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公開番号2025013845
公報種別公開特許公報(A)
公開日2025-01-28
出願番号2024180454,2022513127
出願日2024-10-16,2020-08-27
発明の名称PCSK9を阻害するための組成物および方法
出願人サノフイ,SANOFI
代理人個人,個人
主分類C12N 15/63 20060101AFI20250121BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】PCSK9を標的とするdsRNA組成物、PCSK9遺伝子発現を阻害する方法、およびPCSK9遺伝子発現と関連する1種またはそれ以上の疾患を処置する方法を提供する。
【解決手段】二本鎖リボ核酸(dsRNA)であって、該dsRNAは、第1の配列を含むセンス鎖と、第2の配列を含むアンチセンス鎖とを含み、第1の配列および第2の配列は相補的であり、第1の配列は、特定の配列を含み、dsRNAは、場合により、低分子干渉RNA(siRNA)またはショートヘアピンRNA(shRNA)であり、dsRNAは、場合により、プロタンパク質転換酵素サブチリシンケキシン9(PCSK9)遺伝子の発現を阻害する、dsRNAが提供される。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）であって、該ｄｓＲＮＡは、第１の配列を含むセンス鎖と、第２の配列を含むアンチセンス鎖とを含み、第１の配列および第２の配列は相補的であり、第１の配列は、配列番号６～１１および３１０～３２１からなる群から選択される配列を含み、ｄｓＲＮＡは、場合により、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）またはショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）であり、ｄｓＲＮＡは、場合により、プロタンパク質転換酵素サブチリシンケキシン９（ＰＣＳＫ９）遺伝子の発現を阻害する、ｄｓＲＮＡ。
続きを表示（約 4,000 文字）【請求項２】
ｄｓＲＮＡは、
（１）センス鎖中にＣＣＡＵＵＵＵＡＵＵＡＡＵＡＵＧＧＵＧＡＣＵｉｎｖｄＴ（配列番号１７６）を含み、アンチセンス鎖中にＡＧＵＣＡＣＣＡＵＡＵＵＡＡＵＡＡＡＡｄＴｄＴ（配列番号１７７）を含むか、
（２）センス鎖中にＣＣＡＵＡＵＵＡＡＵＡＵＧＧＵＧＡＣＵＵＵＵｉｎｖｄＴ（配列番号１８０）を含み、アンチセンス鎖中にＡＡＡＡＧＵＣＡＣＣＡＵＡＵＵＡＡＵＡｄＴｄＴ（配列番号１８１）を含むか、
（３）センス鎖中にＣＣＡＡＵＵＡＡＵＡＵＧＧＵＧＡＣＵＵＵＵＵｉｎｖｄＴ（配列番号１８２）を含み、アンチセンス鎖中にＡＡＡＡＡＧＵＣＡＣＣＡＵＡＵＵＡＡＵｄＴｄＴ（配列番号１８３）を含むか、
（４）センス鎖中にＣＣＡＵＵＡＡＵＡＵＧＧＵＧＡＣＵＵＵＵＵＡｉｎｖｄＴ（配列番号１８４）を含み、アンチセンス鎖中にＵＡＡＡＡＡＧＵＣＡＣＣＡＵＡＵＵＡＡｄＴｄＴ（配列番号１８５）を含むか、
（５）センス鎖中にＣＣＡＵＡＡＵＡＵＧＧＵＧＡＣＵＵＵＵＵＡＡｉｎｖｄＴ（配列番号１８６）を含み、アンチセンス鎖中にＵＵＡＡＡＡＡＧＵＣＡＣＣＡＵＡＵＵＡｄＴｄＴ（配列番号１８７）を含むか、
（６）センス鎖中にＣＣＡＵＡＵＧＧＵＧＡＣＵＵＵＵＵＡＡＡＡＵｉｎｖｄＴ（配列番号１８８）を含み、アンチセンス鎖中にＡＵＵＵＵＡＡＡＡＡＧＵＣＡＣＣＡＵＡｄＴｄＴ（配列番号１８９）を含むか、
（７）センス鎖中にＣＣＡＵＵＡＵＵＡＡＵＡＵＧＧＵＧＡＣＵＵＵｉｎｖｄＴ（配列番号３２２）を含み、アンチセンス鎖中にＡＡＡＧＵＣＡＣＣＡＵＡＵＵＡＡＵＡＡｄＴｄＴ（配列番号３２３）を含むか、
（８）センス鎖中にＣＣＡＡＵＡＵＧＧＵＧＡＣＵＵＵＵＵＡＡＡＡｉｎｖｄＴ（配列番号３２４）を含み、アンチセンス鎖中にＵＵＵＵＡＡＡＡＡＧＵＣＡＣＣＡＵＡＵｄｔｄｔ（配列番号３２５）を含むか、
（９）センス鎖中にＣＣＡＡＵＵＵＵＵＡＵＵＡＡＵＡＵＧＧＵＧＡＣＵｉｎｖｄＴ（配列番号３２６）を含み、アンチセンス鎖中にＡＧＵＣＡＣＣＡＵＡＵＵＡＡＵＡＡＡＡＡＵｄＴｄＴ（配列番号３２７）を含むか、
