特許ウォッチ

公開番号2025084751
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-06-03
出願番号2025016011,2021556373
出願日2025-02-03,2020-03-18
発明の名称SpyTag含有ペリプラズム融合タンパク質のプロテアーゼTSP及びOMPT分解からの保護
出願人バイオ-ラッドエービーディーセロテックゲーエムベーハー
代理人弁理士法人南青山国際特許事務所
主分類C12P 21/02 20060101AFI20250527BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】ペリプラズム融合タンパク質を製造する方法、及び前記方法に使用する変異大腸菌株を提供する。
【解決手段】第1のタンパク質に付加、又は第1のタンパク質のアミノ酸配列内に埋め込まれた結合モチーフを含むペリプラズム融合タンパク質、ペリプラズム融合タンパク質をコードする核酸構築物、核酸構築物を含むベクター、及びペリプラズム融合タンパク質を製造する方法が提供される。また、ペリプラズム融合タンパク質を製造するためのプロテアーゼ欠損宿主細胞も提供される。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
ペリプラズム融合タンパク質を製造する方法であって、
培養培地中で前記ペリプラズム融合タンパク質をコードする核酸を含有するベクターで形質転換された変異大腸菌宿主細胞を培養し、前記ペリプラズム融合タンパク質を発現し、
前記変異大腸菌宿主細胞から前記ペリプラズム融合タンパク質を回収することを含み、
前記ペリプラズム融合タンパク質は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、又はｓｃＦａｂを含む抗原結合フラグメントに付加した結合モチーフを含み、
前記結合モチーフは、配列番号１（ＳｐｙＴａｇ）又は配列番号１（ＳｐｙＴａｇ）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含み、それぞれがＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ、ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００２、又はＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００３へのタンパク質ライゲーションを介する共有結合を形成することができ、
前記変異大腸菌宿主細胞は、
ａ）突然変異Ｔｓｐ（尾部特異的プロテアーゼ）タンパク質をコードするＴｓｐ遺伝子の突然変異であって、プロテアーゼ活性を低下若しくは消失させる当該突然変異、又は、
ｂ）前記Ｔｓｐタンパク質の発現を低下若しくは消失させる前記Ｔｓｐ遺伝子若しくはＴｓｐ遺伝子の調節配列の突然変異、又は
ｃ）前記Ｔｓｐタンパク質活性を低下若しくは消失させる細菌染色体の領域の１つ以上の欠失、又は
ｄ）前記Ｔｓｐプロテアーゼ活性を減少若しくは消失させる阻害剤若しくは不活性化剤、又はＴｓｐプロテアーゼ発現の阻害剤
を含み、
野生型大腸菌細胞と比較して、Ｔｓｐタンパク質活性が低下又は消失している、方法。
続きを表示（約 4,500 文字）【請求項２】
ペリプラズム融合タンパク質を製造する方法であって、
培養培地中で前記ペリプラズム融合タンパク質をコードする核酸を含有するベクターで形質転換された変異大腸菌宿主細胞を培養し、前記ペリプラズム融合タンパク質を発現し、
前記変異大腸菌宿主細胞から前記ペリプラズム融合タンパク質を回収することを含み、
前記ペリプラズム融合タンパク質は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、又はｓｃＦａｂを含む抗原結合フラグメントに付加した結合モチーフを含み、
前記結合モチーフは、配列番号２（ＳｐｙＴａｇ００２）若しくは配列番号２（ＳｐｙＴａｇ００２）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列、又は配列番号３６（ＳｐｙＴａｇ００３）若しくは配列番号３６（ＳｐｙＴａｇ００３）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含み、それぞれがＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ、ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００２、若しくはＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００３へのタンパク質ライゲーションを介する共有結合を形成することができ、
