特許ウォッチ

公開番号2024161390
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-11-19
出願番号2024118255,2023020373
出願日2024-07-23,2018-06-28
発明の名称ヒトドメインを有する抗B細胞成熟抗原キメラ抗原受容体
出願人個人,テネオバイオ、インコーポレイテッド
代理人個人,個人,個人,個人,個人,個人
主分類C12N 15/86 20060101AFI20241112BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】ウイルス組み換え発現ベクター、および哺乳類におけるがんを治療又は予防するための医薬組成物を提供する。
【解決手段】B細胞成熟抗原(BCMA)へ抗原特異性を有するキメラ抗原受容体(CAR)をコードするヌクレオチド配列を含む核酸を含む、ウイルス組み換え発現ベクター、組み換え発現ベクターを含む単離された宿主細胞、細胞の集団、それらのいずれかを含む、哺乳類におけるがんを治療又は予防するための医薬組成物も提供される。
【選択図】なし
特許請求の範囲【請求項１】
抗原認識ドメインと、膜貫通（ＴＭ）ドメインと、Ｔ細胞活性化ドメインとを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に対する抗原特異性を有し、前記抗原認識ドメインが、
（ａ）配列番号１～３、
（ｂ）配列番号４～６、
（ｃ）配列番号７～９、又は
（ｄ）配列番号１０～１２
のアミノ酸配列を含むＣＡＲ。
続きを表示（約 750 文字）【請求項２】
前記ＣＡＲの全てのドメインがヒトのである、請求項１に記載のＣＡＲ。
【請求項３】
前記抗原認識ドメインが、約８～約４０アミノ酸残基の長さを有するリンカーペプチドを含まない、請求項１又は２に記載のＣＡＲ。
【請求項４】
前記ＣＡＲが抗体軽鎖可変領域を含まない、請求項１～３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項５】
前記抗原認識ドメインが、
（ａ）配列番号１３、
（ｂ）配列番号１４、
（ｃ）配列番号１５、又は
（ｄ）配列番号１６
のアミノ酸配列を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項６】
前記Ｔ細胞活性化ドメインが、以下のタンパク質のうちのいずれか１つのＴ細胞シグナル伝達ドメインを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載のＣＡＲ：ヒトＣＤ２８タンパク質、ヒトＣＤ３－ゼータタンパク質、ヒトＦｃＲγタンパク質、ＣＤ２７タンパク質、ＯＸ４０タンパク質、ヒト４－１ＢＢタンパク質、ヒト誘導性Ｔ細胞共刺激タンパク質（ＩＣＯＳ）、前述のいずれかの改変バージョン、又は前述の任意の組み合わせ。
【請求項７】
配列番号１７～２８のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項８】
請求項１～７のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードしているヌクレオチド配列を含む核酸。
【請求項９】
配列番号２９～４０のいずれか１つのヌクレオチド配列を含む、請求項８に記載の核酸。
【請求項１０】
請求項８又は９に記載の核酸を含むベクター。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
この特許出願は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる、２０１７年６月３０日出願の米国仮特許出願第６２／５２７，５５６号の利益を主張する。
続きを表示（約 6,800 文字）【０００２】
連邦支援の研究又は開発に関する記述
本発明は、米国国立衛生研究所、国立がん研究所によって、プロジェクト番号ＺＩＡＢＣ０１１４３９０５の下、政府の支援を受けて成された。政府は、本発明において一定の権利を有する。
