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公開番号2025066715
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-04-23
出願番号2024229818,2022519793
出願日2024-12-26,2020-09-30
発明の名称優先的な軽鎖の対合のために操作されたCH1ドメインバリアント、およびそれを含む多重特異性抗体
出願人アディマブ・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー,ADIMAB, LLC
代理人個人,個人,個人
主分類C07K 16/00 20060101AFI20250416BHJP(有機化学)
要約【課題】適切な重鎖-軽鎖対合を有する操作された二重特異性抗体を提供する。
【解決手段】カッパCLドメインまたはラムダCLドメインのいずれかへの優先的な結合のために操作されたCH1ドメインバリアント、ならびにかかる操作されたCH1ドメインバリアントを含む、例えば抗体重鎖または抗体などのポリペプチド、ならびにかかるCH1ドメインバリアントおよび/またはかかるポリペプチドを含む医薬組成物、ならびにかかるCH1ドメインバリアントを作製および使用する方法を、提供する。このCH1ドメインバリアントは、重鎖-軽鎖の誤対合を最小化し、そして同族の重鎖-軽鎖の対合を促進し、それによって多重特異性、例えば二重特異性の、抗体の生成を向上させる。また、CH1ドメインバリアントライブラリーを作製する方法、および一つまたは複数のCH1ドメインバリアントを特定する方法もまた提供する。
【選択図】図1
特許請求の範囲【請求項１】
重鎖定常領域１（「ＣＨ１」）ドメインバリアントポリペプチドであって、ＥＵ番号付けに従って、１１８、１１９、１２４、１２６～１３４、１３６、１３８～１４３、１４５、１４７～１５４、１６３、１６８、１７０～１７２、１７５、１７６、１８１、１８３～１８５、１８７、１９０、１９１、１９７、２０１、２０３～２０６、２０８、２１０～２１４、２１６、および２１８位のうちの一つまたは複数の位置にアミノ酸置換を含み、
任意でそれによって当該ＣＨ１ドメインバリアントポリペプチドが、
（ｉ）ラムダＣＬドメインと比較して、カッパ軽鎖定常領域（「ＣＬ」）ドメインと、および／もしくはラムダ軽鎖ポリペプチドと比較して、カッパ軽鎖ポリペプチドと、または
（ｉｉ）カッパＣＬドメインと比較して、ラムダＣＬドメインと、および／もしくはカッパ軽鎖ポリペプチドと比較して、ラムダ軽鎖ポリペプチドと、優先的に対合し、
ただし、任意で、以下の置換の組み合わせのうちの一つまたは複数が除外される、重鎖定常領域１（「ＣＨ１」）ドメインバリアントポリペプチド：
（ａ）ＣＨ１上の残基１４１がＣもしくはＬで置換される場合、残基１６６がＤもしくはＫで置換される場合、ＣＨ１上の残基１２８、１２９、１６２、もしくは１７１がＣで置換される場合、および／もしくは残基１４７がＤで置換される場合、当該ＣＬは、アミノ酸置換を含まない；
（ｂ）ＣＨ１上の１２６もしくは２２０位がバリンもしくはアラニンで置換される場合、１２８、１４１、もしくは１６８位における非システインがシステインで置換される場合、もしくはＣＨ１置換がＬ１４５Ｆ、Ｋ１４７Ａ、Ｆ１７０Ｖ、Ｓ１８３Ｆ、もしくはＶ１８５Ｗ／Ｆである場合、当該ＣＬは、アミノ酸置換を含まない；
（ｃ）ＣＨ１上の残基１７２が１７２Ｒに置換される場合、残基１７４が１７４Ｇに変異される場合、もしくは残基１９０が１９０Ｍもしくは１９０Ｉに置換される場合、これらは、唯一のＣＨ１置換ではない；
