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公開番号2024128959
公報種別公開特許公報(A)
公開日2024-09-24
出願番号2024034653
出願日2024-03-07
発明の名称コロナウイルス感染症治療薬のスクリーニング方法
出願人国立研究開発法人理化学研究所,個人
代理人弁理士法人特許事務所サイクス
主分類C12N 15/113 20100101AFI20240913BHJP(生化学;ビール;酒精;ぶどう酒;酢;微生物学;酵素学;突然変異または遺伝子工学)
要約【課題】コロナウイルスのRNA依存性RNAポリメラーゼまたはプライマーゼが結合する二次構造を形成する塩基配列を含むRNA、およびこのRNAを用いたコロナウイルス感染症の治療剤または予防剤のスクリーニング方法を提供すること。
【解決手段】シュードノット構造を形成する塩基配列を含むRNA、およびこのRNAを用いたコロナウイルス感染症の治療剤または予防剤のスクリーニング方法が提供される。
【選択図】図7
特許請求の範囲【請求項１】
配列番号２２に記載の塩基配列、または
配列番号２２に記載の塩基配列と少なくとも９０％の塩基配列同一性を有し且つシュードノット構造を形成する塩基配列を含む、ＲＮＡ。
続きを表示（約 880 文字）【請求項２】
配列番号２１に記載の塩基配列、または配列番号２１に記載の塩基配列と少なくとも９０％の塩基配列同一性を有し且つ３つのステム構造を形成する塩基配列を含む、ＲＮＡ。
【請求項３】
配列番号２０に記載の塩基配列、または配列番号２０に記載の塩基配列と少なくとも９０％の塩基配列同一性を有し且つシュードノット構造を形成する塩基配列を含む、ＲＮＡ。
【請求項４】
配列番号１９に記載の塩基配列、または配列番号１９に記載の塩基配列と少なくとも９０％の塩基配列同一性を有し且つ２つのステム構造を形成する塩基配列を含む、ＲＮＡ。
【請求項５】
シュードノット構造に加えて１つのステムループ構造を形成する、請求項１に記載のＲＮＡ。
【請求項６】
請求項１に記載のＲＮＡ、並びに
請求項２から４のいずれか一項に記載のＲＮＡから選択される１種、２種、または３種のＲＮＡを含む、セット。
【請求項７】
請求項１に記載のＲＮＡとプライマーゼ／ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）との結合を検出するアッセイを使用して、プライマーゼ／ＲｄＲｐのＲＮＡへの結合を阻害する化合物を同定する工程を含む、
コロナウイルス感染症の治療剤または予防剤のスクリーニング方法。
【請求項８】
核磁気共鳴（ＮＭＲ）分析により、請求項１に記載のＲＮＡについて化合物の結合部位を解析する工程をさらに含む、請求項７に記載のスクリーニング方法。
【請求項９】
同定された化合物の存在下で、請求項２から４のいずれか一項に記載のＲＮＡとプライマーゼ／ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）との結合を分析する工程をさらに含む、請求項７に記載のスクリーニング方法。
【請求項１０】
コロナウイルスがアルファコロナウイルス属またはベータコロナウイルス属のウイルスである、請求項７に記載のスクリーニング方法。
（【請求項１１】以降は省略されています）
発明の詳細な説明【技術分野】
【０００１】
本発明は、シュードノット構造を形成する塩基配列を含むＲＮＡに関する。本発明はさらに、このＲＮＡを用いたコロナウイルス感染症の治療剤または予防剤のスクリーニング方法に関する。
続きを表示（約 8,100 文字）【背景技術】
【０００２】