前記変異大腸菌宿主細胞は、
ａ）突然変異Ｔｓｐタンパク質をコードするＴｓｐ遺伝子の突然変異であって、プロテアーゼ活性を低下若しくは消失させる当該突然変異、又は、前記Ｔｓｐタンパク質の発現を低下若しくは消失させる前記Ｔｓｐ遺伝子若しくはＴｓｐ遺伝子の調節配列の突然変異、又は、前記Ｔｓｐタンパク質活性を低下若しくは消失させる細菌染色体の領域の１つ以上の欠失、及び
ｂ）突然変異ｏｍｐＴタンパク質をコードするｏｍｐＴ遺伝子の突然変異であって、プロテアーゼ活性を低下若しくは消失させる当該突然変異、又は、前記ｏｍｐＴタンパク質の発現を低下若しくは消失させる前記ｏｍｐＴ遺伝子若しくはｏｍｐＴ遺伝子の調節配列の突然変異、又は、前記ｏｍｐＴタンパク質活性を低下若しくは消失させる細菌染色体の領域の１つ以上の欠失
を含み、
野生型大腸菌細胞と比較して、Ｔｓｐタンパク質活性及びｏｍｐＴタンパク質活性が低下又は消失している、方法。
【請求項３】
ペリプラズム融合タンパク質を製造する方法であって、
培養培地中で前記ペリプラズム融合タンパク質をコードする核酸を含有するベクターで形質転換された変異大腸菌宿主細胞を培養し、前記ペリプラズム融合タンパク質を発現し、
前記変異大腸菌宿主細胞から前記ペリプラズム融合タンパク質を回収することを含み、
前記ペリプラズム融合タンパク質は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、又はｓｃＦａｂを含む抗原結合フラグメントに付加した結合モチーフを含み、
前記結合モチーフは、配列番号２（ＳｐｙＴａｇ００２）若しくは配列番号２（ＳｐｙＴａｇ００２）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列、又は配列番号３６（ＳｐｙＴａｇ００３）若しくは配列番号３６（ＳｐｙＴａｇ００３）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含み、それぞれがＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ、ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００２、又はＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００３へのタンパク質ライゲーションを介する共有結合を形成することができ、
前記変異大腸菌宿主細胞は、
ａ）Ｔｓｐプロテアーゼの阻害剤若しくは不活性化剤、又はＴｓｐ発現の阻害剤、及び
ｂ）ｏｍｐＴプロテアーゼの阻害剤若しくは不活性化剤、又はｏｍｐＴ発現の阻害剤
を含み、野生型大腸菌細胞と比較して、Ｔｓｐタンパク質活性及びｏｍｐＴタンパク質活性が低下又は消失している、方法。
【請求項４】
前記結合モチーフは、前記抗原結合フラグメントのＣ末端に、直接又はリンカー配列を介して、付加している、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記抗原結合フラグメントは、Ｆａｂである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記変異大腸菌宿主細胞は、２０１９年１月８日に寄託されたＤＳＭ受託番号３３００４を有する変異体大腸菌ＴＧ１Ｆ－株である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記変異大腸菌宿主細胞は、２０１９年１月８日に寄託されたＤＳＭ受託番号３３００５を有する変異体大腸菌ＴＧ１Ｆ－株である、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、又はｓｃＦａｂを含む抗原結合フラグメントと、配列番号１（ＳｐｙＴａｇ）又は配列番号１（ＳｐｙＴａｇ）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含み、それぞれの配列がＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ、ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００２、若しくはＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００３へのタンパク質ライゲーションを介する共有結合を形成することができる結合モチーフと、を含むペリプラズム融合タンパク質をコードする核酸を含む、変異大腸菌ＴＧ１、ＴＧ１Ｆ－、ＸＬ１Ｂｌｕｅ、ＭＣ１０６１、ＳＳ３２０、ＢＬ２１、ＪＭ８３、ＪＭ１０９、ＨＢ２１５１、Ｗ３１１０、又はＣｍａｘ５アルファ株であって、