（ｄ）前記ＣＨ１置換が、Ｌ１２８Ｆ、Ａ１４１Ｉ／Ｍ／Ｔ／Ｌ、Ｆ１７０Ｓ／Ａ／Ｙ／Ｍ、Ｓ１８１Ｍ／Ｉ／Ｔ、Ｓ１８３Ａ／Ｅ／Ｋ／Ｖおよび／もしくはＶ１８５Ａ／Ｌからなる場合、ＣＬは改変されていない；
（ｅ）前記ＣＨ１置換が、１３１Ｃ／Ｓ、１３３Ｒ／Ｋ、１３７Ｅ／Ｇ、１３８Ｓ／Ｇ、１７８Ｓ／Ｙ、１９２Ｎ／Ｓおよび／もしくは１９３Ｆ／Ｌからなる場合、これらは、唯一のＣＨ１置換ではなく、および／もしくはＣＨ１ドメインを含有する二重特異性抗体において、同一のヒト免疫グロブリンのサブタイプまたはアロタイプのものである；
（ｆ）前記ＣＨ１置換が、１４５Ｄ／Ｅ／Ｒ／Ｈ／Ｋ（ＩＭＧＴ位置２６）からなる場合、１２９Ｄ／Ｅ／Ｒ／Ｈ／Ｋ（ＩＭＧＴ位置１８）に対応するＬＣ置換は存在しない；
（ｇ）前記ＣＨ１置換が、１２４Ｋ／Ｅ／Ｒ／Ｄからなる場合、１７６において対応するＬＣ置換は存在しない；
（ｈ）前記ＣＨ１置換が、１３３Ｖ、１５０Ａ、１５０Ｄ、１５２Ｄ、１７３Ｄおよび／もしくは１８８Ｗからなる場合、対応するＬＣ置換は存在しない；
（ｉ）前記ＣＨ１置換が、１３３Ｓ／Ｗ／Ａ、１３９Ｗ／Ｖ／Ｇ／Ｉ、１４３Ｋ／Ｅ／Ａ、１４５Ｅ／Ｔ／Ｌ／Ｙ、１４６Ｇ、１４７Ｔ／Ｅ、１７４Ｖ、１７５Ｄ／Ｒ／Ｓ、１７９Ｋ／Ｄ／Ｒ、１８１Ｒ、１８６Ｒ、１８８Ｆ／Ｌおよび／もしくは１９０Ｓ／Ａ／Ｇ／Ｙからなる場合、対応するＬＣ置換は存在しない；
（ｊ）前記ＣＨ１置換が、１４３Ａ／Ｅ／Ｒ／Ｋ／Ｄおよび１４５Ｔ／Ｌからなる場合、対応するＬＣ置換は存在しない；
（ｋ）前記ＣＨ１置換が、１２４Ａ／Ｒ／Ｅ／Ｗ、１４５Ｍ／Ｔ、１４３Ｅ／Ｒ／Ｄ／Ｆ、１７２Ｒ／Ｔおよび１３９Ｗ／Ｇ／Ｃ、１７９Ｅおよび／もしくは１８６Ｒからなる場合、対応するＬＣ置換は存在しない；
（ｌ）前記ＣＨ１置換が、１２６位、１２７位、１２８位、１３４位、１４１位、１７１位、もしくは１７３位でシステインで置換することからなる場合、対応するＬＣ位置は、ジスルフィド結合を形成するように改変されていない；
（ｍ）前記ＣＨ１置換が、Ｌ１４５Ｑ、Ｈ１６８Ａ、Ｆ１７０Ｇ、Ｓ１８３Ｖおよび／もしくはＴ１８７Ｅからなる場合、対応するカッパＬＣ置換もしくはラムダＬＣ置換は存在しない；
（ｎ）前記ＣＨ１置換が１４３Ｄ／Ｅ、１４５Ｔ、１９０Ｅ／Ｄおよび／もしくは１２４Ｒからなる場合、対応するＣＬ置換は存在しない；または
（ｏ）ＣＨ１置換がＡ１４０Ｃ、Ｋ１４７Ｃおよび／もしくはＳ１８３Ｃからなり、対応するＣＬ置換が存在する。
続きを表示（約 2,800 文字）【請求項２】
当該ＣＨ１ドメインバリアントポリペプチドが、ＥＵ番号付けに従って、１１８、１２４、１２６～１２９、１３１、１３２、１３４、１３６、１３９、１４３、１４５、１４７～１５１、１５３、１５４、１７０、１７２、１７５、１７６、１８１、１８３、１８５、１９０、１９１、１９７、２０１、２０３～２０６、２１０、２１２～２１４、および２１８位のうちの一つまたは複数の位置にアミノ酸置換を含み、
任意でそれによって前記ＣＨ１ドメインバリアントポリペプチドが、
（ｉ）ラムダＣＬドメインと比較して、カッパＣＬドメインと、および／または
（ｉｉ）ラムダ軽鎖ポリペプチドと比較して、カッパ軽鎖ポリペプチドと、優先的に対合する、請求項１に記載のＣＨ１ドメインバリアントポリペプチド。
【請求項３】
１４７位、１８３位または１４７位および１８３位においてアミノ酸置換を含む、請求項２に記載のＣＨ１ドメインバリアントポリペプチド。
【請求項４】
以下のアミノ酸置換のうちの一つまたは複数を含む、請求項２または３に記載のＣＨ１ドメインバリアントポリペプチド：