日本で承認されている新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）の治療薬のうち、レムデシビルとモルヌピラビルはＲＮＡ合成阻害剤である（非特許文献１）。レムデシビルはアデノシンヌクレオシドのプロドラッグである。生体内で加水分解などを経て生成される活性代謝物であるアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）の類似体が、ＲＮＡウイルスの複製に必要なＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼを阻害することで抗ウイルス作用を発揮する（非特許文献１）。モルヌピラビルもプロドラッグであり、Ｎ－ヒドロキシシチジン（ＮＨＣ）に代謝され細胞内に取り込まれた後、活性型であるリボヌクレオシド三リン酸化体（ＮＨＣ－ＴＰ）にリン酸化され、ＮＨＣ－ＴＰがウイルス由来ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼによりウイルスＲＮＡに取り込まれた結果、ウイルスゲノムのエラー頻度が増加し、ウイルスの増殖が阻害される（非特許文献２）。すなわちこれら２剤はＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）阻害剤である。ＲｄＲｐは、ＲＮＡウイルスの複製過程を担う重要な酵素であり、ＣＯＶＩＤ－１９治療薬の開発の有用な標的の一つである。しかしながら、両剤ともＣＯＶＩＤ－１９に対する治療効果が十分であるとはいえないものである。
【０００３】
コロナウイルスはプラス鎖一本鎖のＲＮＡをウイルスゲノムとして有し、その３′末端非翻訳領域（ＵＴＲ）から（－）鎖ゲノムＲＮＡとサブゲノムＲＮＡが転写される。非特許文献３は、コロナウイルス（－）鎖ＲＮＡ合成の開始に関する仮説的モデルを開示する。この仮説的モデルでは、プライマーゼがシュードノットのループ（ループ１）になる部分と３′末端が形成するステムに結合してプライマーゼが（－）鎖ＲＮＡの５′末端を合成することで、ゲノムの３′末端がループ１から離れてシュードノットが形成され、このシュードノットにＲｄＲｐが結合して（－）鎖が伸長することが提唱されている。しかしながら、コロナウイルスゲノムの３′末端においてシュードノット構造が形成されるかについては実験的に確認されてなかったため、コロナウイルス（－）鎖ＲＮＡの合成開始機構の詳細は分かっていなかった。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
Ghosh, Arun K et al. “Recent Drug Development and Medicinal Chemistry Approaches for the Treatment of SARS-CoV-2 Infection and COVID-19.” ChemMedChem vol. 17,22 (2022): e202200440. doi:10.1002/cmdc.202200440．
Imran M, Kumar Arora M, Asdaq SMB, Khan SA, Alaqel SI, Alshammari MK, Alshehri MM, Alshrari AS, Mateq Ali A, Al-Shammeri AM, Alhazmi BD, Harshan AA, Alam MT, Abida. Discovery, Development, and Patent Trends on Molnupiravir: A Prospective Oral Treatment for COVID-19. Molecules. 2021 Sep 24;26(19):5795. doi: 10.3390/molecules26195795. PMID: 34641339; PMCID: PMC8510125.