（１０）センス鎖中にＣＣＡＵＵＵＵＡＵＵＡＡＵＡＵＧＧＵＧＡＣＵＵＵｉｎｖｄＴ（配列番号３２８）を含み、アンチセンス鎖中にＡＡＡＧＵＣＡＣＣＡＵＡＵＵＡＡＵＡＡＡＡｄＴｄＴ（配列番号３２９）を含むか、
（１１）センス鎖中にＣＣＡＵＵＵＡＵＵＡＡＵＡＵＧＧＵＧＡＣＵＵＵＵｉｎｖｄＴ（配列番号３３０）を含み、アンチセンス鎖中にＡＡＡＡＧＵＣＡＣＣＡＵＡＵＵＡＡＵＡＡＡｄＴｄＴ（配列番号３３１）を含むか、
（１２）センス鎖中にＣＣＡＵＡＵＵＡＡＵＡＵＧＧＵＧＡＣＵＵＵＵＵＡｉｎｖｄＴ（配列番号３３２）を含み、アンチセンス鎖中にＵＡＡＡＡＡＧＵＣＡＣＣＡＵＡＵＵＡＡＵＡｄＴｄＴ（配列番号３３３）を含むか、
（１３）センス鎖中にＣＣＡＡＡＵＡＵＧＧＵＧＡＣＵＵＵＵＵＡＡＡＡＵｉｎｖｄＴ（配列番号３３４）を含み、アンチセンス鎖中にＡＵＵＵＵＡＡＡＡＡＧＵＣＡＣＣＡＵＡＵＵｄＴｄＴ（配列番号３３５）を含むか、
（１４）センス鎖中にＣＣＡＧＣＡＵＵＵＵＵＡＵＵＡＡＵＡＵＧＧＵＧＡＣＵｉｎｖ
ｄＴ（配列番号３３６）を含み、アンチセンス鎖中にＡＧＵＣＡＣＣＡＵＡＵＵＡＡＵＡＡＡＡＡＵＧＣｄＴｄＴ（配列番号３３７）を含むか、
（１５）センス鎖中にＣＣＡＡＵＵＵＵＵＡＵＵＡＡＵＡＵＧＧＵＧＡＣＵＵＵｉｎｖｄＴ（配列番号３３８）を含み、アンチセンス鎖中にＡＡＡＧＵＣＡＣＣＡＵＡＵＵＡＡＵＡＡＡＡＡＵｄＴｄＴ（配列番号３３９）を含むか、
（１６）センス鎖中にＣＣＡＵＵＵＵＵＡＵＵＡＡＵＡＵＧＧＵＧＡＣＵＵＵＵｉｎｖｄＴ（配列番号３４０）を含み、アンチセンス鎖中にＡＡＡＡＧＵＣＡＣＣＡＵＡＵＵＡＡＵＡＡＡＡＡｄＴｄＴ（配列番号３４１）を含むか、
（１７）センス鎖中にＣＣＡＵＵＵＡＵＵＡＡＵＡＵＧＧＵＧＡＣＵＵＵＵＵＡｉｎｖｄＴ（配列番号３４２）を含み、アンチセンス鎖中にＵＡＡＡＡＡＧＵＣＡＣＣＡＵＡＵＵＡＡＵＡＡＡｄＴｄＴ（配列番号３４３）を含むか、
または
（１８）センス鎖中にＣＣＡＵＵＡＵＵＡＡＵＡＵＧＧＵＧＡＣＵＵＵＵＵＡＡｉｎｖｄＴ（配列番号３４４）を含み、アンチセンス鎖中にＵＵＡＡＡＡＡＧＵＣＡＣＣＡＵＡＵＵＡＡＵＡＡｄＴｄＴ（配列番号３４５）を含む、
請求項１に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項３】
二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）であって、該ｄｓＲＮＡは、第１の配列を含むセンス鎖と、第２の配列を含むアンチセンス鎖とを含み、第１の配列および第２の配列のみが相補的であり、第１の配列は、配列番号３、４、および１３の内の１つであり、ｄｓＲＮＡは、場合により、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）またはショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）であり、ｄｓＲＮＡは、場合により、プロタンパク質転換酵素サブチリシンケキシン９（ＰＣＳＫ９）遺伝子の発現を阻害する、ｄｓＲＮＡ。
【請求項４】
ｄｓＲＮＡは、
（１９）センス鎖中にＣＣＡＵＵＧＵＡＧＣＡＵＵＵＵＵＡＵＵＡＡＵｉｎｖｄＴ（配列番号１６２）を含み、アンチセンス鎖中にＡＵＵＡＡＵＡＡＡＡＡＵＧＣＵＡＣＡＡｄＴｄＴ（配列番号１６３）を含むか、
（２０）センス鎖中にＣＣＡＧＵＡＧＣＡＵＵＵＵＵＡＵＵＡＡＵＡＵｉｎｖｄＴ（配列番号１６６）を含み、アンチセンス鎖中にＡＵＡＵＵＡＡＵＡＡＡＡＡＵＧＣＵＡＣｄＴｄＴ（配列番号１６７）を含むか、
または
（２１）センス鎖中にＣＣＡＧＡＧＵＧＵＧＡＡＡＧＧＵＧＣＵＧＡＵｉｎｖｄＴ（配列番号２９０）を含み、アンチセンス鎖中にＡＵＣＡＧＣＡＣＣＵＵＵＣＡＣＡＣＵＣｄＴｄＴ（配列番号２９１）を含む、
請求項３に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項５】