【０００３】
電子的に提出された文献の参照による援用
本明細書と同時に提出され、以下の通り特定されるコンピュータ可読ヌクレオチド／アミノ酸配列表は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる：２０１８年６月２５日付の「７３９５３４＿ＳＴ２５．ＴＸＴ」という名称の６７，０６１バイトのＡＳＣＩＩ（テキスト）ファイル。
【背景技術】
【０００４】
がんは、公衆衛生上の懸念である。化学療法等の治療の進歩にもかかわらず、多くのがんの予後が不良である場合がある。例えば、多発性骨髄腫（ＭＭ）の治療によって寛解する場合もあるが、多くの患者は最終的に再発し、死に至る。したがって、がんの更なる治療法に対するアンメットニーズが存在する。
【発明の概要】
【０００５】
本発明の実施形態は、抗原認識ドメインと、膜貫通（ＴＭ）ドメインと、Ｔ細胞活性化ドメインとを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に対する抗原特異性を有し、該抗原認識ドメインが、（ａ）配列番号１～３、（ｂ）配列番号４～６、（ｃ）配列番号７～９、又は（ｄ）配列番号１０～１２のアミノ酸配列を含むＣＡＲを提供する。
【０００６】
本発明の更なる実施形態は、本発明のＣＡＲに関連する関連核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、細胞の集団、及び医薬組成物を提供する。
【０００７】
本発明の追加の実施形態は、哺乳類におけるがんを治療又は予防する関連方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
図１Ａ～１Ｄは、ＣＤ８α分子のヒンジ及び膜貫通の領域、ＣＤ２８共刺激分子の細胞質部分、並びにＣＤ３ζＴ細胞活性化ドメインの細胞質部分と組み合わせた、ＦＨＶＨ７４（Ａ）、ＦＨＶＨ３２（Ｂ）、ＦＨＶＨ３３（Ｃ）、又はＦＨＶＨ９３（Ｄ）の完全ヒト重鎖のみ抗原認識ドメインを含むＣＡＲを表す図である。
図１Ｅ～１Ｈは、ＣＤ８α分子のヒンジ及び膜貫通の領域、４－１ＢＢ共刺激分子の細胞質部分、並びにＣＤ３ζＴ細胞活性化ドメインの細胞質部分と組み合わせた、ＦＨＶＨ７４（Ｅ）、ＦＨＶＨ３２（Ｆ）、ＦＨＶＨ３３（Ｇ）、又はＦＨＶＨ９３（Ｈ）の完全ヒト重鎖のみ抗原認識ドメインを含むＣＡＲを表す図である。
図１Ｉ～１Ｌは、ＣＤ８α分子のヒンジ及び膜貫通の領域、誘導性Ｔ細胞共刺激タンパク質（ＩＣＯＳ）の細胞質部分、並びにＣＤ３ζＴ細胞活性化ドメインの細胞質部分と組み合わせた、ＦＨＶＨ７４（Ｉ）、ＦＨＶＨ３２（Ｊ）、ＦＨＶＨ３３（Ｋ）、又はＦＨＶＨ９３（Ｌ）の完全ヒト重鎖のみ抗原認識ドメインを含むＣＡＲを表す図である。
図２は、実施例２に記載の通り、図示されている４つのＦＨＶＨＣＡＲが初代ヒトＴ細胞によって発現されたことを示す実験データを表す一連のグラフである。非形質導入（ＵＴ）Ｔ細胞がネガティブコントロールとして含まれ、１１Ｄ５－３－ＣＤ８２８ＺがポジティブコントロールＣＡＲとして提供される。培養２日目にＴ細胞に形質導入し、培養７日目に該細胞をＢＣＭＡ－Ｆｃタンパク質試薬で染色した。プロットは、ゲートした生リンパ球である。プロット上の数字は、ＣＡＲを発現している（上）又はＣＡＲを発現していない（下）ＣＤ３＋細胞の百分率である。
図３は、ＦＨＶＨＣＡＲを発現しているＴ細胞によるＢＣＭＡ特異的脱顆粒を示す実験データを表す一連のグラフである。これらグラフは、抗原特異的機能を評価するためのＣＤ１０７ａ脱顆粒アッセイにおける、４つのＦＨＶＨＣＡＲのうちの１つが形質導入された初代ヒトＴ細胞の結果を示す。実施例３に記載の通り、ＢＣＭＡ陰性標的細胞（ＮＧＦＲ－Ｋ５６２）と比べて、ＢＣＭＡ
＋
標的細胞（ＢＣＭＡ－Ｋ５６２）と共に培養したとき、各ＣＡＲを発現しているＴ細胞はより多く脱顆粒した。ＵＴ細胞がネガティブコントロールとして含まれ、１１Ｄ５－３－ＣＤ８２８ＺがポジティブコントロールＣＡＲとして提供される。プロットは、ゲートしたＣＤ３