Zust, R., Miller, T. B., Goebel, S. J., Thiel, V. & Masters, P. S. Genetic interactions between an essential 3' cis-acting RNA pseudoknot, replicase gene products, and the extreme 3' end of the mouse coronavirus genome. J Virol 82, 1214-1228 (2008). https://doi.org:10.1128/JVI.01690-07
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上記のとおり、ＲｄＲｐは、ＲＮＡウイルスの複製過程を担う重要な酵素であるため、これを標的とするＣＯＶＩＤ－１９治療薬の開発が求められている。コロナウイルスのＲｄＲｐ阻害剤の開発には、（－）鎖ｇＲＮＡの転写開始点であり特異な構造を形成するウイルスゲノムの３′末端の二次構造の詳細を実験的に明らかにし、それをin vitroで再構築する必要がある。
【０００６】
よって、本発明の課題は、コロナウイルスのＲｄＲｐまたはプライマーゼが結合する二次構造を形成する塩基配列を含むＲＮＡを提供すること、およびこのＲＮＡを用いたコロナウイルス感染症の治療剤または予防剤のスクリーニング方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の３′ＵＴＲの塩基配列を基にＲＮＡコンストラクトを設計作成し、３′ＵＴＲの３′ＰＫと呼ばれている部分がステムループ構造とシュードノット構造を相互に排他的にとることをＮＭＲにより初めて原子レベルで証明した。Ｐ１ｐｋとＰ２領域によるシュードノット形成に伴い、ステムループ構造から抜け出し、３′末端の配列を含むＰ５ステムが開口することを明らかにした。ゲルシフトアッセイにより、ｎｓｐ７とｎｓｐ８の１対１混合物は、ステムループとシュードノットの両方のコンフォメーションと約２μＭの見かけの親和性で相互作用することが明らかになった。ＮＭＲ解析の結果、ｎｓｐ７とｎｓｐ８の相互作用はステムループ構造においてはＰ５ステムを不安定化させ、シュードノット型は変化させないことがわかった。これらの結果は、シュードノットとｎｓｐ７－ｎｓｐ８複合体の相互作用により、ウイルスｇＲＮＡの３′末端がＲＮＡ合成に適した一本鎖ＲＮＡに変換されることを示唆しており、シュードノットが抗ウイルス薬開発の有用な標的であることを示している。本発明はこの知見に基づくものである。
【０００８】
本発明によれば以下の発明が提供される。
［１］配列番号２２に記載の塩基配列、または配列番号２２に記載の塩基配列と少なくとも９０％の塩基配列同一性を有し且つシュードノット構造を形成する塩基配列を含む、ＲＮＡ。
［２］配列番号２１に記載の塩基配列、または配列番号２１に記載の塩基配列と少なくとも９０％の塩基配列同一性を有し且つ３つのステム構造を形成する塩基配列を含む、ＲＮＡ。
［３］配列番号２０に記載の塩基配列、または配列番号２０に記載の塩基配列と少なくとも９０％の塩基配列同一性を有し且つシュードノット構造を形成する塩基配列を含む、ＲＮＡ。
［４］配列番号１９に記載の塩基配列、または配列番号１９に記載の塩基配列と少なくとも９０％の塩基配列同一性を有し且つ２つのステム構造を形成する塩基配列を含む、ＲＮＡ。
［５］シュードノット構造に加えて、１つのステムループ構造を形成する、［１］に記載のＲＮＡ。
［６］［１］に記載のＲＮＡ、並びに［２］から［４］のいずれか一に記載のＲＮＡから選択される１種、２種、または３種のＲＮＡを含む、セット。