ａ．１１８位は、Ｇで置換される；
ｂ．１２４位は、Ｈ、Ｒ、Ｅ、Ｌ、またはＶで置換される、
ｃ．１２６位は、Ａ、Ｔ、またはＬで置換される、
ｄ．１２７位は、Ｖ、またはＬで置換される、
ｅ．１２８位は、Ｈで置換される、
ｆ．１２９位は、Ｐで置換される、
ｇ．１３１位は、Ａで置換される、
ｈ．１３２位は、Ｐで置換される、
ｉ．１３４位は、Ｇで置換される、
ｊ．１３６位は、Ｅで置換される、
ｋ．１３９位は、Ｉで置換される、
ｌ．１４３位は、Ｖ、またはＳで置換される、
ｍ．１４５位は、Ｆ、Ｉ、Ｎ、またはＴで置換される、
ｎ．１４７位は、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｒ、Ｔ、Ｓ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｅ、Ｈ、Ｙ、Ｑ、Ａ、またはＧで置換される、
ｏ．１４８位は、Ｉ、Ｑ、Ｙ、またはＧで置換される、
ｐ．１４９位は、Ｃ、Ｓ、またはＨで置換される、
ｑ．１５０位は、Ｌ、またはＳで置換される、
ｒ．１５１位は、Ａ、またはＬで置換される、
ｓ．１５３位は、Ｓで置換される、
ｔ．１５４位は、Ｍ、またはＧで置換される、
ｕ．１７０位は、Ｇ、またはＬで置換される、
ｖ．１７２位は、Ｖで置換される、
ｗ．１７５位は、Ｇ、Ｌ、Ｅ、Ａで置換される、
ｘ．１７６位は、Ｐで置換される、
ｙ．１８１位は、Ｙ、Ｑ、またはＧで置換される、
ｚ．１８３位は、Ｉ、Ｗ、Ｆ、Ｅ、Ｙ、Ｌ、Ｋ、Ｑ、Ｎ、Ｒ、またはＨで置換される、
ａａ．１８５位は、Ｗで置換される、
ｂｂ．１９０位は、Ｐで置換される、
ｃｃ．１９１位は、Ｉで置換される、
ｄｄ．１９７位は、Ａで置換される、
ｅｅ．２０１位は、Ｓで置換される、
ｆｆ．２０３位は、Ｓで置換される、
ｇｇ．２０４位は、Ｙで置換される、
ｈｈ．２０５位は、Ｑで置換される、
ｉｉ．２０６位は、Ｓで置換される、
ｊｊ．２１０位は、Ｒで置換される、
ｋｋ．２１２位は、Ｇで置換される、
ｌｌ．２１３位は、Ｅ、またはＲで置換される、
ｍｍ．２１４位は、Ｒで置換される、および
ｎｎ．２１８位は、Ｑで置換される。
【請求項５】
（ｉ）１４７位においてアミノ酸残基Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｒ、Ｔ、Ｓ、Ｍ、Ｖ、Ｎ、Ｅ、Ｈ、Ｙ、もしくはＱを、および／または
（ｉｉ）１８３位においてアミノ酸残基Ｉ、Ｗ、Ｆ、Ｅ、Ｙ、Ｌ、Ｋ、Ｑ、Ｎ、もしくはＲを含む、請求項２～４のいずれか一項に記載のＣＨ１ドメインバリアントポリペプチド。
【請求項６】
（ｉ）１８３位においてアミノ酸残基Ｒ、Ｋ、もしくはＹを、および／または
（ｉｉ）１４７位においてアミノ酸残基Ｆを含む、請求項２～５のいずれか一項に記載のＣＨ１ドメインバリアントポリペプチド。
【請求項７】
（ｉ）１４７位においてアミノ酸残基Ｆおよび１８３位においてアミノ酸残基Ｒ、
（ｉｉ）１４７位においてアミノ酸残基Ｆおよび１８３位においてアミノ酸残基Ｋ、
（ｉｉｉ）１４７位においてアミノ酸残基Ｆおよび１８３位においてアミノ酸残基Ｙ、
（ｉｖ）１８３位においてアミノ酸残基Ｒ、
（ｖ）１８３位においてアミノ酸残基Ｋ、または
（ｖｉ）１８３位においてアミノ酸残基Ｙを含み、
任意で、
（ｉ）配列番号１３７、
（ｉｉ）配列番号１３８、
（ｉｉｉ）配列番号１３９、
（ｉｖ）配列番号６０、
（ｖ）配列番号４１、または
（ｖｉ）配列番号１３６のアミノ酸配列を含む、請求項２～６のいずれか一項に記載のＣＨ１ドメインバリアントポリペプチド。
【請求項８】