前記変異大腸菌株は、突然変異Ｔｓｐタンパク質をコードするＴｓｐ遺伝子の突然変異であって、プロテアーゼ活性を低下若しくは消失させる当該突然変異、又は、前記Ｔｓｐタンパク質の発現を低下若しくは消失させる前記Ｔｓｐ遺伝子若しくはＴｓｐ遺伝子の調節配列の突然変異、又は、前記Ｔｓｐタンパク質活性を低下若しくは消失させる細菌染色体の領域の１つ以上の欠失を含み、野生型大腸菌株と比較して、Ｔｓｐタンパク質活性が低下又は消失している、変異大腸菌株。
【請求項９】
ａ）Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、又はｓｃＦａｂを含む抗原結合フラグメントと、配列番号２（ＳｐｙＴａｇ００２）又は配列番号２（ＳｐｙＴａｇ００２）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含み、それぞれの配列がＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ、ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００２、若しくはＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００３へのタンパク質ライゲーションを介する共有結合を形成することができる結合モチーフと、を含むペリプラズム融合タンパク質をコードする核酸、あるいは
ｂ）Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、又はｓｃＦａｂを含む抗原結合フラグメントと、配列番号３６（ＳｐｙＴａｇ００３）又は配列番号３６（ＳｐｙＴａｇ００３）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含み、それぞれの配列がＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ、ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００２、若しくはＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００３へのタンパク質ライゲーションを介する共有結合を形成することができる結合モチーフと、を含むペリプラズム融合タンパク質をコードする核酸
を含む大腸菌ＴＧ１、ＴＧ１Ｆ－、ＸＬ１Ｂｌｕｅ、ＭＣ１０６１、ＳＳ３２０、ＢＬ２１、ＪＭ８３、ＪＭ１０９、ＨＢ２１５１、Ｗ３１１０、又はＣｍａｘ５アルファ株であって、
前記変異大腸菌株は、
ａ）突然変異Ｔｓｐタンパク質をコードするＴｓｐ遺伝子の突然変異であって、プロテアーゼ活性を低下若しくは消失させる当該突然変異、又は、前記Ｔｓｐタンパク質の発現を低下若しくは消失させる前記Ｔｓｐ遺伝子若しくはＴｓｐ遺伝子の調節配列の突然変異、又は、前記Ｔｓｐタンパク質活性を低下若しくは消失させる細菌染色体の領域の１つ以上の欠失、及び
ｂ）突然変異ｏｍｐＴタンパク質をコードするｏｍｐＴ遺伝子の突然変異であって、プロテアーゼ活性を低下若しくは消失させる突然変異、又は、前記ｏｍｐＴタンパク質の発現を低下若しくは消失させる前記ｏｍｐＴ遺伝子若しくはｏｍｐＴ遺伝子の調節配列の突然変異、又は、前記ｏｍｐＴタンパク質活性を低下若しくは消失させる細菌染色体の領域の１つ以上の欠失
を含み、
野生型大腸菌株と比較して、Ｔｓｐタンパク質活性及びｏｍｐＴタンパク質活性が低下又は消失している、変異大腸菌株。
【請求項１０】
変異体大腸菌株であって、
ａ）Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、又はｓｃＦａｂを含む抗原結合フラグメントと、
配列番号１（ＳｐｙＴａｇ）又は配列番号１（ＳｐｙＴａｇ）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含み、それぞれの配列がＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ、ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００２、又はＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００３へのタンパク質ライゲーションを介する共有結合を形成することができる結合モチーフであって、前記抗原結合フラグメントに付加した当該結合モチーフと、