［７］［１］に記載のＲＮＡとプライマーゼ／ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）との結合を検出するアッセイを使用して、プライマーゼ／ＲｄＲｐのＲＮＡへの結合を阻害する化合物を同定する工程を含む、コロナウイルス感染症の治療剤または予防剤のスクリーニング方法。
［８］核磁気共鳴（ＮＭＲ）分析により、［１］に記載のＲＮＡについて化合物の結合部位を解析する工程をさらに含む、［７］に記載のスクリーニング方法。
［９］同定された化合物の存在下で、［２］から［４］のいずれか一に記載のＲＮＡとプライマーゼ／ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）との結合を分析する工程をさらに含む、［７］に記載のスクリーニング方法。
［１０］コロナウイルスがアルファコロナウイルス属またはベータコロナウイルス属のウイルスである、［７］に記載のスクリーニング方法。
［１１］コロナウイルスがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、［７］に記載のスクリーニング方法。
［１２］［１］から［４］のいずれか一に記載のＲＮＡをコードするＤＮＡ。
［１３］［１］から［４］のいずれか一に記載のＲＮＡについてＮＭＲ解析により二次構造の形成を測定する方法。
［１４］プライマーゼまたはＲｄＲｐのＲＮＡにおける結合部位を特定するための、［１３］に記載の測定方法。
［１５］［１］から［４］のいずれか一にＲＮＡをアッセイ溶液中で維持することを含む、シュードノット構造またはステムループ構造の形成方法であって、アッセイ溶液のカリウムイオン濃度がナトリウムイオン濃度よりも高い、方法。
［１６］［１］から［４］のいずれか一に記載のＲＮＡの少なくとも一部分に結合して、前記ＲＮＡとプライマーゼ／ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）との結合を阻害する、アンチセンスオリゴヌクレオチド。
［１７］下記（ａ）～（ｏ）からなる群から選択される何れかの塩基配列（但し、ウラシルはチミンであってもよい）を含む、［１６］に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド：
（ａ）ＧＧＧＡＡＵＡＧＣＵＵＣＵＵＡＧＧＡＧＡＡＵ（配列番号２５）、
（ｂ）ＡＡＵＡＧＣＵＵＣＵＵＡＧＧＡＧＡＡＵ（配列番号２７）、
（ｃ）ＧＡＵＵＡＡＡＧＵＵＡＡＵＵＡＣＧＡＧＡＡＵＵ（配列番号２８）、
（ｄ）ＡＡＡＧＵＣＧＡＧＡＡＵＵＣＡＵＵＣＡＵＵＣＵ（配列番号２９）、
（ｅ）ＵＵＧＵＧＣＵＡＵＧＵＡＧＵＵＡＣＧＡＧＡ（配列番号３０）、
（ｆ）ＵＧＵＧＡＧＡＵＵＡＡＡＧＵＵＡＡＣＵＡＣＡＵＣＵＡＣ（配列番号３１）、
（ｇ）ＵＵＧＵＧＣＵＡＵＧＵＡＧＵＵＡ（配列番号３２）、
（ｈ）ＵＧＵＧＡＧＡＵＵＡＡＡＧＵＵＡＡＣＵＡＣＡ（配列番号３３）、
（ｉ）ＡＵＵＣＵＣＣＵＡＡＧＡＡＧＣＵＡＵＵ（配列番号３４）、
（ｊ）ＵＡＵＧＵＡＧＵＵＡＣＧＡＧＡＡＵＵＣＡＵＵＣＵ（配列番号３５）、
（ｋ）ＡＡＡＧＵＣＧＡＧＡＡＵＵＣＡＵＵＣＡＵＵＣＵＧＣＡＣＡＡＧ（配列番号３６）、
（ｌ）ＡＵＣＵＡＣＵＵＧＵＧＣＵＡＵＧＵＡＧＵＵＡＣＧＡＧＡＡ（配列番号３７）、
（ｍ）ＵＧＵＧＡＧＡＵＵＡＡＡＧＵＵＡＡＣＵＡＣＡＵＣＵＡＵ（配列番号３８）、
（ｎ）（ａ）～（ｍ）の塩基配列において１から数個の塩基が欠失、置換、挿入又は付加塩基配列された塩基配列から成り、［１］から［４］のいずれか一に記載のＲＮＡとＲｄＲｐとの結合を阻害することができる、塩基配列、および