ＣＨ１とＶＨとの間の界面内のＣＨ１アミノ酸位置においてアミノ酸置換を含むものであって、任意で、前記ＣＨ１アミノ酸位置が１５１位であり、さらに任意で、１５１位にアミノ酸残基ＡまたはＬを含む、請求項２～７のいずれか一項に記載のＣＨ１ドメインバリアントポリペプチド。
【請求項９】
（ｉ）１４７位においてアミノ酸残基Ｆおよび１８３位においてアミノ酸残基Ｒ、
（ｉｉ）１４７位においてアミノ酸残基Ｆおよび１８３位においてアミノ酸残基Ｋ、
（ｉｉｉ）１４７位においてアミノ酸残基Ｆおよび１８３位においてアミノ酸残基Ｙ、
（ｉｖ）１８３位においてアミノ酸残基Ｒ、
（ｖ）１８３位においてアミノ酸残基Ｋ、または
（ｖｉ）１８３位においてアミノ酸残基Ｙを含む、ＣＨ１ドメインバリアントポリペプチド。
【請求項１０】
（ｉ）１４７位においてアミノ酸残基Ｆおよび１８３位においてアミノ酸残基Ｒ、
（ｉｉ）１４７位においてアミノ酸残基Ｆおよび１８３位においてアミノ酸残基Ｋ、
（ｉｉｉ）１４７位においてアミノ酸残基Ｆおよび１８３位においてアミノ酸残基Ｙ、
（ｉｖ）１８３位においてアミノ酸残基Ｒ、
（ｖ）１８３位においてアミノ酸残基Ｋ、または
（ｖｉ）１８３位においてアミノ酸残基Ｙ、からなるアミノ酸置換を含む、請求項９に記載のＣＨ１ドメインバリアントポリペプチド。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１９年９月３０日に出願された、発明の名称を「優先的な軽鎖の対合のために操作されたＣＨ１ドメインバリアント、およびそれを含む多重特異性抗体（ＣＨ１ＤＯＭＡＩＮＶＡＲＩＡＮＴＳＥＮＧＩＮＥＥＲＥＤＦＯＲＰＲＥＦＥＲＥＮＴＩＡＬＬＩＧＨＴＣＨＡＩＮＰＡＩＲＩＮＧＡＮＤＭＵＬＴＩＳＰＥＣＩＦＩＣＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＣＯＭＰＲＩＳＩＮＧＴＨＥＳＡＭＥ）」とする米国仮特許出願第６２／９０８，３６７号に対する優先権を主張するものであり、当該内容は、その全体が参照により本明細書に援用される。
続きを表示（約 6,200 文字）【０００２】
本発明は、適切な重鎖－軽鎖対合を促進する少なくとも一つのアミノ酸置換を含有するＣＨ１ドメインバリアント、およびそれを含む抗体重鎖および抗体、特に多重特異性抗体、に関する。本発明はさらに、かかる抗体を含む組成物およびその使用、例えば、治療薬または診断法に関する。本発明はさらに、ＣＨ１ドメインバリアントライブラリーを作製する方法、および一つ以上のＣＨ１ドメインバリアントを特定する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
複数の抗原結合特異性、例えば二重特異性の抗体を有する抗体治療薬を開発するための継続的な努力がある。二重特異性抗体は、がん、炎症過程、または他の疾患状態に関連する複数の表面受容体に干渉するために使用することができる。二重特異性抗体を使用して、標的を近接に配置し、タンパク質複合体形成を調節するか、または細胞間の接触を駆動することもできる。二重特異性抗体の産生は、１９６０年代初頭に初めて報告され（Ｎｉｓｏｎｏｆｆｅｔａｌ．，ＡｒｃｈＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓ１９６１９３（２）：４６０－４６２）、最初のモノクローナル二重特異性抗体は、１９８０年代にハイブリドーマ技術を使用して生成された（Ｍｉｌｓｔｅｉｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ１９８３３０５（５９３４）：５３７－５４０）。