＋
リンパ球である。プロット上の数字は、ＣＤ１０７ａをアップレギュレートしている（上）又はＣＤ１０７ａをアップレギュレートしていない（下）ＣＤ３＋細胞の百分率である。
図４Ａは、１１Ｄ５－３－ＣＤ８２８ＺＣＡＲがＢＣＭＡ特異的に増殖したことを示す実験データを表すグラフである。プロットは、ゲートした生ＣＤ３
＋
リンパ球である。白色ヒストグラムは、ＢＣＭＡ－Ｋ５６２（ＢＣＭＡを発現している）標的細胞で刺激されたＣＡＲ
＋
Ｔ細胞を表し、黒色ヒストグラムは、ＮＧＦＲ－Ｋ５６２（ＢＣＭＡ陰性）細胞で刺激されたＣＡＲ
＋
Ｔ細胞を表す。全ての結果は、同じ患者由来の細胞を用いて同時に得られた。図４Ｂ～４Ｃは、実施例５に記載の通り、ＦＨＶＨ７４－ＣＤ８２８Ｚ（Ｂ）、又はＦＨＶＨ３２－ＣＤ８２８Ｚ（Ｃ）ＣＡＲがＢＣＭＡ特異的に増殖したことを示す実験データを表すグラフである。
図４Ｄ～４Ｅは、実施例５に記載の通り、ＦＨＶＨ３３－ＣＤ８２８Ｚ（Ｄ）、又はＦＨＶＨ９３－ＣＤ８２８Ｚ（Ｅ）ＣＡＲがＢＣＭＡ特異的に増殖したことを示す実験データを表すグラフである。図４Ｆは、表示したＣＡＲを形質導入したＴ細胞をＢＣＭＡ
＋
標的細胞と共に培養したときにＣＡＲ
＋
Ｔ細胞の絶対数が増加したことを示す実験データを表すグラフである。ＣＡＲＴ細胞をＢＣＭＡ－Ｋ５６２細胞と共に培養したとき、全てのＣＡＲを発現しているＴ細胞についてＣＡＲ
＋
Ｔ細胞の数が増加した。Ｙ軸は、ＣＡＲ
＋
Ｔ細胞の数（×１０
６
）を表す。Ｘ軸は、Ｔ細胞をＢＣＭＡ
＋
標的細胞と共に培養した日数を表す。
図５Ａは、ＵＴ細胞のＢＣＭＡ
＋
標的細胞を殺傷する能力と比べた、ＦＨＶＨ３３－ＣＤ８２８ＺＣＡＲのＢＣＭＡ
＋
標的細胞を殺傷する能力を示す実験データを表すグラフである。ＦＨＶＨ３３－ＣＤ８２８ＺＣＡＲを発現しているＴ細胞をＲＰＭＩ８２２６標的細胞と共に、インビトロで４時間、表示したエフェクタ対標的比で培養した。細胞傷害性をデュープリケートで判定した。結果を平均の＋／－標準誤差として提示する。Ｙ軸は、ＣＡＲの細胞傷害性％を表す。Ｘ軸は、Ｔ細胞の標的細胞に対する比を表す。図５Ｂは、ＵＴ細胞のＢＣＭＡ
＋
標的細胞を殺傷する能力と比べた、ＦＨＶＨ３３－ＣＤ８ＢＢＺＣＡＲのＢＣＭＡ
＋
標的細胞を殺傷する能力を示す実験データを表すグラフである。ＦＨＶＨ３３－ＣＤ８ＢＢＺＣＡＲを発現しているＴ細胞をＲＰＭＩ８２２６標的細胞と共に、インビトロで４時間、表示したエフェクタ対標的比で培養した。細胞傷害性をデュープリケートで判定した。結果を平均の＋／－標準誤差として提示する。Ｙ軸は、ＣＡＲの細胞傷害性％を表す。Ｘ軸は、Ｔ細胞の標的細胞に対する比を表す。
図６は、４－１ＢＢ共刺激ドメインを有するＣＡＲが初代ヒトＴ細胞の表面上で発現し、ＦＨＶＨ３３－ＣＤ８ＢＢＺが最も高発現を示すことを示す実験データを示す一連のグラフである。プロットは、４つのＦＨＶＨＣＡＲのＢＣＭＡ－Ｆｃ染色、１１Ｄ５－３－ＣＤ８２８Ｚ対照ＣＡＲの染色、及びＵＴ細胞の染色を示す。プロットは、ゲートした生リンパ球である。プロット上の数字は、ＢＣＭＡ－Ｆｃで染色されている（上の数字）又は染色されていない（下の数字）細胞の百分率である。
図７Ａ～７Ｂは、ＦＨＶＨ３３－ＣＤ８ＢＢＺを発現しているＴ細胞（Ｂ）と比べた、ＵＴ細胞（Ａ）におけるこのＣＡＲの発現を表す。プロットは、ゲートした生ＣＤ３
＋
リンパ球である。プロットにおける数字は、ＢＣＭＡ－ＰＥ＋（上）及びＢＣＭＡ－ＰＥ－（下）の百分率である。
図７Ｃ～７Ｆは、ＣＤ１０７ａ染色によって評価したとき、ＦＨＶＨ３３－ＣＤ８ＢＢＺが形質導入されたＴ細胞が、ＢＣＭＡ特異的に脱顆粒したことを示す実験データを示す。このデータは、ＦＨＶＨ３３＋ＢＣＭＡ－Ｋ５６２（Ｅ）及びＦＨＶＨ３３＋ＮＧＦＲ－Ｋ５６２細胞（Ｆ）におけるＣＤ１０７ａのアップレギュレーションと比べた、ＵＴ＋ＢＣＭＡ－Ｋ５６２（Ｃ）及びＵＴ＋ＮＧＦＲ－Ｋ５６２細胞（Ｄ）におけるＣＤ１０７ａのアップレギュレーションを示す。図７Ａ～７Ｂに提示したのと同じＴ細胞培養物を使用した。プロットは、ゲートした生ＣＤ３