（ｏ）（ａ）～（ｍ）のいずれか一の塩基配列と９０％塩基配列同一性を有する配列を含み、［１］から［４］のいずれか一に記載のＲＮＡとＲｄＲｐとの結合を阻害することができる、塩基配列。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
（Ａ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のゲノムＲＮＡと二次構造の模式図。（Ｂ）３′ＰＫ領域の二次構造の模式図。ＢＳＬ：バルジドステムループ、ＨＶＲ：超可変領域、ＯＮＭ：オクタヌクレオチドモチーフ、Ｓ２Ｍ：ステムループＩＩ様モチーフ、３′ＰＫ：ＢＳＬの一部とＢＳＬとＨＶＲ構造の間のステムを含む領域。
Ｚｕｓｔら（非特許文献３）の提案に基づき、若干の修正を加えたコロナウイルスの仮想的なゲノムＲＮＡ複製開始モデル。（Ａ）３′ＰＫにステムループ構造が形成される。（Ｂ）ｎｓｐ７、ｎｓｐ８、ｎｓｐ９からなるプライマーゼがＰ５ステムに結合する。（Ｃ）プライマーゼは（－）鎖ｇＲＮＡのプライマーを転写する。（Ｄ）プライマーがｇＲＮＡの３′末端にプライミングされ、Ｐ５ステムが対になっていないため、シュードノット構造が形成される。（Ｅ）Ｎｓｐ１２がシュードノット構造とｎｓｐ７－ｎｓｐ８－ｎｓｐ９複合体に結合し、（－）鎖ｇＲＮＡを伸長させる。
（Ａ）ＳＬ、（Ｂ）ＰＫ、（Ｃ）ＳＬＰ４、（Ｄ）ＰＫＰ４の３′ＰＫ断片の２ＤＮＯＥＳＹスペクトルのイミノプロトン領域と、ＮＭＲに基づく対応する二次構造との比較。図では簡略化のため、塩基番号の最初の２桁（２９ＸＸＸ）は省略した。塗りつぶした丸で示したＮＯＥはＧ６３９－ＵおそらくＵ６３７またはＵ６５０である。アスタリスクで示したクロスピークはＵ６６５とＵ８４６イミノプロトン間の塩基対内ＮＯＥである。Ｕ８４５－★はＵ８４５とＵ６６５またはＵ８４６間のＮＯＥ、Ｕ８４７－★はＵ８４７とＵ６６５またはＵ８４６間のＮＯＥ。
ｎｓｐ７およびｎｓｐ８との結合について試験した４つのＲＮＡ断片（ＳＬ、ＰＫ、ＳＬＰ４、ＰＫＰ４）のゲル画像。一番下の矢印（ウエルから最も離れたもの）で示したバンドは構造を形成したＲＮＡ、下から二番目の矢印で示したバンドは構造を形成していない（直鎖状）ＲＮＡに対応し、上から二番目と一番目の矢印で示したバンドはそれぞれタンパク質と結合したＲＮＡ、タンパク質と結合したＲＮＡの別のコンフォーマーに対応する。ＲＮＡ断片は、ｎｓｐ８またはｎｓｐ７－ｎｓｐ８混合物の添加により、バンドがシフトすることがわかった。
ＲＮＡとｎｓｐ７－ｎｓｐ８混合物の複合体形成による構造変化。（Ａ）ＰＫＰ４，ｎｓｐ７，ｎｓｐ８の１：２：２混合物，（Ｂ）ＳＬＰ４，ｎｓｐ７，ｎｓｐ８の１：１：１混合物，（Ｃ）ｎｓｐ７とｎｓｐ８の１：１混合物，（Ｄ）ＰＫＰ４，および（Ｅ）ＳＬＰ４の１Ｄ
１
ＨＮＭＲスペクトルのイミノプロトン領域。星印で示したタンパク質によるシグナルは、ＰＫＰ４－ｎｓｐ７－ｎｓｐ８混合物でのみ観察された。
ｎｓｐ７－ｎｓｐ８混合物の結合によるＳＬＰ４とＰＫＰ４の構造変化。
１
Ｈ－
１
Ｈ２ＤＮＯＥＳＹスペクトルのイミノプロトン領域（Ａ）ＳＬＰ４，（Ｂ）ＰＫＰ４，（Ｃ）ＳＬＰ４，ｎｓｐ７，ｎｓｐ８の１：１：１混合物および（Ｄ）ＰＫＰ４，ｎｓｐ７，ｎｓｐ８の１：２：２混合物。
ｎｓｐ７－ｎｓｐ８混合物の結合によるＳＬＰ４とＰＫＰ４の構造変化。（Ｅ）ｎｓｐ７－ｎｓｐ８とＳＬＰ４の結合の模式図。ＳＬＰ４に存在するＰ５ステム領域の解離は、塩基対内ＮＯＥシグナルの欠如によって確認された。（Ｆ）ｎｓｐ７－ｎｓｐ８と結合したＰＫＰ４の二次構造の模式図。ｎｓｐ７－ｎｓｐ８との結合による化学シフトの変化Δδを示す。