二重特異性抗体に対する関心は、その治療能力のために過去十年間で著しく増大し、現在臨床で二重特異性抗体が使用されている。例えば、ブリナツモマブおよびエミシズマブは、特定のがんの治療のために承認されている（二重特異性抗体産生方法および医薬用途で承認された二重特性抗体の特徴の近年のレビューに関して、Ｓｅｄｙｋｈｅｔａｌ．，ＤｒｕｇＤｅｓＤｅｖｅｌＴｈｅｒ１２：１９５－２０８（２０１８）およびＬａｂｒｉｊｎｅｔａｌ．ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙ１８：５８５－６０８（２０１９）を参照されたい）。
【０００４】
二重特異性抗体は、単一特異性抗体を大幅に超える利益を示している一方で、二重特異性抗体の広範な商業的応用は、効率的／低コストである産生方法がないこと、二重特異性抗体の安定性の欠落、およびヒトにおいて半減期が短いことにより阻害されている。二重特異性抗体の産生を改善するための多岐にわたる方法が、過去数十年にわたり開発されている。これらには、異なる特異性を有する二つの免疫グロブリンの重鎖－軽鎖対の組換え共発現（ＭｉｌｓｔｅｉｎａｎｄＣｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ３０５：５３７（１９８３））、国際公開第９３／０８８２９号、およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒｅｔａｌ．，ＥＭＢＯＪ．１０：３６５５（１９９１）を参照）、「ｋｎｏｂ－ｉｎ－ｈｏｌｅ」エンジニアリング（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号）、免疫グロブリンクロスオーバー技術（Ｆａｂドメイン交換またはＣｒｏｓｓＭａｂ形式としても知られている）（例えば、国際公開第２００９／０８０２５３号；Ｓｃｈａｅｆｅｒｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０８：１１１８７－１１１９２（２０１１）を参照）、抗体Ｆｃヘテロ二量体分子の作製に関する静電ステアリング効果のエンジニアリング（国際公開第２００９／０８９００４Ａ１号）、二つ以上の抗体または断片の架橋（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、およびＢｒｅｎｎａｎｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照）、ロイシンジッパー（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１４８（５）：１５４７－１５５３（１９９２）を参照）、「ダイアボディ」技術（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）二量体（例えば、Ｇｒｕｂｅｒｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１５２：５３６８（１９９４）を参照）、ならびに例えば、Ｔｕｔｔｅｔａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ１４７：６０（１９９１）に記載される三重特異性抗体、が含まれる。
【０００５】