を含むペリプラズム融合タンパク質の発現のために、
突然変異Ｔｓｐタンパク質をコードするＴｓｐ遺伝子の突然変異であって、プロテアーゼ活性を低下若しくは消失させる当該突然変異、又は、前記Ｔｓｐタンパク質の発現を低下若しくは消失させる前記Ｔｓｐ遺伝子若しくはＴｓｐ遺伝子の調節配列の突然変異、又は、前記Ｔｓｐタンパク質活性を低下若しくは消失させる細菌染色体の領域の１つ以上の欠失を含む変異体大腸菌株であって、
野生型大腸菌株と比較して、Ｔｓｐタンパク質活性が低下又は消失した変異体大腸菌株、あるいは
ｂ）Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、又はｓｃＦａｂを含む抗原結合フラグメントと、
配列番号２（ＳｐｙＴａｇ００２）若しくは配列番号２（ＳｐｙＴａｇ００２）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列、又は配列番号３６（ＳｐｙＴａｇ００３）若しくは配列番号３６（ＳｐｙＴａｇ００３）と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列をそれぞれ含み、それぞれの配列がＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ、ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００２、又はＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００３へのタンパク質ライゲーションを介する共有結合を形成することができる結合モチーフであって、前記抗原結合フラグメントに付加した、当該結合モチーフと、
を含むペリプラズム融合タンパク質の発現のために、
ｉ）突然変異Ｔｓｐタンパク質をコードするＴｓｐ遺伝子の突然変異であって、プロテアーゼ活性を低下若しくは消失させる当該突然変異、又は、前記Ｔｓｐタンパク質の発現を低下若しくは消失させる前記Ｔｓｐ遺伝子若しくはＴｓｐ遺伝子の調節配列の突然変異、又は、前記Ｔｓｐタンパク質活性を低下若しくは消失させる細菌染色体の領域の１つ以上の欠失、及び
ｉｉ）突然変異ｏｍｐＴタンパク質をコードするｏｍｐＴ遺伝子の突然変異であって、プロテアーゼ活性を低下若しくは消失させる当該突然変異、又は、前記ｏｍｐＴタンパク質の発現を低下若しくは消失させる前記ｏｍｐＴ遺伝子若しくはｏｍｐＴ遺伝子の調節配列の突然変異、又は、前記ｏｍｐＴタンパク質活性を低下若しくは消失させる細菌染色体の領域の１つ以上の欠失
を含む変異体大腸菌株であって、
野生型大腸菌株と比較して、Ｔｓｐタンパク質活性及びｏｍｐＴタンパク質活性が低下又は消失した、変異体大腸菌株。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願を相互参照
本出願は、２０１９年３月１８日出願の米国仮出願第６２／８１９，７５８号の優先権を主張するものであり、内容を参照することにより組み込まれる。
続きを表示（約 9,700 文字）【背景技術】
【０００２】
いくつかの技術によって、特定の所定の部位でのポリペプチドの共有結合又はライゲーションが可能になっている。一例を挙げると、ＳｐｙＴａｇ／ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ（非特許文献２２）システムであり、天然に存在するタンパク質における自然発生のイソペプチド結合形成の概念を用いて、１つのポリペプチドを別のポリペプチドに共有結合させている。このようなイソペプチド結合を含む
Streptococcus pyogenes
タンパク質ＦｂａＢ由来のドメインは２つの部分に分かれる。１つの部分、ＳｐｙＴａｇ（配列番号１）は、自己触媒中心の一部（例えば、アスパラギン酸残基）を含む１３アミノ酸ペプチドである。他の部分、ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒは、中心の他の部分（例えば、リジン）及び近接する触媒グルタミン酸塩又はアスパラギン酸残基を含む１１６アミノ酸タンパク質ドメインである。これらの２つのポリペプチドを混合することによって、自己触媒中心を回復し、イソペプチド結合の形成を導き、それによってＳｐｙＴａｇをＳｐｙＣａｔｃｈｅｒに共有結合的に連結する（非特許文献３２）。