コロナウイルスの改変（－）鎖ゲノムＲＮＡ複製開始仮説モデル。本発明者らにより提案されるモデルである。（Ａ）３′ＰＫにステムループ構造が形成される。（Ｂ）ｎｓｐ７－ｎｓｐ８複合体（図中ではＰｒｉｍａｓｅと記載）がステムループ構造に結合するか、（Ｃ）シュードノット構造に直接結合し、Ｐ５が一本鎖に変換される。（Ｄ）プライマーゼによりＲＮＡプライマーが合成される。（Ｅ）Ｎｓｐ１２がシュードノット構造およびプライマーゼに結合し、（－）鎖ｇＲＮＡを伸長させる。
Ｐ１の２ＤＮＯＥＳＹスペクトルのイミノプロトン領域と、ＮＭＲに基づく対応する二次構造との比較。図では簡略化のため、塩基番号の最初の２桁（２９ＸＸＸ）は省略した。
Ｐ２の２ＤＮＯＥＳＹスペクトルのイミノプロトン領域と、ＮＭＲに基づく対応する二次構造との比較。図では簡略化のため、塩基番号の最初の２桁（２９ＸＸＸ）は省略した。
（Ａ）ＳＬ，（Ｂ）ＳＬＬ，（Ｃ）ＳＬＰ４のイミノプロトン領域。（Ｄ）ＳＬ（Ｅ）ＳＬＬ，（Ｆ）ＳＬＰ４のＮＭＲによる二次構造の模式図。ＳＬＬとＳＬＰ４のＵ２９６５５とＵ２９６５６（Ｐ２ステムに含まれる）に起因するシグナルは、ＳＬに対して著しく低い強度を示した。
（Ａ）ＰＫ、ＳＬ、ＳＬＰ４、ＰＫＰ４のゲルシフトアッセイ。下から（移動度の早い）順に矢印で、タンパク質と結合していないが構造を形成しているRNA、タンパク質と結合していない直鎖状ＲＮＡ、ＲＮＡ－ｎｓｐ７－ｎｓｐ８複合体を示した。（Ｂ）各ＲＮＡ断片のＨｉｌｌ－Ｌａｎｇｍｕｉｒプロット。ＰＫのＫｄは５．１μＭ、ＳＬは５．５μＭ、ＰＫＰ４は２．５μＭ、ＳＬＰ４は２．３μＭであった。パラメータθ＝１－（［タンパク質と結合していないＲＮＡ］／［ＲＮＡ総量］），［タンパク質と結合していないＲＮＡ］／［ＲＮＡ総量］はタンパク質とＲＮＡを混合したサンプルの各タンパク質と結合していないが構造を形成しているＲＮＡのバンドとＲＮＡのみの構造を形成しているＲＮＡのバンドの体積比から求めた。Ｐ４とＬ４／５を持つ断片は、他の断片よりも親和性が高いことがわかった。また、全ての断片がｎ＞１を示し、ｎｓｐ７－ｎｓｐ８が正の協同性を示すことが示された。
（Ａ）ｎｓｐ７－ｎｓｐ８、（Ｂ）ＰＫＰ４－ｎｓｐ７－ｎｓｐ８混合物、（Ｃ）ＳＬＰ４－ｎｓｐ７－ｎｓｐ８混合物の
１
Ｈ－
１
Ｈ２ＤＮＯＥＳＹスペクトルのタンパク質アミドプロトン領域。ＰＫＰ４やＳＬＰ４の添加により、ＲＮＡ－タンパク質複合体による新たなＮＯＥシグナルが多数観測された。ＲＮＡ－タンパク質複合体のＮＯＥパターンは、結合するＲＮＡの構造によって部分的に異なることがわかった。
実施例４のアンチセンスＲＮＡを用いた実験の電気泳動のゲル写真である。
実施例５のアンチセンスＲＮＡを用いた実験の電気泳動のゲル写真である。
アンチセンスＲＮＡ＃２（配列番号２８）、＃３（配列番号２９）、＃４（配列番号３０）および＃５（配列番号３１）のＳＬＰ４およびＰＫＰ４への結合位置を示す概要図である。
アンチセンスＲＮＡ＃８（配列番号３４）、＃９（配列番号３５）、＃１０（配列番号３６）および＃１１（配列番号３７）のＳＬＰ４およびＰＫＰ４への結合位置を示す概要図である。
実施例６のアンチセンスＲＮＡを用いた実験の電気泳動のゲル写真である。
実施例６における、結合していないＲＮＡのバンドボリューム比を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下に記載する本発明の説明は、代表的な実施形態や具体例に基づいてなされることがあるが、本発明はそのような実施形態に限定されるものではない。なお、本明細書において「～」を用いて表される数値範囲は「～」の前後に記載される数値を下限値および上限値として含む範囲を意味する。
（【００１１】以降は省略されています）

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