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公開番号2025065213
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-04-17
出願番号2025015511,2021547225
出願日2025-01-31,2020-02-14
発明の名称免疫療法のための改変ナチュラルキラー(NK)細胞
出願人エディタス・メディシン、インコーポレイテッド
代理人個人
主分類C12N 5/10 20060101AFI20250410BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】免疫療法のための改変ナチュラルキラー(NK)細胞を提供すること。
【解決手段】所定の少なくとも1つの内在性遺伝子を発現し、
さらに、
所定のものの少なくとも1つの機能喪失を示す、改変リンパ球。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
（ａ）内在性ＣＤ３、ＣＤ４、及び／又はＣＤ８を発現せず；
（ｂ）
（ｉ）ＣＤ５６（ＮＣＡＭ）、ＣＤ４９、及び／又はＣＤ４５；
（ｉｉ）ＮＫ細胞受容体免疫グロブリンγＦｃ領域受容体ＩＩＩ（ＦｃγＲＩＩＩ、分化抗原群１６（ＣＤ１６））；
（ｉｉｉ）ナチュラルキラーグループ２メンバーＤ（ＮＫＧ２Ｄ）；
（ｉｖ）ＣＤ６９；
（ｖ）天然細胞傷害性受容体；
又はそれらの２つ以上の任意の組み合わせをコード化する少なくとも１つの内在性遺伝子を発現し、
さらに、
（１）
（ｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）；
（ｉｉ）ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）の非天然変異型；
（ｉｉｉ）インターロイキン１５（ＩＬ－１５）；
（ｉｖ）ＩＬ－１５受容体（ＩＬ－１５Ｒ）、若しくはその変異型；
（ｖ）インターロイキン１２（ＩＬ－１２）；
（ｖｉ）ＩＬ－１２受容体（ＩＬ－１２Ｒ）、若しくはその変異型；
（ｖｉｉ）ヒト白血球抗原Ｇ（ＨＬＡ－Ｇ）；
（ｖｉｉｉ）ヒト白血球抗原Ｅ（ＨＬＡ－Ｅ）；
（ｉｘ）白血球表面抗原分化抗原群ＣＤ４７（ＣＤ４７）；
又はそれらの２つ以上の任意の組み合わせをコード化する核酸配列を含んでなる少なくとも１つの外因性核酸発現コンストラクトを含んでなり、
及び／又は
（２）
（ｉ）形質転換成長因子β受容体２（ＴＧＦβＲ２）；
（ｉｉ）アデノシンＡ２ａ受容体（ＡＤＯＲＡ２Ａ）；
（ｉｉｉ）Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを備えたＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）；
（ｉｖ）β－２ミクログロブリン（ｍｉｃｒｏｇｏｂｕｌｉｎ）（Ｂ２Ｍ）；
（ｖ）プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）；
（ｖｉ）サイトカイン誘導性ＳＨ２含有タンパク質（ＣＩＳＨ）；
（ｖｉｉ）クラスＩＩ、主要組織適合性複合体、トランス活性化剤（ＣＩＩＴＡ）；
（ｖｉｉｉ）ナチュラルキラー細胞受容体ＮＫＧ２Ａ（ナチュラルキラーグループ２Ａ）；
（ｉｘ）２つ以上のＨＬＡクラスＩＩ組織適合性抗原α鎖遺伝子、及び／又は２つ以上のＨＬＡクラスＩＩ組織適合性抗原β鎖遺伝子；
（ｘ）分化抗原群３２Ｂ（ＣＤ３２Ｂ、ＦＣＧＲ２Ｂ）；
（ｘｉ）Ｔ細胞受容体αコンスタント（ＴＲＡＣ）；