さらなるエンジニアリングによって、わずか８４のアミノ酸を有する短いＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ、最適化されたＳｐｙＴａｇ００２（配列番号２）及び反応の早いＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００２がもたらされた（全体が援用される非特許文献１７及び非特許文献１２）。さらなるエンジニアリングによって、拡散限界に近い反応による、別の最適化されたＳｐｙＴａｇ００３（配列番号３６）及びＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００３がもたらされた（全体が援用される非特許文献１３）。
【０００３】
互いにライゲーションされる２つのポリペプチドは、典型的には、ポリペプチドが混合されると、イソペプチド結合が形成されるような、ＦｂａＢからの自己触媒中心の一部を有する各ポリペプチドとの融合タンパク質として製造される。例えば、ＳｐｙＴａｇに連結された第１のポリペプチド及びＳｐｙＣａｔｃｈｅｒに連結された第２のポリペプチドは融合タンパク質として別々に製造され、そして第１及び第２のポリペプチドが一緒に混合されると、イソペプチド結合がＳｐｙＴａｇとＳｐｙＣａｔｃｈｅｒとの間で形成される。このタイプの融合タンパク質は、細菌中で製造される。多くの融合タンパク質は、細菌の細胞質において製造されるが、還元条件のために、ジスルフィド架橋タンパク質は、ジスルフィド結合を形成しないため、細胞質の還元環境において発現されるとき、適切に折り畳まれない。しかしながら、多くの重要なタンパク質の部類は、ジスルフィド結合を含んでいる。一例を挙げると、抗体フラグメントである。抗体Ｆｖ及びＦａｂフラグメントの機能発現が、酸化条件を有し、ジスルフィド結合の形成を可能にする、大腸菌などのグラム陰性細菌のペリプラズムへの発現タンパク質鎖の輸送を指示することによって行われ（Plueckthum A、1990、Antibodies from Escherichia coli、Nature 347、497-498）、これが、抗体エンジニアリング分野への道を開いた。多くのＳｐｙＴａｇ融合タンパク質の細菌組換え発現が、文献に記載されているが、それらはほとんどもっぱら細菌細胞質において発現していた（非特許文献１３）。ＳｐｙＴａｇ融合タンパク質のペリプラズム細菌発現については、わずかな例しか存在せず（非特許文献４、非特許文献３）、収率は低いか、又は不明であった。非特許文献１３、非特許文献４、及び非特許文献３は、その全体が援用される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
米国特許第９，５４７，００３号
米国特許出願第２００３／０１９８９５６号
ＷＯ公報第２０１６／１９３７４６号
ＷＯ公報第２０１６／１８３３８７号
ＷＯ公報第２０１８／０５３１８０号
【非特許文献】
【０００５】
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【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
第１のタンパク質（例えば、抗原結合フラグメント）に付加され、又は第１のタンパク質のアミノ酸配列内に埋め込まれた結合モチーフ（例えば、ＳｐｙＴａｇ、ＳｐｙＴａｇ００２、又はＳｐｙＴａｇ００３）を含むペリプラズム融合タンパク質、ペリプラズム融合タンパク質をコードする核酸構築物、核酸構築物を含むベクター、及びこのようなペリプラズム融合タンパク質を製造する方法が提供される。また、ペリプラズム融合タンパク質を製造するための突然変異プロテアーゼ欠損大腸菌細胞も提供される。
【０００７】
一実施形態において、ペリプラズム融合タンパク質は、第１のタンパク質に付加した、又は第１のタンパク質のアミノ酸配列内に埋め込まれた結合モチーフを含み、結合モチーフは、配列番号１、又は配列番号１と少なくとも６０％の配列同一性を有する配列を含む。特定の実施形態において、結合モチーフは、配列番号２又は配列番号２と少なくとも７０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、結合モチーフは、配列番号３６又は配列番号３６と少なくとも７０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、結合モチーフは、第１のタンパク質のＮ末端又はＣ末端に、直接又はリンカー配列を介して、付加している。いくつかの実施形態において、第１のタンパク質は、タンパク質構造ドメインである。