第１の鎖および第２の鎖は、それぞれ長さが３０個以下のヌクレオチドであり、場合により、第１の鎖および第２の鎖は、それぞれ長さが少なくとも１９個および２３個以下のヌクレオチドである、請求項１～４のいずれか１項に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項６】
ｄｓＲＮＡは、１つまたはそれ以上の修飾ヌクレオチドを含み；
１つまたはそれ以上の修飾ヌクレオチドの内の少なくとも１つは、場合により、２’－Ｏ－メチルヌクレオチド、５’－ホスホロチオエートヌクレオチド、またはコレステロール誘導体もしくは親油性部分に連結された末端ヌクレオチドであり；
１つまたはそれ以上の修飾ヌクレオチドの内の少なくとも１つは、場合により、２’－フルオロ、２’－デオキシ、２’－Ｏ－メトキシエチル、拘束エチル（ｃＥｔ）、デオキシ、逆位デオキシ、逆位ジデオキシ、ロックド核酸、脱塩基、２’－アミノ、２’－アルキル、モルホリノ、ホスホルアミデート、または非天然の塩基含有ヌクレオチドであり；
ｄｓＲＮＡは、場合により、１つまたはそれ以上の２’－Ｏ－メチルヌクレオチドと、
１つまたはそれ以上の２’－フルオロヌクレオチドとを含み；
ｄｓＲＮＡは、場合により、２つ以上の２’－Ｏ－メチルヌクレオチドと、２つ以上の２’－フルオロヌクレオチドとを、下記のパターン
ＯＭｅ－Ｆ－ＯＭｅ－ＦまたはＦ－ＯＭｅ－Ｆ－ＯＭｅ
（式中、ＯＭｅは、２’－Ｏ－メチルヌクレオチドを表し、Ｆは、２’－フルオロヌクレオチドを表す）で含み：
ｄｓＲＮＡは、場合により、それぞれ２’－Ｏ－メチルヌクレオチドである最大１０個の連続したヌクレオチドを含むか、またはそれぞれ２’－フルオロヌクレオチドである最大１０個の連続したヌクレオチドを含む、
請求項１～５のいずれか１項に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項７】
（ａ）ｄｓＲＮＡは、１つもしくはそれ以上のホスホロチオエート基を含むか
または
（ｂ）ｄｓＲＮＡは、ホスホロチオエート基を含まない、
請求項１～６のいずれか１項に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項８】
（ａ）ｄｓＲＮＡは、１つもしくはそれ以上のホスホトリエステル基を含むか、
または
（ｂ）ｄｓＲＮＡは、ホスホトリエステル基を含まない、
請求項１～７のいずれか１項に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項９】
ｄｓＲＮＡは、リンカーを介して１つまたはそれ以上のＧａｌＮＡｃ誘導体に付着しており、場合により、ｄｓＲＮＡは、三価分枝リンカーを介して３つのＧａｌＮＡｃ誘導体に付着しており、場合により、１つまたはそれ以上のＧａｌＮＡｃ誘導体の内の少なくとも１つは、ｄｓＲＮＡのセンス鎖の３’末端、アンチセンス鎖の３’末端、またはセンス鎖の５’末端に付着している、請求項１～８のいずれか１項に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項１０】
センス鎖およびアンチセンス鎖の一方または両方は、
（ａ）１つもしくはそれ以上のヌクレオチドを含む５’オーバーハングであって、場合により、１つもしくはそれ以上のチミンを含む５’オーバーハング；
および／または
（ｂ）１つもしくはそれ以上のヌクレオチドを含む３’オーバーハングであって、場合により、２つのヌクレオチドを含み、場合により、１つもしくはそれ以上のチミンを含む３’オーバーハング
をさらに含む、請求項１～９のいずれか１項に記載のｄｓＲＮＡ。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本開示は、プロタンパク質転換酵素サブチリシンケキシン９（ＰＣＳＫ９）を標的とするｄｓＲＮＡ組成物、ＰＣＳＫ９遺伝子発現を阻害する方法、およびＰＣＳＫ９遺伝子発現と関連する１種またはそれ以上の疾患を処置する方法に関する。
続きを表示（約 3,100 文字）【０００２】
配列表の提出
本明細書では、参照としての役割を果たす核酸配列が開示されている。同一の配列はまた、特許事項の目的のための標準要件に従ってフォーマットされた配列表にも示されている。任意の配列が標準配列表と異なる場合には、本明細書で説明されている配列を参照すべきである。