又はそれらの２つ以上の任意の組み合わせ
の少なくとも１つの機能喪失を示す、改変リンパ球。
続きを表示（約 1,400 文字）【請求項２】
前記リンパ球が、
（ｉ）ＴＧＦβＲ２、ＣＩＳＨ、ＴＩＧＩＴ、ＡＤＯＲＡ２Ａ、又はＮＫＧ２Ａ；
（ｉｉ）ＴＧＦβＲ２及びＣＩＳＨ、ＴＧＦβＲ２及びＴＩＧＩＴ、ＴＧＦβＲ２及びＡＤＯＲＡ２Ａ、ＴＧＦβＲ２及びＮＫＧ２Ａ、ＣＩＳＨ及びＴＩＧＩＴ、ＣＩＳＨ及びＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＩＳＨ及びＮＫＧ２Ａ、ＴＩＧＩＴ及びＡＤＯＲＡ２Ａ、ＴＩＧＩＴ及びＮＫＧ２Ａ、又はＡＤＯＲＡ２Ａ及びＮＫＧ２Ａ；又は
（ｉｉｉ）ＴＧＦβＲ２、ＣＩＳＨ及びＴＩＧＩＴ；ＴＧＦβＲ２、ＣＩＳＨ及びＡＤＯＲＡ２Ａ；ＴＧＦβＲ２、ＣＩＳＨ及びＮＫＧ２Ａ；ＴＧＦβＲ２、ＴＩＧＩＴ及びＡＤＯＲＡ２Ａ；ＴＧＦβＲ２、ＴＩＧＩＴ及びＮＫＧ２Ａ；ＴＧＦβＲ２、ＡＤＯＲＡ２Ａ及びＮＫＧ２Ａ；ＣＩＳＨ、ＴＩＧＩＴ及びＡＤＯＲＡ２Ａ；ＣＩＳＨ、ＴＩＧＩＴ及びＮＫＧ２Ａ；ＣＩＳＨ、ＡＤＯＲＡ２Ａ及びＮＫＧ２Ａ；又はＴＩＧＩＴ、ＡＤＯＲＡ２Ａ及びＮＫＧ２Ａ
の機能喪失を示す、請求項１に記載の改変リンパ球。
【請求項３】
前記リンパ球が、再配列された内在性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）遺伝子座を含んでなる、請求項１又は２に記載の改変リンパ球。
【請求項４】
前記再配列されたＴＣＲが、ＴＣＲαＶＪ及び／又はＴＣＲβＶ（Ｄ）Ｊセクションの再配列と完全なＶドメインエキソンとを含んでなる、請求項３に記載の改変リンパ球。
【請求項５】
前記天然細胞傷害性受容体が、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、及び／又はＣＤ１５８ｂである、請求項１、２、３又は４に記載の改変リンパ球。
【請求項６】
前記ＩＬ－１５Ｒ変異型が構成的に活性なＩＬ－１５Ｒ変異型であり、及び／又は前記ＩＬ１２－Ｒ変異型が構成的に活性なＩＬ１２－Ｒ変異型である、請求項１～５のいずれか一項に記載の改変リンパ球。
【請求項７】
前記構成的に活性なＩＬ－１５Ｒ変異型が、ＩＬ－１５ＲとＩＬ－１５Ｒ作動薬（ＩＬ－１５ＲＡ）との融合体であり、及び／又は前記構成的に活性なＩＬ－１２Ｒ変異型が、ＩＬ－１２ＲとＩＬ－１２Ｒ作動薬（ＩＬ－１２ＲＡ）との融合体である、請求項６に記載の改変リンパ球。
【請求項８】
前記ＩＬ－１５Ｒ作動薬が、ＩＬ－１５又はそのＩＬ－１５Ｒ結合変異型であり；及び／又は前記ＩＬ－１２Ｒ作動薬が、ＩＬ－１２又はそのＩＬ－１２Ｒ結合変異型である、請求項７に記載の改変リンパ球。
【請求項９】
ＴＧＦβＲ２の喪失が、ＴＧＦβ受容体ＩＩのドミナントネガティブ変異型（ＤＮ－ＴＧＦβＲ２）の外因性発現と関連している、請求項１～８のいずれか一項に記載の改変リンパ球。
【請求項１０】
前記ＣＡＲが、メソテリン、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＭＩＣＡ／Ｂ、ＢＣＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、アンドロゲン受容体、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、Ｍｕｃ１、ＨＰＶウイルスペプチド（すなわち、Ｅ７）、ＥＢＶウイルスペプチド、ＣＤ７０、ＷＴ１、ＣＥＡ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＩＬ１３Ｒα２、及びＧＤ２、ＣＡ１２５、ＣＤ７、ＥｐＣＡＭ、Ｍｕｃ１６、又はＣＤ３０に結合できる、請求項１に記載の改変リンパ球。