特定の実施形態において、リンカー配列は、精製タグを含む。いくつかの実施形態において、結合モチーフは、配列番号１又は配列番号１と少なくとも６０％の配列同一性を有する配列を含み、第１のタンパク質のＣ末端に、直接又はリンカー配列を介して、付加している。いくつかの実施形態において、結合モチーフは、タンパク質分解感受性がある。いくつかの実施形態において、結合モチーフは、タンパク質分解耐性がある。いくつかの実施形態において、第１のタンパク質は、抗原結合フラグメントである。いくつかの実施形態において、第１のタンパク質は、抗原結合フラグメントであり、抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、又はｓｃＦａｂである。いくつかの実施形態において、抗原結合フラグメントは、Ｆａｂである。特定の実施形態において、ペリプラズム融合タンパク質は、結合モチーフのＮ末端又はＣ末端に付加した精製タグをさらに含む。特定の実施形態において、結合モチーフは、第１のタンパク質のＣ末端を第２のタンパク質のＮ末端に、又は第１のタンパク質のＮ末端を第２のタンパク質のＣ末端に連結するリンカー配列である。
【０００８】
ペリプラズム融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む核酸構築物も提供される。核酸構築物を含むベクターも提供される。
【０００９】
第１のタンパク質に付加した、又は第１のタンパク質のアミノ酸配列内に埋め込まれた結合モチーフを含むペリプラズム融合タンパク質を製造する方法も提供され、結合モチーフは、配列番号１又は配列番号１に対して少なくとも６０％の配列同一性を有する配列を含み、結合モチーフは、配列番号２又は配列番号２に対して少なくとも７０％の配列同一性を有する配列を含み、又は結合モチーフは、配列番号３６又は配列番号３６に対して少なくとも７０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、この方法は、ペリプラズム融合タンパク質を発現するのに有効な条件下で、培養培地中で、ペリプラズム融合タンパク質をコードする核酸を含むベクターで形質転換された大腸菌宿主細胞を培養し、大腸菌宿主細胞からペリプラズム融合タンパク質を回収することを含む。いくつかの実施形態において、大腸菌宿主細胞において発現される融合タンパク質の結合モチーフは、タンパク質分解耐性がある。特定の実施形態において、大腸菌宿主細胞において発現される融合タンパク質の結合モチーフは、タンパク質分解感受性がある。このような実施形態において、大腸菌宿主細胞は、１つ以上のペリプラズムプロテアーゼを欠損する変異細胞である。いくつかの実施形態において、本方法で使用される変異体大腸菌細胞は、プロテアーゼＴｓｐ（尾部特異的プロテアーゼ）をコードする機能的染色体遺伝子ｔｓｐを欠損している。いくつかの実施形態において、方法で使用される突然変異体大腸菌細胞は、それぞれプロテアーゼＴｓｐ及びＯｍｐＴ（外膜タンパク質Ｔ）をコードする機能的染色体遺伝子ｔｓｐ及びｏｍｐＴを欠損している。
【００１０】
また、プロテアーゼＴｓｐをコードする機能的染色体遺伝子ｔｓｐを欠損する大腸菌ＴＧ１、ＴＧ１Ｆ－、ＸＬ１ブルー、ＭＣ１０６１、ＳＳ３２０、ＢＬ２１、ＪＭ８３、ＪＭ１０９、ＨＢ２１５１、Ｗ３１１０、又はＣｍａｘ５アルファ株が提供される。いくつかの実施形態において、このような変異体大腸菌株は、結合モチーフを含むペリプラズム融合タンパク質をコードする核酸を含み、結合モチーフは、配列番号１又は配列番号１と少なくとも６０％の配列同一性を有する配列を含む。また、プロテアーゼＴｓｐ及びｏｍｐＴをコードする機能的染色体遺伝子ｔｓｐ及びｏｍｐＴをそれぞれ欠損する大腸ＴＧ１、ＴＧ１Ｆ－、ＸＬ１ブルー、ＭＣ１０６１、ＳＳ３２０、ＢＬ２１、ＪＭ８３、ＪＭ１０９、ＨＢ２１５１、Ｗ３１１０、又はＣｍａｘ５アルファ株も提供される。いくつかの実施形態において、このような変異体大腸菌株は、結合モチーフを含むペリプラズム融合タンパク質をコードする核酸を含み、結合モチーフは、配列番号２又は配列番号２と少なくとも７０％の配列同一性を有する配列を含む。特定の実施形態において、このような変異体大腸菌株は、結合モチーフを含むペリプラズム融合タンパク質をコードする核酸を含み、結合モチーフは、配列番号３６又は配列番号３６と少なくとも７０％の配列同一性を有する配列を含む。
【図面の簡単な説明】
（【００１１】以降は省略されています）

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