＋
リンパ球である。プロットにおける数字は、ＣＤ１０７ａ＋（上）及びＣＤ１０７ａ－（下）の百分率である。
図７Ｃ～７Ｆは、ＣＤ１０７ａ染色によって評価したとき、ＦＨＶＨ３３－ＣＤ８ＢＢＺが形質導入されたＴ細胞が、ＢＣＭＡ特異的に脱顆粒したことを示す実験データを示す。このデータは、ＦＨＶＨ３３＋ＢＣＭＡ－Ｋ５６２（Ｅ）及びＦＨＶＨ３３＋ＮＧＦＲ－Ｋ５６２細胞（Ｆ）におけるＣＤ１０７ａのアップレギュレーションと比べた、ＵＴ＋ＢＣＭＡ－Ｋ５６２（Ｃ）及びＵＴ＋ＮＧＦＲ－Ｋ５６２細胞（Ｄ）におけるＣＤ１０７ａのアップレギュレーションを示す。図７Ａ～７Ｂに提示したのと同じＴ細胞培養物を使用した。プロットは、ゲートした生ＣＤ３
＋
リンパ球である。プロットにおける数字は、ＣＤ１０７ａ＋（上）及びＣＤ１０７ａ－（下）の百分率である。
図７Ｇは、ＣＡＲを発現しているＴ細胞がＢＣＭＡ特異的にＩＦＮγを生成したことを示す実験データを示す。Ｔ細胞をＢＣＭＡ
＋
細胞株ＢＣＭＡ－Ｋ５６２及びＲＰＭＩ８２２６と共に培養したとき、大量のＩＦＮγが放出された。Ｙ軸は、ＩＦＮγの量（ｐｇ／ｍＬ）を表す。Ｘ軸は、実験で使用した標的細胞を表す。
図８は、標的初代ヒト骨髄腫骨髄細胞（黒色バー）又は対照標的ＰＢＭＣ（灰色バー）と共に共培養した際の、非形質導入（ＵＴ）又はＦＨＶＨ３３－ＣＤ８２８Ｚ若しくはＦＨＶＨ３３－ＣＤ８ＢＢＺＣＡＲが形質導入されたＴ細胞によって分泌されたＩＦＮγの量（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
図９Ａは、マウスにおけるＦＨＶＨ３３－ＣＤ８ＢＢＺＴ細胞の用量の力価測定を示す概略図である。雌（Ｆ）の７～８週（ｗｋ）齢のＮＳＧマウスに、８００万（Ｍ）個のＲＰＭＩ８２２６細胞を皮内（ｉ．ｄ．）注射し、腫瘍を１０日間成長させた。０日目に、様々な数のＦＨＶＨ３３－ＣＤ８ＢＢＺ発現Ｔ細胞をマウスに静脈内（ＩＶ）注入した。３日毎に（ｄ）腫瘍を測定した。
図９Ｂは、ＣＡＲＴ細胞注入後の表示した日数における、０．２×１０
６
（黒三角）、０．７×１０
６
（黒丸）、又は２．２×１０
６
（白丸）個のＦＨＶＨ３３－ＣＤ８ＢＢＺを発現しているＴ細胞で図９Ａに示す通り処理されたマウスにおいて測定された腫瘍体積（ｍｍ
３
）を示すグラフである。未処理マウスを白三角によって表す。図９Ｃは、ＣＡＲＴ細胞注入後の表示した日数における、０．２×１０
６
（黒三角）、０．７×１０
６
（黒丸）、又は２．２×１０
６
（白丸）個のＦＨＶＨ３３－ＣＤ８ＢＢＺを発現しているＴ細胞による処理後の図９Ｂに示すマウスの生存率を示すグラフである。未処理マウスを白三角によって表す。
図１０Ａは、ＣＡＲＴ細胞注入後の表示した日数における、ＳＰ６－ＣＤ８２８Ｚ（三角）、１１Ｄ５－３－ＣＤ８ＢＢＺ（四角）、ＦＨＶＨ３３－ＣＤ８ＢＢＺ（白丸）、又はＦＨＶＨ３３－ＣＤ８２８Ｚ（黒丸）ＣＡＲを発現しているＴ細胞で処理されたマウスにおいて測定された腫瘍体積（ｍｍ
３
）を示すグラフである。未処理マウスを菱形によって表す。
図１０Ｂは、ＣＡＲＴ細胞注入後の表示した日数における、ＳＰ６－ＣＤ８２８Ｚ（三角）、１１Ｄ５－３－ＣＤ８ＢＢＺ（四角）、ＦＨＶＨ３３－ＣＤ８ＢＢＺ（白丸）、又はＦＨＶＨ３３－ＣＤ８２８Ｚ（黒丸）ＣＡＲを発現しているＴ細胞で処理されたマウスの生存率を示すグラフである。未処理マウスを菱形によって表す。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明の実施形態は、抗原認識ドメインと、ＴＭドメインと、Ｔ細胞活性化ドメインとを含むＣＡＲであって、ＢＣＭＡに対して抗原特異性を有するＣＡＲを提供する。ＣＡＲは、Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン又はＴ細胞活性化ドメインに連結されている抗体の抗原認識ドメインを含有する、人工的に構築されたハイブリッドタンパク質又はポリペプチドである。ＣＡＲは、モノクローナル抗体の抗原結合特性を利用して、選択された標的に対するＴ細胞の特異性及び反応性を非ＭＨＣ拘束的にリダイレクトする能力を有する。非ＭＨＣ拘束性抗原認識は、抗原処理とは無関係に抗原を認識し、それによって、腫瘍エスケープの主な機序をバイパスする能力を、ＣＡＲを発現しているＴ細胞に与える。更に、Ｔ細胞で発現するとき、ＣＡＲは、有利なことに、内因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）のアルファ及びベータ鎖とは二量体化しない。