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、そのそれぞれの全内容が参照により本明細書に明示的に援用される、２０１９年２月１５日に出願された米国仮特許出願第６２／８０６，４５７号明細書；２０１９年４月３０日に出願された米国仮特許出願第６２／８４１，０６６号明細書；２０１９年５月１日に出願された米国仮特許出願第６２／８４１，６８４号明細書；及び２０１９年１２月４日に出願された米国仮特許出願第６２／９４３，６４９号明細書の優先権を主張する。
続きを表示（約 4,000 文字）【０００２】
本発明は、免疫療法のための改変ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＮＫ細胞は、例えば免疫腫瘍学の文脈における免疫療法アプローチに有用である。ＮＫ細胞は、細胞障害性の自然リンパ球の一種である。ＮＫ細胞は腫瘍免疫において重要な役割を果たし、ＮＫ細胞の細胞障害活性は活性化及び阻害経路のネットワークによって厳密に制御される（例えば、参照によりその全体が本明細書に援用される、非特許文献１を参照されたい）。
【０００４】
例えば、自系又は同種異系ＮＫ細胞移入を介した、免疫療法のアプローチにおける天然由来又は改変ＮＫ細胞の使用が報告されており、いくらかの成功が達成されている一方で、このようなアプローチは典型的には、次善のＮＫ細胞応答を特徴とする。免疫腫瘍学の文脈では、この次善の応答は、少なくとも部分的には腫瘍に対するもので、ＮＫ細胞阻害経路を利用して、細胞傷害性ＮＫ細胞活性を抑制し、ＮＫ細胞の浸潤を制限し、及び／又はＮＫ細胞の増殖と生存を阻害すると考えられている。したがって、固形腫瘍の治療におけるＮＫ細胞の適用は限られた成功しか得られていない。
【０００５】
例えば、ＮＫ細胞を腫瘍細胞に標的化するキメラ抗原受容体をＮＫ細胞中で発現させることによって、又は、活性化又は抑制性のＮＫ細胞経路を調節して、より強力な及び／又はより持続的なＮＫ細胞応答を達成することによって、ＮＫ細胞応答を特定の細胞に集中させるための初期研究が行われている。例えば、それらの全体が参照により本明細書に援用される、非特許文献２；及び非特許文献３を参照されたい。
【０００６】
治療用抗体と組み合わせて使用され得る既製の同種異系ＮＫ細胞療法を追求するために、その中で細胞がＣＤ１６の強化バージョン（ｈｎＣＤ１６）を発現する誘導万能性幹細胞株が開発されており、ＮＫ細胞はこのｉＰＳＣ株に由来する。例えば、参照によりその全体が本明細書に援用される、非特許文献４を参照されたい。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
ＧｒａｓＮａｖａｒｒｏＡ，ＢｊｏｒｋｌｕｎｄＡＴａｎｄＣｈｅｋｅｎｙａＭ（２０１５）Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：２０２
ＪｉｎｇＹ，ｅｔａｌ．（２０１５）ＰＬｏＳＯＮＥ１０（３）：ｅ０１２１７８８
ＯｂｅｒｓｃｈｍｉｄｔＯ，ＫｌｏｅｓｓＳａｎｄＫｏｅｈｌＵ（２０１７）Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：６５４
