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公開番号2024150546
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-10-23
出願番号2024113188,2023097065
出願日2024-07-16,2015-10-06
発明の名称CAR発現ベクター及びCAR発現T細胞
出願人国立大学法人山口大学
代理人個人,個人,個人,個人,個人,個人
主分類C12N 15/62 20060101AFI20241016BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】T細胞においてキメラ抗原受容体(CAR)と共にT細胞の免疫機能促進因子を発現し、免疫誘導効果や抗腫瘍活性が高いCAR発現T細胞や、かかるCAR発現T細胞を作製するためのCAR発現ベクターを提供することを課題とする。
【解決手段】キメラ抗原受容体(CAR)をコードする核酸及びT細胞の免疫機能促進因子をコードする核酸を含有するCAR発現ベクターであって、前記免疫機能促進因子をコードする核酸が、インターロイキン7をコードする核酸及びCCL19をコードする核酸、SHP-1に対するドミナントネガティブ変異体をコードする核酸、又はSHP-2に対するドミナントネガティブ変異体をコードする核酸であるCAR発現ベクターや、前記CAR発現ベクターを導入したCAR発現T細胞を作製する。
【選択図】図6
特許請求の範囲【請求項１】
明細書に記載の発明。

発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＣＡＲ発現ベクターや、ＣＡＲ発現ベクターを導入したＣＡＲ発現Ｔ細胞や、ＣＡＲ発現Ｔ細胞を含有する抗がん剤に関する。
続きを表示（約 3,400 文字）【背景技術】
【０００２】
キメラ抗原受容体（Chimeric Antigen Receptor:以下、「ＣＡＲ」ともいう）は、がん細胞の細胞表面抗原を認識する一本鎖抗体と、Ｔ細胞の活性化を誘導するシグナル伝達領域を融合させた人工的なキメラタンパク質である。図１に示すように、腫瘍反応性を有さない通常の末梢血Ｔ細胞（末梢血Ｔリンパ球）にＣＡＲをコードする遺伝子を導入することにより、ＣＡＲを発現可能なＣＡＲ発現Ｔ細胞（以下、単に「ＣＡＲ－Ｔ細胞」ともいう）を大量に作製することが可能となる。かかるＣＡＲ－Ｔ細胞は腫瘍反応性を有し、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）との相互作用に依存することなくがん細胞の傷害を導くことが可能となる。
【０００３】
ＣＡＲ－Ｔ細胞の投与によるがん免疫療法、より具体的には、患者からＴ細胞を採取し、かかるＴ細胞にＣＡＲをコードする遺伝子を導入して増幅し、再度患者に移入する療法（非特許文献１参照）は、現在世界中で臨床試験が進行しており、白血病やリンパ腫などの造血器悪性腫瘍などにおいて有効性を示す結果が得られている。
【０００４】
近年、様々なＣＡＲ－Ｔ細胞の研究が進められてきた。例えば、ＣＤ１９抗原結合領域と細胞膜貫通領域と４－１ＢＢ共刺激シグナル領域と、ＣＤ３ζシグナル領域からなるＣＡＲをコードする核酸を含む修飾された自己ヒトＴ細胞を含む医薬組成物（特許文献１参照）や、がん細胞に結合する１つ又は複数のタグ付きタンパク質の配合物と同時に又は別々に被験体に投与される、前記タグ付きタンパク質に結合し、がん細胞死を誘導する１つ又は複数の治療的に有効な抗タグキメラ抗原受容体（ＡＴ－ＣＡＲ）発現Ｔ細胞集団（特許文献２参照）や、ヒト抗体１３９の抗原結合ドメイン、細胞外ヒンジドメイン、細胞膜貫通ドメイン、及び細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体をコードする核酸を含む細胞（特許文献３参照）や、キメラ抗原受容体をコードする核酸配列を含む細胞であって、該キメラ抗原受容体が抗原結合ドメイン、細胞膜貫通ドメイン、共刺激シグナル伝達領域、及び、SEQ ID NO：24のアミノ酸配列を含むＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む細胞（特許文献４参照）や、細胞表面膜上にＣＤ１９特異的キメラ受容体を発現及び保有し、該キメラ受容体が免疫細胞のエフェクター機能のための細胞内シグナリングドメイン、少なくとも１つの細胞膜貫通ドメイン及び少なくとも１つの細胞外ドメインからなり、細胞外ドメインがＣＤ１９特異的受容体を含む、遺伝子工学的に作製されたＣＤ１９特異的Ｔ細胞（特許文献５参照）や、細胞内ドメインとしてグルココルチロイド誘導腫瘍壊死因子受容体（ＧＩＴＲ）の細胞内ドメインを含むキメラ抗原受容体をコードする核酸が導入されたキメラ抗原受容体発現細胞（特許文献６参照）が提案されている。
【０００５】