これらの改善にもかかわらず、正確な重鎖－軽鎖対合である二重特異性抗体の生成は依然として課題である。二重特異性抗体は、二つの異なる重鎖および二つの異なる軽鎖の共発現によって形成され得る。重鎖は、比較的無差別な様式で軽鎖に結合するように進化してきたため、所望の形式の二重特異性抗体を適切に形成することは依然として課題である。結果として、二つの重鎖と二つの軽鎖の共発現は、重鎖－軽鎖対合のスクランブル－十六種の可能な組み合わせの複雑な混合物、をもたらし得、それは十種の異なる抗体を表し、そのうち一種のみが所望の二重特異性抗体に相当する（完全な乱雑性がある場合、混合物中の最大収率１２．５％）。均質な対合は、製造可能性および有効性に不可欠であるため、この誤対合（鎖対合問題とも呼ぶ）は、二重特異性抗体の生成に関する主要な課題のままである。
【０００６】
誤対合を軽減するために使用される一つの戦略は、共通の軽鎖を有する二重特異性抗体を生成することである（例えば、Ｍｅｒｃｈａｎｔｅｔａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１６：６７７－６８１（１９９８）を参照）。あるいは、単一の共通の重鎖と二つの異なる軽鎖（一つのカッパおよび一つのラムダ）とを使用してもよい（例えば、Ｆｉｓｃｈｅｒｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＣｏｍｍｕｎ．６：６１１３（２０１５）を参照）。しかしながら、この戦略は、共通鎖を有する抗体を特定することを必要とし、これは困難であり、また各結合アームの特異性を損なう傾向があり、実質的に多様性が低減する（例えば、Ｗａｎｇｅｔａｌ．，ＭＡＢＳ１０（８）：１２２６－１２３５（２０１８）を参照）。
【０００７】
正確な重鎖－軽鎖の対合を改善するための他のアプローチとしては、一つの抗原結合断片（Ｆａｂ）アームの軽鎖またはその中のサブドメインの一つが、重鎖Ｆｄ領域の対応する領域と交換されるＣｒｏｓｓＭａｂ技術（Ｒｏｃｈｅ社）、および一つのＦａｂアームの本来のジスルフィド結合が、操作されたジスルフィド結合で置換されるＤｕｅｔＭａｂ技術（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ社）が挙げられる。しかしながら、これらのアプローチは、天然の抗体に適切に類似しない化合物をもたらし得る、本来のＩｇＧ形式への大幅な変更を必要とする。
【０００８】
別の戦略は、重鎖および軽鎖の誤対合を低減または除去するために、ＩｇＧ形式の重鎖および軽鎖の定常領域および／または可変領域内のアミノ酸置換を利用することである。発明者らの知る限り、ＣＨ１ドメインのみを改変することは、多重特異性抗体の発現中にしばしば観察される鎖対合または誤対合の問題を解決することがこれまでに実証されていない。むしろ、ＣＨ１ドメインバリアントを含むように操作された多重特異性抗体は、ＣＬドメインならびに特定の例ではＶＨ、ＣＨ２、ＣＨ３、および／またはＶＬドメインなどの鎖対合問題に対処するために、ＣＨ１ドメインの外側での改変もさらに必要とされた。その例としては、Ｌｅｗｉｓｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ．３２（２）：１９１－１９８（２０１４）が挙げられ、Ｌｅｗｉｓらは、改変された重鎖および軽鎖の優先的な対合を駆動し、そして野生型定常ドメインを有する重鎖および軽鎖ドメインの対合を妨げる試みにおいて、変異ＣＨ１およびＣＬドメイン、ＣＲＤ１（Ｄ１４８Ｋ、Ｆ１７０Ｔ、Ｖ１８５Ｆでの重鎖置換、および軽鎖置換Ｋ１２９Ｄ、Ｌ１３５Ｆによる；ＥＵ番号付け）およびＣＲＤ２（重鎖置換Ｈ１６８ＡおよびＦ１７０Ｔ、ならびに軽鎖置換Ｌ１３５Ｙ、Ｓ１７６Ｗによる）を生成した。