチドをコードする自己相補的組換えアデノ随伴ウイルス9(scAAV9)であって、5’から3’の順序で、第1のAAV逆方向末端反復、特定のヌクレオチド配列を含むCBプロモーター、前記CLN6ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および第2のAAV逆方向末端反復を含むscAAV9ゲノムを含む、自己相補的組換えアデノ随伴ウイルス9(scAAV9)が提供される。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
ＣＬＮ６ポリペプチドをコードする自己相補的組換えアデノ随伴ウイルス９（ｓｃＡＡＶ９）であって、５’から３’の順序で、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、配列番号３のヌクレオチド配列を含むＣＢプロモーター、配列番号１の前記ＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含むｓｃＡＡＶ９ゲノムを含む、自己相補的組換えアデノ随伴ウイルス９（ｓｃＡＡＶ９）。
続きを表示（約 890 文字）【請求項２】
前記ｓｃＡＡＶ９ゲノムが、５’から３’の順序で、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、ＣＭＶエンハンサ、配列番号３の前記ヌクレオチド配列を含むＣＢプロモーター、ＳＶ４０イントロン、配列番号１の前記ＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む、請求項１に記載のｓｃＡＡＶ９。
【請求項３】
前記ｓｃＡＡＶ９ゲノムが、５’から３’の順序で、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、配列番号３の前記配列を含むＣＢプロモーター、配列番号１の前記ＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ウシ成長ホルモンポリアデニル化ポリＡ配列、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む、請求項１に記載のｓｃＡＡＶ９。
【請求項４】
前記ＣＬＮ６ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、配列番号２と少なくとも９０％同一の配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のｓｃＡＡＶ９。
【請求項５】
前記ＣＬＮ６ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、配列番号２の核酸配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のｓｃＡＡＶ９。
【請求項６】
前記ｓｃＡＡＶ９ゲノムが、配列番号４の核酸配列と少なくとも９０％同一の核酸配列を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載のｓｃＡＡＶ９。
【請求項７】
前記ｓｃＡＡＶ９ゲノムが、配列番号４の核酸配列と少なくとも９５％同一の核酸配列を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載のｓｃＡＡＶ９。
【請求項８】
前記ｓｃＡＡＶ９ゲノムが、配列番号４の前記核酸配列を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載のｓｃＡＡＶ９。
【請求項９】
前記ＡＡＶ逆方向末端反復が、ＡＡＶ２逆方向末端反復である、請求項１～８のいずれか一項に記載のｓｃＡＡＶ９。
【請求項１０】
前記ｒＡＡＶ９ゲノムが、一本鎖ゲノムを含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載のｓｃＡＡＶ９。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１９年２月４日に出願された米国仮特許出願第６２／８００，９１５号、２０１９年７月３０日に出願された米国仮特許出願第６２／８８０，６４１号、２０１９年７月３１日に出願された米国仮特許出願第６２／８８１，１５１号、２０１９年１０月９日に出願された米国仮特許出願第６２／９１２，９７７号、および２０１９年１０月１８日に出願された米国仮特許出願第６２／９２３，１２５号の優先権を主張し、これらの出願は全て、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
続きを表示（約 2,200 文字）【０００２】
配列表の参照による組み込み
本出願は、開示の別個の部分として、コンピュータ可読形式の配列表（ファイル名：２０２０年１月３１日に作成された５３８９４＿ＳｅｑＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ、２４，９２３バイト、ＡＳＣＩＩテキストファイル）を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００３】
