発明の詳細な説明【技術分野】 【０００１】 本発明は、腫瘍細胞においてＧＧＴ１、ＩＬ－１０Ｒ、ＣＤ１６、ＲＰＭ－１、およびシステイン関連酵素をコードする遺伝子からなる群から選択される少なくとも１つの遺伝子の機能をノックダウンまたはノックアウトすることを含む、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法（ただし、ヒトを処置する方法を除く）に関する。さらに、本発明は、(i)腫瘍細胞に候補物質を接触させること、(ii)腫瘍細胞におけるＧＧＴ１、ＩＬ－１０Ｒ、ＣＤ１６、ＲＰＭ－１、およびシステイン関連酵素をコードする遺伝子からなる群から選択される少なくとも１つの遺伝子またはそのタンパク質の発現レベルを測定すること、および(iii）候補物質を接触させなかった場合と比較して、前記発現レベルを減少させた候補物質を腫瘍の治療薬として選択することを含む、腫瘍治療薬のスクリーニング方法に関する。 続きを表示（約 3,000 文字）【背景技術】 【０００２】 希少がんは症例数が少なく、臨床研究や治験を進めにくいことから、標準治療の確立が困難である場合が多い。例えば、劇症型ＮＫ細胞白血病（Ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ ＮＫ ｃｅｌｌ Ｌｅｕｋｅｍｉａ、以下ＡＮＫＬと記載する）は、白血病のまれな型であり、発症頻度が低く、病態が未解明であり、それ故標準治療が未確立である。 【０００３】 ＡＮＫＬは、ＮＫ細胞の全身性腫瘍性増殖であり、ほとんど常にエプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）と関連し、侵攻性の臨床経過をたどり、生存中央期間２ヶ月未満の予後不良悪性疾患である（非特許文献１）。また、他の民族集団よりもアジア人にはるかに多く、日本ではＡＹＡ世代を含む青壮年期が発症ピークとなっている。 【０００４】 ＡＮＫＬの分子病因としては、ＳＴＡＴ３およびＲＡＳ－ＭＡＰＫ経路遺伝子の変異およびＤＤＸ３Ｘおよびエピジェネティック修飾因子の変異が同定されているが、発症部位が異なる節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻型（ＥＮＫＬ）との差がないと報告されている（非特許文献２）。また、ＥＢＶ感染ヒト化リンパ増殖疾患マウスでは、マクロファージが腫瘍微小環境に重要な役割を有することが報告されている（非特許文献３）。 【先行技術文献】 【非特許文献】 【０００５】 J.K.C. Chan et al., Aggressive NK-cell leukaemia in WHO classification of tumours of haematopoietic and lymphoid tissues 4th edition 2008, edited by Steven H. Swerdlow et al., (World Health Organization classification of tumours) International Agency for Research on Cancer: pp 276-277. Dufva, O., Kankainen, M., Kelkka, T. et al. Aggressive natural killer-cell leukemia mutational landscape and drug profiling highlight JAK-STAT signaling as therapeutic target. Nat Commun 9, 1567 (2018). https://doi.org/10.1038/s41467-018-03987-2 Hiroshi Higuchi, Natsuko Yamakawa, Ken-Ichi Imadome et al. Role of exosomes as a proinflammatory mediator in the development of EBV-associated lymphoma. Blood. 2018 Jun 7;131(23):2552-2567. doi: 10.1182/blood-2017-07-794529. 【発明の概要】 【発明が解決しようとする課題】 【０００６】 ＡＮＫＬは、稀少疾患であるが故に病態解明が推進されず、予後不良疾患であるが、日本においても年間数十症例が新規発症していることやＡＹＡ世代や青壮年期に発症することを鑑みると治療法の開発は重要である。また、欧米ではさらに頻度が低いが、東アジアや南アメリカでは発症報告があるため、全世界的には多くの患者が発症している可能性がある。よって、ＡＮＫＬに対して、創薬標的となりうる分子を同定し、生命予後を改善する治療法を開発することが求められている。 【０００７】 本発明は、腫瘍の創薬標的となりうる分子を同定し、これをノックダウンまたはノックアウトすることによる、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法を提供すること、および同定した分子を標的とする、腫瘍治療薬のスクリーニング方法を提供することを課題とする。また、腫瘍の治療を可能にする新たな手法を提供することは、本発明の別の課題である。 【課題を解決するための手段】 【０００８】 本発明によれば以下の発明が提供される。 ［１］ 腫瘍細胞においてＧＧＴ１、ＩＬ－１０Ｒ、ＣＤ１６、ＲＰＭ－１、およびシステイン関連酵素をコードする遺伝子からなる群から選択される少なくとも１つの遺伝子の機能をノックダウンまたはノックアウトすることを含む、腫瘍細胞の増殖を抑制する方法（ただし、ヒトを処置する方法を除く）。 ［２］ 前記腫瘍細胞が、固形腫瘍または血液腫瘍の細胞である、［１］に記載の方法。 ［３］ 前記血液腫瘍が、劇症型ＮＫ細胞白血病を含む白血病、悪性リンパ腫、または多発性骨髄腫から選択される、［２］に記載の方法。 ［４］ 以下の(i)から(iii）を含む腫瘍治療薬のスクリーニング方法： (i) 腫瘍細胞に候補物質を接触させること、 (ii) 腫瘍細胞におけるＧＧＴ１、ＩＬ－１０Ｒ、ＣＤ１６、ＲＰＭ－１、およびシステイン関連酵素をコードする遺伝子からなる群から選択される少なくとも１つの遺伝子またはそのタンパク質の発現レベルを測定すること、および (iii） 候補物質を接触させなかった場合と比較して、前記発現レベルを減少させた候補物質を腫瘍の治療薬として選択すること。 ［５］ 前記腫瘍細胞が、固形腫瘍または血液腫瘍の細胞である、［４］に記載の方法。 ［６］ 前記血液腫瘍が、劇症型ＮＫ細胞白血病を含む白血病、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫から選択される、［５］に記載の方法。 ［７］ 前記腫瘍が、劇症型ＮＫ細胞白血病を含む白血病である、［４］から［６］のいずれか一に記載の方法。 ［８］ ＧＧＴ１、ＩＬ－１０Ｒ、ＣＤ１６、ＲＰＭ－１、およびシステイン関連酵素をコードする遺伝子からなる群から選択される少なくとも１つの遺伝子の機能をノックダウンまたはノックアウトしたＮＫ細胞。 【図面の簡単な説明】 【０００９】 図１は、実施例１の遺伝子欠損によるＡＮＫＬ細胞に対する増殖抑制効果を示す。 図２は、各種アミノ酸不含有培地でのＡＮＫＬ細胞の生存率を示す。システイン不含有培地での結果を線で囲って示す。グラフ中のＡＮＫＬ１およびＡＮＫＬ３は同じ患者の異なる時期に採取した試料を示す。 図３は、システインを含むアミノ酸２０種類を添加した培地でのＧＧＴ１欠損ＡＮＫＬ細胞の生存率を示す。 【発明を実施するための形態】 【００１０】 以下に記載する本発明の説明は、代表的な実施形態や具体例に基づいてなされることがあるが、本発明はそのような実施形態に限定されるものではない。なお、本明細書において「～」を用いて表される数値範囲は「～」の前後に記載される数値を下限値および上限値として含む範囲を意味する。 （【００１１】以降は省略されています） この特許をJ-PlatPatで参照する
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