しかしながら、Ｌｅｗｉｓらは、可変ドメインの不存下での変異ＣＨ１およびＣＬドメインにより得られたあらゆる対合特異性を、ＶＨ－ＶＬ界面内のさらなる操作なしには全長ＩｇＧ形式に翻訳しなかった、すなわち優先的な重鎖－軽鎖対合を達成するために、ＶＨ－ＶＬ界面内の置換が、ＣＬドメインおよびＣＨ１ドメイン置換と共に必要であったことを報告した。電荷をもつアミノ酸残基を含有するようにＣＨ１ドメインおよびＣＬドメインを操作することも、優先的な重鎖－軽鎖対合を促進するとされている（例えば、米国特許第１０，０４７，１６３号を参照）。一つのＦａｂ断片が、優先的な対合を駆動するようにＣＨ１ドメインおよびＣκドメイン内の置換を有しているものである、異なるＣＨ１ドメインおよびＣＬドメインをもつ少なくとも二つのＦａｂ断片を有する二重特異性抗体も知られている（ＣＨ１：Ｔ１８７ＥおよびＣκ：Ｎ１３７Ｋ＋Ｓ１１４Ａ、ＣＨ１：Ｌ１４５Ｑ＋Ｓ１８３ＶおよびＣκ：Ｖ１３３Ｔ＋Ｓ１７６Ｖ、ＣＨ１：Ｌ１２８Ａ＋Ｌ１４５ＥおよびＣκ：Ｖ１３３Ｗ、ＣＨ１：Ｖ１８５ＡおよびＣκ：Ｌ１３５Ｗ＋Ｎ１３７Ａを開示する、米国特許出願公開第２０１８００２２８２９号および米国特許第９，６３１，０３１号を参照）。軽鎖、または場合によってはＣＨ２、ＣＨ３、および／もしくはＶＨが優先的な重鎖－軽鎖対合を促進するように適切に置換される場合、優先的な重鎖－軽鎖対合を促進すると主張される特定のＣＨ１ドメイン置換のさらなる例としては、以下が挙げられる：Ａ１４１Ｃ／Ｌ、Ｋ１４７Ｄ、Ｇ１６６Ｄ、Ｇ１６６Ｋ、または１２８、１２９、１６２、もしくは１７１位におけるシステインでの置換（国際公開第２０１９１８３４０６号（ＩｎｖｅｎｒａＩｎｃ．社））；１２６位もしくは２２０位におけるシステインの置換はバリンもしくはアラニンで置換され、または１２８位、１４１位、もしくは１６８位における非システインの置換はシステインで、Ｌ１４５Ｆ、Ｋ１４７Ａ、Ｆ１７０Ｖ、Ｓ１８３Ｆ、もしくはＶ１８５Ｗ／Ｆで置換されている（米国特許第９，５２７，９２７号（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ社））；１７２Ａおよび１７４Ｇ（国際公開第２０２００６０９２４号（Ｄｕａｌｏｇｉｃｓ社））；Ａ１７２Ｒおよび１７４Ｇ、または残基１９０のＭまたはＩへの置換（米国特許第１０，０４７，１６７号（ノースカロライナ大学ＣｈａｐｅｌＨｉｌｌおよびＥｌｉＬｉｌｌｙ））；Ｌ１２８Ｆ、Ａ１４１Ｉ／Ｍ／Ｔ／Ｌ、Ｆ１７０Ｓ／Ａ／Ｙ／Ｍ、Ｓ１８１Ｍ／Ｉ／Ｔ、Ｓ１８３Ａ／Ｅ／Ｋ／ＶおよびＶ１８５Ａ／Ｌ（米国特許出願公開第２０１８０１７７８７３号（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社））；１３１Ｃ／Ｓ、１３３Ｒ／Ｋ、１３７Ｅ／Ｇ、１３８Ｓ／Ｇ１７８Ｓ／Ｙ、１９２Ｎ／Ｓ、および／または１９３Ｆ／Ｌ（米国特許第１０，４８７，１５６号（ＡｒｇｅｎｘＢＶＢＡ社））；１４５Ｄ／Ｅ／Ｒ／Ｈ／Ｋ（ＩＭＧＴ位置２６）（国際公開第２０１８１４１８９４号（Ｍｅｒｃｋ社））；１２４Ｋ／Ｅ／Ｒ／Ｄ（米国特許第１０，３９２，４３８号（Ｐｆｉｚｅｒ社））；１３３Ｖ、１５０Ａ、１５０Ｄ、１５２Ｄ、１７３Ｄ、または１８８Ｗ（米国特許出願公開第２０１９００２３８１０号（ＭＩＴ））；１３３Ｓ／Ｗ／Ａ、１３９Ｗ／Ｖ／Ｇ／Ｉ、１４３Ｋ／Ｅ／Ａ、１４５Ｅ／Ｔ／Ｌ／Ｙ、１４６Ｇ、１４７Ｔ／Ｅ、１７４Ｖ、１７５Ｄ／Ｒ／Ｓ、１７９Ｋ／Ｄ／Ｒ、１８１Ｒ、１８６Ｒ、１８８Ｆ／Ｌ、および／または１９０Ｓ／Ａ／Ｇ／Ｙ（米国特許出願公開第２０１８０１７９２９６号および米国特許第９，９１４，７８５（Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓ社））；１４３Ａ／Ｅ／Ｒ／Ｋ／Ｄおよび１４５Ｔ／Ｌ（米国特許第１０，０７７，２９８号（Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓ社））；１２４Ａ／Ｒ／Ｅ／Ｗ、１４５Ｍ／Ｔ、１４３Ｅ／Ｒ／Ｄ／Ｆ、１７２Ｒ／Ｔ、１３９Ｗ／Ｇ／Ｃ、１７９Ｅ、または１８６Ｒ（米国特許出願公開第２０１７０２０４１９９号（Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓ社））；１２６、１２７、１２８、１３４、１４１、１７１、または１７３位におけるシステインでの置換（全薬工業社）；Ｌ１４５Ｑ、Ｈ１６８Ａ、Ｆ１７０Ｇ、Ｓ１８３Ｖ、およびＴ１８７Ｅ（国際公開第２０２０１２７３５４号（ＡｌｌｉｇａｔｏｒＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社））；１４３Ｄ／Ｅ、１４５Ｔ、１９０Ｅ／Ｄおよび１２４Ｒ（国際公開第２０１７／０５９５５１号（Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓ社））が挙げられる。また、米国特許第９，１５０，６３９号、協和発酵キリン社は、化学調節を可能にするシステインを導入する目的で、Ａ１４０Ｃ、Ｋ１４７Ｃ、またはＳ１８３Ｃを含む重鎖を生成したと報告している。協和発酵キリン社は、これらの重鎖変異を含有する抗体バリアントは、野生型軽鎖を含む可能性があることを示唆しているが、このことが優先的な重鎖－軽鎖対合を促進するだろうという指摘はない。
【０００９】
重鎖－軽鎖の誤対合を最小化するために使用されるさらに別の戦略は、異なる軽鎖、例えば異なる定常ドメインを有する軽鎖、を利用することである。例えば、Ｌｏｅｗらは、カッパ軽鎖とラムダ軽鎖とを有する多重特異性抗体を生成して、最小限の誤対合が観察されたが、これはある一定の天然由来のカッパ軽鎖が高い正確性（ｆｉｄｅｌｉｔｙ）を有し、またラムダ抗体由来の重鎖と対合せず、そしてその逆も同じであるためである（国際公開第２０１８０５７９５５号）。残念ながら、この方法論の適用可能性は、高い正確性を有する当該軽鎖に限定される。他の者は、重鎖および軽鎖の両方でアミノ酸置換を利用して優先的な対合を静電気的または立体構造的に駆動するものであるカッパおよびラムダ軽鎖を使用して、多重特異性抗体を生成してきた（例えば、国際公開第２０１７０５９５５１号（Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓ社）、米国特許出願公開第２０１４０１５４２５４号（Ａｍｇｅｎ社）および米国特許第１０，０４７，１６３号（ＡｂｂＶｉｅＳｔｅｍｃｅｎｔｒｘ社）を参照）。しかしながら、重鎖および軽鎖の両方に多数のアミノ酸置換を導入することは、さらなる技術的ハードルとなり、さらに、抗体の機能および／または免疫原性に有害な影響を有し得る。
【発明の概要】
【００１０】
本発明の目的は、適切な重鎖－軽鎖対合を有する操作された二重特異性抗体を提供することである。一態様では、重鎖と、特定の軽鎖との優先的な対合を促進するＣＨ１ドメインバリアントポリペプチド（本明細書ではＣＨ１ドメインバリアントとも呼ぶ）、およびそれを含む、抗体などのポリペプチドが本明細書において提供される。当該ＣＨ１ドメインバリアントは、少なくとも一つのアミノ酸置換（例えば、野生型などの親の配列に対して）を含有する。
（【００１１】以降は省略されています）

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