しかしながら、ＣＡＲ－Ｔ細胞の生体内での生存効率が低い、あるいはＣＡＲ－Ｔ細胞により誘導される内在性Ｔ細胞の活性化や腫瘍局所への集積が不十分という問題や、がん細胞が有する腫瘍免疫回避機構であるＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１経路を介した免疫抑制シグナル及びがん微小環境において分泌されるＴＧＦ－βやＩＬ－１０などの免疫抑制因子によるＣＡＲ－Ｔ細胞の活性阻害という問題はこれまでの技術では解決されていない。そのため、十分な治療効果が認められないがん種や症例が存在しており、さらに効果的なＣＡＲ－Ｔ細胞、及びかかるＣＡＲ－Ｔ細胞を作製するための発現ベクターの作製が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
米国特許出願公開第２０１４／０１０６４４９号明細書
特表２０１４－５０４２９４号公報
特表２０１４－５１６５１０号公報
特表２０１４－５０７１１８号公報
特開２０１１－００４７４９号公報
国際公開第２０１３／０５１７１８号パンフレット
【非特許文献】
【０００７】
中沢洋三信州医誌６１（４）：１９７～２０３（２０１３）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
従来のＣＡＲ－Ｔ細胞においては、ＣＡＲのシグナル伝達領域にＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＣＤ３ζなどを含有させることによってＴ細胞の活性化能を高める工夫がされていたが、ＣＡＲ－Ｔ細胞による内在性Ｔ細胞の免疫誘導効果や腫瘍微小環境における免疫抑制機構に対する抵抗性については十分に増強されておらず、固形がんに対してはＣＡＲ－Ｔ細胞による治療効果は未だ達成されていない。そこで、本発明の課題は、Ｔ細胞においてＣＡＲと共にＴ細胞の免疫機能促進因子を発現し、免疫誘導効果や抗腫瘍活性が高いＣＡＲ－Ｔ細胞や、かかるＣＡＲ－Ｔ細胞を作製するためのＣＡＲ発現ベクターを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
発明者らは、ＣＡＲ－Ｔ細胞を利用したがん免疫療法において、より優れた免疫誘導効果や抗腫瘍活性を達成することを目的として、ＣＡＲ－Ｔ細胞の改良を試みた。その過程で、Ｔ細胞の免疫機能を促進する因子であるサイトカイン、ケモカイン、シグナル制御タンパク質に着目し、ＣＡＲと共に前記Ｔ細胞の免疫機能を促進する因子を発現するベクターを構築した。かかる発現ベクターをＴ細胞に導入したところ、従来のＣＡＲ－Ｔ細胞よりも優れた免疫誘導効果や抗腫瘍活性を有するＣＡＲ－Ｔ細胞を作製することができることを見いだし、本発明を完成した。
【００１０】
すなわち、本発明は以下に開示されるとおりのものである。
（１）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸及びＴ細胞の免疫機能促進因子をコードする核酸を含有するＣＡＲ発現ベクターであって、前記免疫機能促進因子をコードする核酸が、インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸、ＳＨＰ－１に対するドミナントネガティブ変異体をコードする核酸、又はＳＨＰ－２に対するドミナントネガティブ変異体をコードする核酸であることを特徴とするＣＡＲ発現ベクター。
（２）免疫機能促進因子をコードする核酸が、インターロイキン７をコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸であることを特徴とする上記（１）記載のＣＡＲ発現ベクター。
（３）ＣＡＲをコードする核酸とＴ細胞の免疫機能促進因子とをコードする核酸が、自己切断型ペプチドをコードする配列を介して連結されていることを特徴とする上記（２）記載のＣＡＲ発現ベクター。
（４）インターロイキン７をコードする核酸とＣＣＬ１９とをコードする核酸が、自己切断型ペプチドをコードする配列を介して連結されていることを特徴とする上記（２）又は（３）記載のＣＡＲ発現ベクター。
（５）ＣＡＲをコードする核酸が、ＦＩＴＣ又はＣＤ２０を認識する一本鎖抗体のポリペプチドをコードする核酸を含有することを特徴とする上記（１）～（４）のいずれか記載のＣＡＲ発現ベクター。
（６）ＣＡＲをコードする核酸が、ＣＤ８の細胞膜貫通領域のポリペプチドをコードする核酸を含有することを特徴とする上記（１）～（５）のいずれか記載のＣＡＲ発現ベクター。
（７）ＣＡＲをコードする核酸が、ＣＤ２８の細胞内領域、４－１ＢＢの細胞内領域、及びＣＤ３ζの細胞内領域のポリペプチドをコードする核酸を含有することを特徴とする上記（１）～（６）のいずれか記載のＣＡＲ発現ベクター。
（８）以下の（ａ）又は（ｂ）に示すベクターを導入したＣＡＲ発現Ｔ細胞。
（ａ）上記（１）～（７）のいずれか記載のＣＡＲ発現ベクター；
（ｂ）ＣＡＲをコードする核酸及びインターロイキン７をコードする核酸を含有するＣＡＲ発現ベクターと、ＣＡＲをコードする核酸及びＣＣＬ１９をコードする核酸を含有するＣＡＲ発現ベクター；
（９）上記（８）記載のＣＡＲ発現Ｔ細胞と薬学的に許容される添加剤とを含有する抗がん剤。
【発明の効果】
（【００１１】以降は省略されています）

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