【００１０】
本発明のＣＡＲは、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ、ＣＤ２６９としても知られている）に対して抗原特異性を有する。ＢＣＭＡは、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバーである（例えば、Ｔｈｏｍｐｓｏｎｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１９２（１）：１２９－１３５（２０００）及びＭａｃｋａｙｅｔａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２１：２３１－２６４（２００３）を参照）。ＢＣＭＡは、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）及び増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）に結合する（例えば、Ｍａｃｋａｙら、前記、及びＫａｌｌｅｄｅｔａｌ．，ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｖｉｅｗｓ，２０４：４３－５４（２００５）を参照）。良性細胞の中でも、ＢＣＭＡは、大部分がプラズマ細胞及び成熟Ｂ細胞のサブセットにおいて発現すると報告されている（例えば、Ｌａａｂｉｅｔａｌ．，ＥＭＢＯＪ．，１１（１１）：３８９７－３９０４（１９９２）；Ｌａａｂｉｅｔａｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．，２２（７）：１１４７－１１５４（１９９４）；Ｋａｌｌｅｄら、前記；Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１９９（１）：９１－９７（２００４）；及びＮｇｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７３（２）：８０７－８１７（２００４）を参照）。ＢＣＭＡＲＮＡは、多発性骨髄腫細胞において普遍的に検出されており、ＢＣＭＡタンパク質は、数人の研究者らによって多発性骨髄腫患者からプラズマ細胞の表面上で検出されている（例えば、Ｎｏｖａｋｅｔａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０３（２）：６８９－６９４（２００４）；Ｎｅｒｉｅｔａｌ．，ＣｌｉｎｉｃａｌＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ，１３（１９）：５９０３－５９０９（２００７）；Ｂｅｌｌｕｃｃｉｅｔａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０５（１０）：３９４５－３９５０（２００５）；及びＭｏｒｅａｕｘｅｔａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０３（８）：３１４８－３１５７（２００４）を参照）。ＢＣＭＡの発現は、ホジキンリンパ腫細胞の表面上でも検出されている（例えば、Ｃｈｉｕｅｔａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０９（２）：７２９－７３９（２００７）を参照）。ヒトＢＣＭＡは、配列番号４２のアミノ酸配列を有する。
（【００１１】以降は省略されています）

関連特許