Ｌｉｅｔａｌ．，ＣｅｌｌＳｔｅｍＣｅｌｌ．２０１８Ａｕｇ２；２３（２）：１８１－１９２．ｅ５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかし、これまでのところ、これらのアプローチは全て限られた成功しか得られていない。したがって、免疫療法のためのより良い治療アプローチの開発に対する必要性が、依然として存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本開示のいくつかの態様は、例えば、免疫腫瘍学的治療アプローチなどの免疫療法的アプローチの文脈において有用な、組成物、細胞、細胞集団、方法、ストラテジー、及び治療法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、例えば、免疫療法アプローチなどの文脈において、ＮＫ細胞療法において有用な改変ＮＫ細胞（又はその他のリンパ球）を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される細胞及び細胞集団は、免疫療法アプローチにおけるそれらの効力を増強する、１つ又は複数の修飾によって特徴付けられる。例えば、いくつかの実施形態では、治療の文脈におけるＮＫ細胞機能の阻害に関連する、遺伝子又はタンパク質の機能喪失をもたらす、１つ又は複数の修飾、及び／又は治療の文脈における増強されたＮＫ細胞機能に関連する外因性核酸又はタンパク質の発現をもたらす、１つ又は複数の修飾を含んでなる、ＮＫ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、本開示は、誘導万能性細胞（ｉＰＳＣ）に由来する改変ＮＫ細胞を提供する。ＩＰＳＣ由来のＮＫ細胞は、本明細書ではｉＮＫ細胞とも称される。いくつかの実施形態では、例えば、限定されることなく、線維芽細胞、末梢血細胞、又は発達的に成熟したＴ細胞（胸腺選択を受けたＴ細胞）などの体細胞に由来する改変ｉＮＫ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＮＫ又はｉＮＫ細胞は、例えば、ＲＮＡ誘導ヌクレアーゼでゲノム遺伝子座を切断することから生じる、外因性核酸コンストラクトのインデル又は挿入などの、１つ又は複数のゲノム編集を含んでなる。改変されたＮＫ及びｉＮＫ細胞の生成の文脈におけるＲＮＡ誘導ヌクレアーゼ技術の使用は、臨床応用に関連する増強された特性を備えた複雑な改変の操作を可能にする。
【００１０】
本開示のいくつかの態様は、複雑な編集ストラテジー、及びその結果としての複雑なゲノム改変を有するＮＫ細胞を提供し、それは例えば、免疫腫瘍学的治療アプローチなどの臨床応用のための高度なＮＫ細胞製品の生成を可能にする。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される改変ＮＫ細胞は、例えば、がんなどの過剰増殖性疾患を有するか、又は過剰増殖性疾患と診断された患者のための既製の臨床的解決策の役割を果たし得る。いくつかの実施形態では、改変ＮＫ細胞は、非改変ＮＫ細胞と比較して、増強された生存、増殖、ＮＫ細胞応答レベル、ＮＫ細胞応答持続時間、ＮＫ細胞枯渇に対する耐性、及び／又は標的認識を示す。例えば、本明細書で提供される改変ＮＫ細胞は、改変ＮＫ細胞における、例えば、メソテリン、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２及び／又はＭＩＣＡ／Ｂを標的化するＣＡＲなどの目的のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現；例えば、ｈｎＣＤ１６などの天然に存在しないＣＤ１６変異型などのＣＤ１６変異型の発現（例えば、その内容が参照によりその全体が本明細書に援用される、Ｚｈｕｅｔａｌ．