本開示は、セロイドリポフスチン症ニューロン６（ＣＬＮ６）ポリヌクレオチドの組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）送達に関する。本開示は、神経セロイドリポフスチン症（ＮＣＬ）またはＣＬＮ６－バッテン病のＣＬＮ６遺伝子治療のためのｒＡＡＶおよびｒＡＡＶの使用方法を提供する。
【背景技術】
【０００４】
神経セロイドリポフスチン症（ＮＣＬ）は、まとめてバッテン病と呼ばれる一群の重度の神経変性障害である。これらの障害は神経系に影響を及ぼし、典型的には、例えば、移動および思考能力に関する問題を悪化させる。異なるＮＣＬは、それらの遺伝的原因によって区別される。
【０００５】
ＣＬＮ６－バッテン病は、２つの異なる形態、より一般的な形態の後期乳児変異型（ｖＬＩＮＣＬ）、および成人発症型ＮＣＬ（Ａ型クフス病とも呼ばれる）として起こり得る（Ｃａｎｎｅｌｉｉｅｔａｌ．，ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ．２００９；３７９（４）：８９２－７、Ａｒｓｏｖｅｔａｌ．，ＡｍＪＨｕｍＧｅｎｅｔ．２０１１；８８（５）：５６６－７３）。ｖＬＩＮＣＬ（本明細書ではＣＬＮ６－バッテン病と称される）では、発症年齢は１８ヶ月～６歳の間であり、死亡は通常１２～１５歳までに起こる。ＣＬＮ６－バッテン病は最初、幼児期における言語障害および運動／認知発達の遅延として現れ、ほとんどの患者は発症から４年以内に車椅子に拘束される（Ｃａｎａｆｏｇｌｉａｅｔａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ．２０１５；８５（４）：３１６－２４）。この疾患は、視力喪失、重度の運動障害、再発性発作、認知症および他の神経変性症状を含むように進行する。
【０００６】
ＣＬＮ６は、７つの推定膜貫通ドメインを有する３１１個のアミノ酸のタンパク質であり、そして主に小胞体に局在する。他のＣＬＮタンパク質と同様に、その正確な機能は不明のままであるが、それは細胞内輸送およびリソソーム機能に関与している。ＣＬＮ６には現在７０を超える特徴付けられた疾患を引き起こす変異があり（Ｗａｒｒｉｅｒｅｔａｌ．，ＢｉｏｃｈｉｍｉｃａｅｔＢｉｏｐｈｙｓｉｃａＡｃｔａ．２０１３；１８３２（１１）：１８２７－３０）、これらの変異の大部分はＣＬＮ６タンパク質の完全な喪失または高度に不安定および／もしくは非機能的であると考えられる切断型ＣＬＮ６タンパク質産物の産生のいずれかをもたらす。ＣＬＮ６－バッテン病のいくつかの天然動物モデルが記載されており、これらには、ヒツジ、イヌ、およびマウスのモデルが含まれる。Ｃｌｎ６
ｎｃｌｆ
マウスモデル（本明細書では「Ｃｌｎ６
ｎｃｌｆ
マウス」と称される）に見出される自然変異は、この疾患の多くの病理学的および行動的側面を再現する（Ｍｏｒｇａｎｅｔａｌ．，ＰＬｏＳＯｎｅ．２０１３年；８（１１）：ｅ７８６９４）。Ｃｌｎ６
ｎｃｌｆ
マウスは、追加のシトシン（ｃ．３０７ｉｎｓＣ、Ｐ１０２後のフレームシフト）の挿入を含み、ＣＬＮ６－バッテン病患者に一般的に見られる変異と相同な未成熟終止コドンが生じる（Ｇａｏｅｔａｌ．，ＡｍＪＨｕｍＧｅｎｅｔ．２００２；７０（２）：３２４－３５、Ｗｈｅｅｌｅｒｅｔａｌ．，ＡｍＪＨｕｍＧｅｎｅｔ．２００２年；７０（２）：５３７－４２）。
【０００７】
現在、ＣＬＮ６－バッテン病の症状を改善することができる治療法はない。したがって、ＣＬＮ６－バッテン病の治療に対する当該技術分野における必要性が残っている。
【発明の概要】
【０００８】
本明細書に提供されるのは、組換えＡＡＶを使用するＣＬＮ６遺伝子治療のための方法および製品である。
【０００９】
本明細書に提供されるのは、５’から３’の順序でハイブリッドニワトリβ－アクチン（ＣＢ）プロモーターと、ＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドとを含む、ｒＡＡＶ９ゲノムを含む、ＣＬＮ６ポリペプチドをコードする組換えアデノ随伴ウイルス９（ｒＡＡＶ９）である。場合によっては、ｒＡＡＶ９ゲノムは、自己相補的ゲノムを含む。あるいは、ｒＡＡＶ９ゲノムは、一本鎖ゲノムを含む。
【００１０】
配列番号１に記載のＣＬＮ６ポリペプチドをコードする自己相補的組換えアデノ随伴ウイルス９（ｓｃＡＡＶ９）が提供され、この中で、ｓｃＡＡＶ９のゲノムは、５’から３’の順序で、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、配列番号３の配列を含むハイブリッドニワトリβ－アクチン（ＣＢ）プロモーター、配列番号２に記載のＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む。ＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号２と少なくとも９０％同一であり得る。
（【００１１】以降は省略されています）

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