【背景技術】
【０００３】
ＰＣＳＫ９は、サブチリシンセリンプロテアーゼファミリのメンバーである。他の８種の哺乳動物サブチリシンプロテアーゼＰＣＳＫ１～８は、分泌経路で多種多様なタンパク質を処理するプロタンパク質変換酵素であり、多様な生物学的プロセスで役割を果たす。ＰＣＳＫ９は、コレステロール代謝で役割を果たすことが提案されている。ＰＣＳＫ９メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）発現は、マウスでは食事性コレステロールの摂取により下方制御されており（非特許文献１）、ＨｅｐＧ２細胞ではスタチンにより上方制御されており（非特許文献２）、ステロール制御因子結合タンパク質（ＳＲＥＢＰ）トランスジェニックマウスでは上方制御されており（非特許文献３）、コレステロール生合成酵素および低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）と類似している。さらに、ＰＣＳＫ９ミスセンス変異は、常染色体優生高コレステロール血症の一種と関連していることが判明している（非特許文献４、非特許文献５、非特許文献６）。ＰＣＳＫ９は、一般集団では低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロールレベルの決定でも役割を果たし得、なぜならば、日本人集団では、単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）がコレステロールレベルと関連しているからである（非特許文献７）。
【０００４】
常染色体優生高コレステロール血症（ＡＤＨ）は、患者が総コレステロールレベルおよびＬＤＬコレステロールレベルの上昇、腱黄色腫、ならびに早期粥状動脈硬化を示す単一遺伝子疾患である（非特許文献８）。ＡＤＨおよび劣勢型の常染色体劣勢高コレステロール血症（ＡＲＨ）（非特許文献９）の発病は、肝臓によるＬＤＬ取り込みの欠損に起因する。ＡＤＨは、ＬＤＬ取り込みを防ぐＬＤＬＲ変異により引き起こされるか、またはＬＤＬＲに結合する、ＬＤＬ上のタンパク質であるアポリポタンパク質Ｂの変異により引き起こされる。ＡＲＨは、クラスリンとの相互作用を介したＬＤＬＲ－ＬＤＬ複合体のエンドサイトーシスに必要な低密度リポタンパク質受容体アダプタータンパク質１（ＬＤＬＲＡＰ１）タンパク質の変異により引き起こされる。
【０００５】
過剰発現の研究から、ＬＤＬＲレベル（従って肝臓によるＬＤＬ取り込み）の制御におけるＰＣＳＫ９の役割が示されている（非特許文献１０、非特許文献１１、非特許文献１２）。マウスにおけるマウスＰＣＳＫ９またはヒトＰＣＳＫ９のアデノウイルス媒介過剰発現により、総コレステロールレベルおよびＬＤＬコレステロールレベルが上昇し、この効果は、ＬＤＬＲノックアウト動物では見られない（非特許文献１０、非特許文献１１、非特許文献１２）。加えて、ＰＣＳＫ９過剰発現により、ＬＤＬＲｍＲＮＡレベル、ＳＲＥＢＰタンパク質レベル、またはＳＲＥＢＰタンパク質の核対細胞質比が影響を受けることなく、肝臓ＬＤＬＲタンパク質が著しく減少する。
【０００６】
ＰＣＳＫ９での機能喪失変異は、マウスモデルで設計されており（非特許文献１３）、
ヒト個体で同定されている（非特許文献１４）。両方の場合でも、ＰＣＳＫ９機能の喪失により、総ＬＤＬコレステロールが低下する（ＬＤＬ－Ｃ）。ＰＣＳＫ９遺伝子の配列バリエーションと関連する血漿ＬＤＬ－Ｃの生涯にわたる減少の効果が研究されており、データは、ＬＤＬ－Ｃの血漿レベルの適度な生涯にわたる減少が、冠動脈イベントの発生の相当な減少と関連しており、冠動脈心疾患に対する予防をもたらすことを示した（非特許文献１５）。
【０００７】