，Ｂｌｏｏｄ２０１７，１３０：４４５２を参照されたい）；ＩＬ１５／ＩＬ１５ＲＡ融合体の発現；ＴＧＦβ受容体２（ＴＧＦβＲ２）の機能喪失；及び／又はＴＧＦβＲ２のドミナントネガティブ変異型の発現；ＡＤＯＲＡ２Ａの機能喪失；Ｂ２Ｍの機能喪失；ＨＬＡ－Ｇの発現；ＣＩＩＴＡの機能喪失；ＰＤ１の機能喪失；ＴＩＧＩＴの機能喪失；及び／又はＣＩＳＨの機能喪失；又はそれらの２つ以上の任意の組み合わせをもたらすゲノム編集を含んでなってもよい。一実施形態では、改変ＮＫ細胞は、ＴＧＦβＲ２の機能喪失及びＣＩＳＨの機能喪失をもたらすゲノム編集を含んでなる。一実施形態では、改変ＮＫ細胞は、ＴＧＦβＲ２の機能喪失及びＴＩＧＩＴの機能喪失をもたらすゲノム編集を含んでなる。一実施形態では、改変ＮＫ細胞は、ＴＧＦβＲ２の機能喪失及びＡＤＯＲＡ２Ａの機能喪失をもたらすゲノム編集を含んでなる。一実施形態では、改変ＮＫ細胞は、ＴＧＦβＲ２の機能喪失及びＮＫＧ２Ａの機能喪失をもたらすゲノム編集を含んでなる。一実施形態では、改変ＮＫ細胞は、ＣＩＳＨの機能喪失及びＴＩＧＩＴの機能喪失をもたらすゲノム編集を含んでなる。一実施形態では、改変ＮＫ細胞は、ＣＩＳＨの機能喪失及びＡＤＯＲＡ２Ａの機能喪失をもたらすゲノム編集を含んでなる。一実施形態では、改変ＮＫ細胞は、ＣＩＳＨの機能喪失及びＮＫＧ２Ａの機能喪失をもたらすゲノム編集を含んでなる。一実施形態では、改変ＮＫ細胞は、ＴＩＧＩＴの機能喪失及びＡＤＯＲＡ２Ａの機能喪失をもたらすゲノム編集を含んでなる。一実施形態では、改変ＮＫ細胞は、ＴＩＧＩＴの機能喪失及びＮＫＧ２Ａの機能喪失をもたらすゲノム編集を含んでなる。一実施形態では、改変ＮＫ細胞は、ＡＤＯＲＡ２Ａの機能喪失及びＮＫＧ２Ａの機能喪失をもたらすゲノム編集を含んでなる。一実施形態では、改変ＮＫ細胞は、ＴＧＦβＲ２の機能喪失、ＣＩＳＨの機能喪失、及びＴＩＧＩＴの機能喪失をもたらすゲノム編集を含んでなる。一実施形態では、改変ＮＫ細胞は、ＴＧＦβＲ２の機能喪失、ＣＩＳＨの機能喪失、及びＡＤＯＲＡ２Ａの機能喪失をもたらすゲノム編集を含んでなる。一実施形態では、改変ＮＫ細胞は、ＴＧＦβＲ２の機能喪失、ＣＩＳＨの機能喪失、及びＮＫＧ２Ａの機能喪失をもたらすゲノム編集を含んでなる。一実施形態では、改変ＮＫ細胞は、ＴＧＦβＲ２の機能喪失、ＴＩＧＩＴの機能喪失、及びＡＤＯＲＡ２Ａの機能喪失をもたらすゲノム編集を含んでなる。一実施形態では、改変ＮＫ細胞は、ＴＧＦβＲ２の機能喪失、ＴＩＧＩＴの機能喪失、及びＮＫＧ２Ａの機能喪失をもたらすゲノム編集を含んでなる。一実施形態では、改変ＮＫ細胞は、ＴＧＦβＲ２の機能喪失、ＡＤＯＲＡ２Ａの機能喪失、及びＮＫＧ２Ａの機能喪失をもたらすゲノム編集を含んでなる。一実施形態では、改変ＮＫ細胞は、ＣＩＳＨの機能喪失、ＴＩＧＩＴの機能喪失、及びＡＤＯＲＡ２Ａの機能喪失をもたらすゲノム編集を含んでなる。一実施形態では、改変ＮＫ細胞は、ＣＩＳＨの機能喪失、ＴＩＧＩＴの機能喪失、及びＮＫＧ２Ａの機能喪失をもたらすゲノム編集を含んでなる。一実施形態では、改変ＮＫ細胞は、ＣＩＳＨの機能喪失、ＡＤＯＲＡ２Ａの機能喪失、及びＮＫＧ２Ａの機能喪失をもたらすゲノム編集を含んでなる。一実施形態では、改変ＮＫ細胞は、ＴＩＧＩＴの機能喪失、ＡＤＯＲＡ２Ａの機能喪失、及びＮＫＧ２Ａの機能喪失をもたらすゲノム編集を含んでなる。
（【００１１】以降は省略されています）

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