二本鎖ＲＮＡ分子（ｄｓＲＮＡ）は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）として既知の高度に保存された制御機序における遺伝子発現をブロックすることが知られている。特許文献１では、線虫（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）における遺伝子の発現を阻害するための少なくとも２５個のヌクレオチドの長さのｄｓＲＮＡの使用が開示されていた。ｄｓＲＮＡはまた、植物（例えば、特許文献２、特許文献３を参照されたい）、ショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）（例えば、非特許文献１６を参照されたい）、および哺乳動物（例えば、特許文献４を参照されたい）等の他の生物においても標的ＲＮＡを分解することが示されている。この天然の機序は、現在、遺伝子の異常なまたは望まれていない制御により引き起こされる障害を処置するための新規のクラスの医薬品の開発の焦点となっている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
国際公開第９９／３２６１９号パンフレット
国際公開第９９／５３０５０号パンフレット
国際公開第９９／６１６３１号パンフレット
国際公開第００／４４８９５号パンフレット
【非特許文献】
【０００９】
Ｍａｘｗｅｌｌ，Ｋ．Ｎ．（２００３）Ｊ．ＬｉｐｉｄＲｅｓ．４４，２１０９～２１１９頁
Ｄｕｂｏｃ，Ｇ．（２００４）Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．２４，１４５４～１４５９頁
Ｈｏｒｔｏｎ，Ｊ．Ｄ．（２００３）ＰＮＡＳ１００１２０２７～１２０３２頁
Ａｂｉｆａｄｅｌ，Ｍ．（２００３）Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．３４，１５４～１５６頁
Ｔｉｍｍｓ，Ｋ．Ｍ．（２００４）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．１１４，３４９～３５３頁
Ｌｅｒｅｎ，Ｔ．Ｐ．（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．６５，４１９～４２２頁
Ｓｈｉｏｊｉ，Ｋ．（２００４）Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．４９，１０９～１１４頁
Ｒａｄｅｒ，Ｄ．Ｊ．（２００３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１１，１７９５～１８０３頁
Ｃｏｈｅｎ，Ｊ．Ｃ．（２００３）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｌｉｐｉｄｏｌ．１４，１２１～１２７頁
Ｍａｘｗｅｌｌ，Ｋ．Ｎ．（２００４）ＰＮＡＳ１０１，７１００～７１０５頁
Ｂｅｎｊａｎｎｅｔ，Ｓ．他（２００４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９，４８８６５～４８８７５頁
Ｐａｒｋ，Ｓ．Ｗ．（２００４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９，５０６３０～５０６３８頁
Ｒａｓｈｉｄ他（２００５）ＰＮＡＳ，１０２，５３７４～５３７９頁
Ｃｏｈｅｎ他（２００５）ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔｉｃｓ３７：１６１～１６５頁
Ｃｏｈｅｎ他（２００６）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５４：１２６４～１２７２頁
Ｙａｎｇ，Ｄ．他（２０００）Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．１０：１１９１～１２００頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
ＬＤＬコレステロールの制御におけるＰＣＳＫ９の重要性と、高コレステロール血症等の循環器疾患の流行とに起因して、ｄｓＲＮＡ等のＰＣＳＫ９発現の阻害剤を同定し、そのような阻害剤を有効性および望まれていない副作用（例えば細胞傷害性）に関して試験することが継続的に求められている。
（【００１１】以降は省略されています）

関連特許